蒙药白蒿三味汤散剂质量标准研究

金 军，莲 花，那生桑

(1．内蒙古医科大学蒙医药研究院，内蒙古 呼和浩特 010110；

2．内蒙古医科大学蒙医药学院，内蒙古 呼和浩特 010110)

蒙药白蒿三味汤散剂质量标准研究

金 军1，莲 花2，那生桑1

(1．内蒙古医科大学蒙医药研究院，内蒙古 呼和浩特 010110；

2．内蒙古医科大学蒙医药学院，内蒙古 呼和浩特 010110)

目的 建立白蒿三味汤散剂中绿原酸和盐酸麻黄碱的鉴别及含量测定方法。方法 采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的麻黄及小白蒿进行鉴别。以高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中盐酸麻黄碱的含量，色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4．6 mm，5 m)，流动相为乙腈-0．025 mol／L磷酸溶液（10∶90），流速为1．0 mL／min，检测波长为210 nm，柱温为30℃，进样量为10 L。结果薄层鉴别色谱特征斑点明显。盐酸麻黄碱的线性范围为0．13～0．56 g，线性关系良好（r＝0．999 8），平均加样回收率为98．38%，RSD为1．41% (n＝5)。结论 TLC法鉴别该制剂中小白蒿和麻黄及用高效液相色谱仪测定盐酸麻黄碱的方法简便准确、专属性强，可作为白蒿三味汤散剂的质量控制方法。

白蒿三味汤散剂；高效液相色谱法；盐酸麻黄碱；绿原酸；薄层色谱鉴别

白蒿三味汤散剂是内蒙古阿拉善盟特戈熙甲状腺病蒙医专科医院多年临床经验方，由小白蒿、麻黄、酒糟3味药材组方，具有发汗排毒、去肝火、消肿的功效，主治各种热性疾病、亚健康症。小白蒿，蒙名艾给，系菊科蒿属植物，具有止血、消肿、消“奇哈”、治伏痈疽等功效[1]，主治各种出血、关节肿胀、肾热、月经不调、疮痈等[2]，主要化学成分有黄酮类、香豆素生物碱类，绿原酸为其主要活性成分[3-4]。麻黄具有消肿、发汗、止咳、平喘的功效，主治肝热、外伤出血、内伤、关节疼痛等[5-7]，化学成分有生物碱、黄酮、鞣质等[8]，盐酸麻黄碱为其有效成分。笔者以盐酸麻黄碱为指标进行含量测定，控制成品的质量，分离效果好，专属性强，简便准确，可用于本制剂的质量控制。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

LC-20AT型高效液相色谱仪；SPD-20AV型检测器；KQ-250DE型数控超声波清洗器；JA5003A型电子天平(上海菁海仪器有限公司)；硅胶薄层G板(青岛海浪硅胶干燥剂有限公司，批号20131221)。

1．2 试药

盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号为171241-200506）；水为超纯水，乙腈为色谱纯，磷酸、氨水等其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 薄层色谱（TLC）鉴别

2．1．1 麻黄

称取盐酸麻黄碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，得对照品溶液。取单药粉末1 g和制剂3 g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷10 mL，加热回流1 h，过滤，滤液挥干，残渣加甲醇2 mL震摇，滤过，取滤液作为药材溶液和供试品溶液。另按处方比例称取除麻黄外的其他蒙药，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液[9]。

照2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB薄层色谱法，吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20∶5∶0．5）为展开剂，展开，取出，喷茚三酮试液，置105℃烘干箱中，直至斑点显色清晰[10]。药材溶液和供试品溶液色谱中，与对照品溶液色谱相应的位置上显相同的红色斑点，阴性对照品溶液色谱中则无此斑点,见图1A。

2．1．2 小白蒿

称取绿原酸对照品，精密称定，加甲醇制备质量浓度为1 g／L的溶液，得对照品溶液。取小白蒿药材1 g、制剂2 g研细，置锥形瓶中，加50%甲醇50 mL，加塞称重，过夜；超声处理40 min，补充甲醇的损失量，摇匀，滤过，滤液蒸干；残渣加50%甲醇2 mL溶解，作为药材溶液和供试品溶液[11]。另按处方比例称取去除小白蒿的其他蒙药，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

照2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB薄层色谱法吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7∶2．5∶2．5）的上层溶液作展开剂，展开取出，晾干。置紫外灯下（365 nm）检视。药材溶液和供试品溶液色谱中，与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点[12]，阴性对照品溶液色谱则无此斑点，见图1B。

2．2 盐酸麻黄碱含量测定

2．2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0．025 mol／L磷酸溶液（10∶90）；流速：1．0 mL／min；检测波长：210 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。盐酸麻黄碱峰计算不低于3 000。分别取盐酸麻黄碱对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液注入液相色谱仪中，记录色谱图，见图2。盐酸麻黄碱的保留时间约为6．7 min，阴性对照品在盐酸麻黄碱位置处无峰，即其他成分对其测定无干扰。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于3 000。

