藏药十八味诃子利尿丸对高原糖尿病大鼠血糖的影响*

梁沛余， 尹磊晶， 华欠桑多 ， 吴 穹

(青海大学医学院，青海西宁 810001)



藏药十八味诃子利尿丸对高原糖尿病大鼠血糖的影响*

梁沛余， 尹磊晶， 华欠桑多 ， 吴 穹

(青海大学医学院，青海西宁 810001)

目的:探讨十八味诃子利尿丸对高原糖尿病早期大鼠的血糖及胰岛、肾组织形态学的影响。方法:取大鼠24只，随机分为藏药组、模型组和对照组，每组8只。藏药组和模型组采用多次腹腔注射四氧嘧啶法建立高原(2 295 m)糖尿病大鼠模型，对照组注射等量生理盐水。建模后藏药组灌胃十八味诃子利尿丸，模型组和对照组给予等量生理盐水。灌胃5 d后观察各组大鼠血糖变化，并取出胰腺和肾脏用苏木精-伊红染色(hematoxylin eosin，HE)染色观察胰岛和肾组织的损伤情况。结果:藏药组血糖比模型组降低(P<0.05)；胰腺HE染色显示藏药组相比于模型组胰岛损伤较轻；肾脏HE染色显示3组肾组织均良好，无明显损伤。结论：十八味诃子利尿丸有明显的降糖作用，可能与促进胰岛B细胞的修复有关，使用四氧嘧啶短期建立糖尿病模型对肾组织损伤较小。

十八味诃子利尿丸；糖尿病大鼠；血糖

十八味诃子利尿丸由诃子、熊胆、红花、小檗皮、余甘子等十八味药材制成，收录于《卫生部药品标准·藏药》，是经反复筛选总结而得出的具有益肾固精及利尿功效的处方。十八味诃子利尿丸可应用于肾病、尿频、腰背酸痛、遗精、糖尿病等病症，是藏医临床上常用的降糖药物之一。为了阐明其藏医理论和临床用药基础，本课题拟通过动物实验研究，观察十八味诃子利尿丸对四氧嘧啶高原糖尿病大鼠的降糖作用，为高原藏药的进一步推广提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 清洁级雄性SD大鼠，体质量170～350 g，由青海大学医学院病理生理学教研室提供，动物合格证号：SCXK(甘)2009-0004。动物于实验前适应性喂养3 d，自由摄食、饮水，自然光照。

1.1.2药品与试剂 十八味诃子利尿丸由青海大学附属医院藏医门诊提供；四氧嘧啶由北京索莱宝科技有限公司提供，批号：830B024；0.9 %氯化钠注射液由湖南科伦制药有限公司提供，批号：G150122D；50 %葡萄糖注射液由湖南科伦制药有限公司提供，批号：C140425A；罗氏活力型血糖试纸，批号：23471421。

1.1.3仪器 罗康全活力型血糖仪购自罗氏诊断产品中国有限公司；PL3002电子天平购自梅特勒-托利多仪器中国有限公司。

1.2方法

1.2.1大鼠称重及测量正常空腹血糖实验期间各组大鼠均给予普通饲料喂养且自由饮水。将大鼠禁食不禁水12 h即刻称重并剪尾取血测量空腹血糖值。

1.2.2四氧嘧啶糖尿病大鼠模型的建立 取SD大鼠24只，随机分为3组，每组8只，依次为藏药组、模型组和对照组。根据文献[1]使用改进的建模方法建立糖尿病模型。各组大鼠在给药前禁食不禁水12 h,藏药组和模型组腹腔注射四氧嘧啶100 mg/kg，对照组腹腔注射等量生理盐水，24 h后藏药组和模型组补注四氧嘧啶100 mg/kg，空白对照组补注等量生理盐水，且各组每次给药2.5 h、5 h时均灌胃50 %葡萄糖注射液1 mL/150g。末次给药72 h后，各组测空腹血糖，若符合糖尿病标准(>11.1 mmol/L)[2]，则表示建模成功。

1.2.3各组灌胃给药 藏药组每日灌胃十八味诃子利尿丸350 mg/kg，模型组和空白对照组每日灌胃等量生理盐水，连续灌胃给药5 d。

1.2.4大鼠称重、血糖测定及组织苏木精-伊红染色(hematoxylin eosin，HE)观察 连续灌胃5 d后，各组大鼠均禁食不禁水12 h,称重，同时测定各组大鼠空腹血糖。将各组大鼠断头处死，快速剖取胰腺和肾脏，采用HE染色观察胰岛和肾组织损伤情况。

2 结果

2.1大鼠体重比较 模型组实验后体重减轻，与建模前比较差异有统计学意义(P<0.05)，模型组实验后体重轻于其他两组(P<0.05)；藏药组实验后体重减少，但与建模前比较差异无统计学意义(P>0.05)；藏药组处死前体重与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组大鼠实验前后体重变化

