高效液相色谱法测定山黄祛痛喷雾剂中秋水仙碱含量

虞 阳，林新艳，唐雯慧，殷书梅

（江苏康缘阳光药业有限公司，江苏 南京 210046）

高效液相色谱法测定山黄祛痛喷雾剂中秋水仙碱含量

虞 阳，林新艳，唐雯慧，殷书梅

（江苏康缘阳光药业有限公司，江苏 南京 210046）

目的 建立测定山黄祛痛喷雾剂中秋水仙碱含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为Phenomenex Luna C18柱（150 mm× 4．6 mm，5 m），流动相为甲醇－水（45∶55），检测波长为245 nm，柱温为30℃，进样量为10 L。结果 秋水仙碱质量浓度在2．0～50．1 g／mL范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程为 A＝35 181．93 C＋8．72(r＝0．999 9)，平均加样回收率为 100．31%，RSD为2．23%（n＝9）。结论 该方法分离效率高、分析速度快、灵敏度高、易于实现自动化，为后期产品的质量控制和评价提供了科学依据。

高效液相色谱法；山黄祛痛喷雾剂；丽江山慈菇；秋水仙碱

山黄祛痛喷雾剂为中药注册6类新药，源自江苏省中医院汪悦教授临床经验方，用于治疗痛风急性发作期的外用抗炎镇痛。本品处方君药丽江山慈菇中所含秋水仙碱对急性痛风关节炎具有选择性抑制作用，可与微管蛋白结合，妨碍有丝分裂中纺锤体的功能，并引起粒细胞和其他可移动细胞中原纤维微管解聚和消失，从而达到抗炎镇痛的效果。本试验中采用高效液相色谱（HPLC）法，以秋水仙碱作为山黄祛痛喷雾剂的含量控制指标进行方法学研究，现报道如下。

1 仪器与试药

安捷伦1200型高效液相色谱仪，DAD二极管阵列检测器（安捷伦科技有限公司）；Mettler AB135－S型十万分之一电子天平（梅特勒公司）；SK8200HP型超声波清洗器（上海科岛自动化系统有限公司）；甲醇为色谱纯（默克公司）；水为重蒸馏水（自制）；秋水仙碱对照品（西格玛公司，批号为2005985，标示纯度98．0%）；山黄祛痛喷雾剂样品，阴性制剂（江苏康缘阳光药业有限公司）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Phenomenex Luna C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm，美国菲罗门公司）；流动相：甲醇－水（45∶55）；检测波长：245 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。在此色谱条件下，秋水仙碱与其他相邻组分色谱峰的分离度大于1．5，按秋水仙碱峰计算，理论板数应不低于1500。色谱图见图1。

2．2 溶液制备

精密称取秋水仙碱对照品适量，置棕色瓶中，加甲醇制成每1 mL含0．01 mg的溶液，即得对照品溶液；分别取山黄祛痛喷雾剂（批号分别为 20100302，20100501，20100502，20100503，20110901）1 mL，精密取10 mL置容量瓶中，以70%甲醇定容至刻度，摇匀，再精密取1 mL，置10 mL容量瓶中，以70%甲醇定容至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0．45 μm）过滤，即得供试品溶液；取缺丽江山慈菇的阴性制剂1 mL，同供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察：按对照品溶液的制备方法，制备质量浓度为每 1 mL含秋水仙碱 0．100 2 mg的标准贮备液，摇匀。吸取标准贮备液1 mL，分别置50，25，10，5， 2 mL容量瓶中，分别加甲醇制成质量浓度为2．0，4．0，10．0，20．0，50．1 μg／mL的系列标准溶液。吸取上述溶液各10 μL进样，测定，以峰面积（A）为纵坐标、对照品质量浓度（C，μg／mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程 A＝35 181．93 C＋8．72，r＝0．999 9（n＝5）。结果表明，秋水仙碱质量浓度在2．0～50．1 μg／mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：取质量浓度为10．0 μg／mL的标准溶液 10 μL，连续进样 6次测定。结果的 RSD＝0．25%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液（批号为20100302），分别于0，2，4，8，12，24 h时进样测定。结果的 RSD为1．03%（n＝6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为20100302）依法制备供试品溶液，重复进样6次，测定含量。结果的RSD＝1．99%（n＝6），表明该方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为20100302）0．5 mL，精密取10 mL，置容量瓶中，分别精密加秋水仙碱对照品溶液（质量浓度为0．100 2 g／L）2．1，2．5，3．1 mL，依法制备待测溶液，各重复进样3次，按拟订色谱条件进样测定其含量。结果见表1。

表1 秋水仙碱加样回收试验结果（n＝9）

2．4 样品含量测定

按拟订方法，对4批样品（批号分别为20100501，20100502，20100503，20110901）中秋水仙碱成分的含量进行检测。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝4，g／L）

3 讨论

山黄祛痛喷雾剂属中药复方制剂，具有清热解毒、消肿止痛的功效，用于治疗急性痛风性关节炎湿热蕴毒证。本品处方君药为百合科山慈菇属植物丽江山慈菇Iphigenia indica Kunth的干燥球茎，味微苦，性辛、寒，有毒，用于痛风、手足关节红肿疼痛、疮疡肿毒、瘰疬结核、虫蛇咬伤。其种子、球茎、叶、茎含秋水仙碱（colchicine）、角秋水仙碱（cornigerine）、β－光秋水仙碱（β－lumicolchicine）及N－甲酸－N－去乙酰秋水仙碱（N－formyl－N－deacetylcolchicine）等多种生物碱[1－2]，而秋水仙碱是针对痛风性关节炎有效的首选抗炎剂。

本试验中以秋水仙碱为指标，采用简便、准确的高效液相色谱法进行了含量测定方法的研究，结果显示，该方法选择性好，阴性无干扰。综合文献及前期自购丽江山慈菇药材所测含量数据，丽江山慈菇中秋水仙碱的含量变化幅度较大（0．1% ～0．61%）[3]，其影响因素有生长年限、采收期、产地等。根椐实测丽江山慈菇药材中秋水仙碱的含量及中试产品的秋水仙碱转移率，并结合生产实际，暂订本品含量限度为每1 mL含丽江山慈菇以秋水仙碱（C22H25NO6）计，不得少于0．27 mg。

[1]田素英，陈周全．山慈菇中秋水仙碱醇提工艺的优选[J]．中草药，2002，33（8）：708－710．

[2]何嘉莉，肖 莹．从文献统计探讨急性痛风性关节炎的中医药治疗规律[J]．浙江中医杂志，2009，44（3）：224－225．

[3]袁理春，徐中志，赵 琪，等．丽江山慈姑秋水仙碱HPLC测定[J]．西南农业学报，2007，20（1）：120－122．

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)02－0059－03

虞阳（1989－），男，汉族，大学本科，助理工程师，主要从事新药研究与开发工作，（电话）025－85661972（电子信箱 ）yugenius＠ qq．com；殷书 梅（1966－），女，汉族，大学本科，主任中药师，主要从事新药研究与开发工作，本文通讯作者，（电话）025－85661972（电子信箱）yin－shumei＠163．com。

2015－02－05；

2015－05－08)