图1 薄层色谱图

图2 高效液相色谱图

2．2．2 溶液制备

精密称取105℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品7．26 mg，置50 mL容量瓶中，加流动相并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0．145 2 g／L的对照品溶液。

精密称取复方制剂1．0 g，置100 mL具塞锥形瓶中，加30 mL水和2 mL浓氨水，超声30 min（功率100 W，频率50 kHz）滤过，置分液漏斗中，加乙醚萃取5次，每次25 mL，合并乙醚萃取液，然后将乙醚萃取液挥干，残渣用甲醇约5 mL溶解移置25 mL容量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液[13]。

按处方比例及工艺，制备缺盐酸麻黄碱的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含盐酸麻黄碱的阴性对照品溶液。

2．2．3 方法学考察

线性关系考察：精密量取盐酸麻黄碱对照品溶液3 mL，置10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密量取溶液3，5，7，10，13 μL，注入液相色谱仪。按上述色谱条件测定，以对照品进样量为横坐标(X，μg)、峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得线性回归方程 Y＝2 262 046 X-174 389。结果表明，盐酸麻黄碱进样量在0．13～0．56 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取上述同一质量浓度的盐酸麻黄碱对照品溶液，同法测定5次，每次10 μL，测定盐酸麻黄碱峰面积。结果的 RSD为1．54%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取样品（批号为150706），依法制备供试品溶液，取10 μL，于0，2，4，6，8 h时进样，依法测定，记录峰面积。结果的 RSD为1．51%（n＝5），表明供试品溶液中盐酸麻黄碱含量在8 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为150706），依法制备成5份供试品溶液并测定盐酸麻黄碱的含量。结果的 RSD为1．8%（n＝5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的同一样品5份，每份0．28 g，各加2．50 mg的盐酸麻黄碱对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定，并计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸麻黄碱加样回收试验结果（n＝5）

2．2．4 样品含量测定

取样品3批，按拟订的含量测定方法进行测定。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(mg／g)

3 讨论

白蒿三味汤散剂以煎汤外用，可使皮肤发汗，促使皮肤毛囊排毒，美容。蒙医将其与其他相关药剂合用于肠道-皮肤组合排毒疗法，效果良好。组成本品处方的3味药中，小白蒿和麻黄可通过TLC法建立清晰的鉴别法；方中酒糟属于辅料，蒙医认为其作用为促使发汗，本试验未做鉴别。

本试验中流动相曾采用0．02 mol／L磷酸二氢钾(含0．2%三乙胺，磷酸调 pH至 2．7)-乙腈(5∶100)[14]、0．01 mol／L磷酸二氢钾（磷酸调 pH至 2．5）-甲醇（4∶96）[15]、乙腈-0．025 mol／L磷酸溶液（10∶90）[13]，其中以乙腈-0．025 mol／L磷酸溶液（10∶90）系统的色谱峰对称性好，简便，无需调整pH。供试品测量组分分离度较好，无杂峰干扰。曾用Diamonsil ODS-C18色谱柱，有杂峰干扰，Eclipse XDB-C18色谱柱分离度较好，无杂峰干扰。

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Quality Standard of Mongolian Medicine Baihao-3 Decoction Powder

Jin Jun1,Lian Hua2,Nashengsang1
(1．Institute of Mongolian Medicine Research,Inner Mongolia Medical University,Huhehaote,Neimenggu,China 010110;
2．College of Mongolian Medicine,Inner Mongolia Medical University,Huhehaote,Neimenggu,China 010110)

Objective To establish the method for the TLC identification and content determination of chlorogenic acid and ephedrine hydrochloride in Baihao-3 Decoction Powder．Methods Chlorogenic acid and ephedrine hydrochloride in Baihao-3 Decoction Powder was identified by TLC,and the content of ephedrine hydrochloride was detected by HPLC．The separation was carried out on a Eclipse XDB-C18column,(250 mm×4．6 mm,5 m)．The mobile phase consisting of acetonitrile 0．025 mol／L phosphoric acid(10∶90)and a UV detctor at 210 nm,the flow rate was 1．0 mL／min,the column temperature was 30℃,the injection volume was 10 L．Results Chlorogenic acid and ephedrine hydrochloride could be detected by TLC,the calibration curve showed good linearity over the range of 0．13-0．56 μg(r＝0．999 8)．The average recovery was 98．38% with RSD＝1．41%(n＝5)．Conclusion This method is simple, rapid,efficient,sensitive,accurate and with good repeatability and recovery,it can be used as a quality control method for the preparation of Baihao-3 Decoction Powder．

Baihao-3 Decoction Powder;HPLC;ephedrine hydrochloride;chlorogenic acid;TLC identification

R284．1；R286

A

1006－4931(2016)11－0007－03

金军(1993-)，男，达斡尔族，在读硕士研究生，研究方向为蒙药学，（电子信箱）842692574＠qq．com；那生桑（1956-），男，蒙古族，博士研究生导师，教授，主要研究方向为蒙药炮制规范化及蒙药现代化，（电话）0471-6653163（电子信箱）nasang56＠sina．com。

2016－01－10；

2016－02－14)