2.2各组大鼠血糖测定比较 与空白对照组比较，藏药组、模型组糖尿病模型建立成功(P<0.05)；与模型组相比，藏药组降糖效果好(P<0.05)。见表2。

表2 十八味诃子利尿丸对大鼠血糖的影响

2.3胰岛组织形态学观察 正常胰岛组织呈现团索状，胰岛较大，细胞浆丰富，无空泡样变性，岛内细胞形态饱满；与对照组相比，模型组胰岛萎缩，细胞浆减少，细胞皱缩，部分胰岛细胞出现空泡样变性；藏药组与模型组相比，胰岛增大，细胞空泡样变较模型组减轻。见图1。

3 讨论

四氧嘧啶对胰岛B细胞有特异的毒性作用，通过产生自由基损伤胰岛B细胞脱氧核糖核酸，并且可激活多聚腺苷二磷酸核糖体合成酶的活性，使辅酶Ⅰ的含量下降，从而导致信使核糖核酸受损，胰岛素合成减少，最终造成糖尿病的产生。十八味诃子利尿丸中的小檗皮[3]、余甘子[4]等药物成分根据现代研究均具有降糖作用，作为藏医临床的常用药物，阐明其药效理论基础，对于高原藏药的推广具有重大意义。

本实验研究发现十八味诃子利尿丸可改善糖尿病症状，减缓体重的持续性下降，并且具有良好的降糖效果。通过3组胰腺HE染色形态学观察可知藏药组相比于模型组胰岛面积较大，岛内细胞空泡样变性程度减轻，损伤较轻，推测十八味诃子利尿丸可以促进胰岛的修复，减轻四氧嘧啶对胰岛B细胞的损伤，其降糖作用与其对胰岛保护修复密切相关。根据文献[5]四氧嘧啶建立糖尿病模型会造成血尿素氮、肌酐的改变，而本实验肾脏HE染色形态学观察发现3组无明显差异，说明四氧嘧啶建立糖尿病模型时对肾脏有损伤，但损伤在短时间内对机体的影响较小，并不能造成显著的形态学改变。

综上所述，本实验结果为十八味诃子利尿丸在临床上的降糖作用提供了理论依据，但其具体的作用机制仍有待于进一步研究。

[1] 于竹芹，李晓丹，徐新颖，等.海带在四氧嘧啶糖尿病大鼠模型中的降糖作用[J].中国药理学通报，2011，27(5)：651-655.

[2] 张峰，高永峰，张继国.四叶参多糖对糖尿病大鼠血糖及免疫功能的影响[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(2):184-186.

[3] 张燕，孟宪丽，岳丽珺，等.藏药小檗皮对糖尿病模型小鼠血糖水平影响的初步研究[J].现代生物医学进展，2013，19(13)：3619-3622.

[4] 郭志英，黄玉香，王国权.余甘子治疗糖尿病及其并发症的研究进展[J].海峡药学，2014,26(12)：1-4.

[5] 陈红艳，杨新波，王建华，等.四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的制备及影响因素[J].军事医学科学院院刊，2005,29(6)：535-537.

Effect of Shibawei Keziliniao pills on blood glucose of rats with plateau diabetes

LIANG Peiyu, YIN Leijing, Huaqiansangduo, WU Qiong

(MedicalCollegeofQinghaiUniversity,Xining810001,China)

Objective:To explore the effect of Shibawei Keziliniao (Eighteen-flavor myrobalan diuretic) pills on blood glucose, pancreas and kidney of rats with early plateau diabetes. Methods:24 rats were randomly divided into Tibetan medicine group, model group and blank control group, 8 rats in each group. In the Tibetan medicine group and model group, the method of multiple abdominal injection of alloxan was adopted to establish the plateau (2 295 meters) diabetic rat model, and the rats in the blank control group received the same amount of saline solution by abdominal injection. After the model was established, the rats in the Tibetan medicine group were given Shibawei Keziliniao pills by gavage, and those in the model group and blank control group were given the equivalent saline. The change of blood glucose was observed 5 days after gavage, and the pancreas and kidney were removed to observe their damages by hematoxylin-eosin (HE) staining. Results:The blood glucose in the Tibetan group, compared with that in the model group, significantly reduced (P<0.05); HE staining showed that pancreatic injury condition in the Tibetan medicine group was better than that in the model group, and that the renal tissues of the three groups were good without obvious damage. Conclusion:Shibawei Keziliniao pills have obvious hypoglycemic effect, and may be related to the promotion of the restoration of β cells in pancreatic islet; using alloxan to establish short-term diabetes model has less damage to the kidney.

Shibawei Keziliniao pills; Diabetic rats; Blood glucose

教育部“春晖计划”合作科研项目(Z2012079)；2014年青海大学医学院大学生科技创新基金项目

吴 穹

2015-12-18)