高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定抗栓通络丸中黄芪甲苷含量

王 红，杨慈海，宋 军，田平林

（1．湖北省荆门市妇幼保健院，湖北 荆门 448124； 2．湖北省荆门市食品药品监督检验所，湖北 荆门448124； 3．湖北省荆门市中医医院，湖北 荆门 448000）

高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定抗栓通络丸中黄芪甲苷含量

王 红1，杨慈海2，宋 军2，田平林3

（1．湖北省荆门市妇幼保健院，湖北 荆门 448124； 2．湖北省荆门市食品药品监督检验所，湖北 荆门448124； 3．湖北省荆门市中医医院，湖北 荆门 448000）

目的 建立测定抗栓通络丸中黄芪甲苷含量的高效液相色谱－蒸发光散射检测（HPLC－ELSD）法。方法 色谱柱为 Lichrom C18柱（250 mm×4．6 mm，5 m），柱温为30℃，流动相为乙腈－水（32∶68），流速为1．0 m L／min。ELSD参数，气体流速为2．0 mL／min，漂移管温度为90℃。结果 黄芪甲苷进样量在0．778～3．89 g范围内与峰面积线性关系良好（r＝0．999 9），平均回收率为99．02%，RSD＝1．43%（n＝9）。结论 该方法操作简便、快速、准确，可作为抗栓通络丸的含量测定方法。

高效液相色谱－蒸发光散射检测法；抗栓通络丸；黄芪甲苷；含量测定

抗栓通络丸由黄芪、丹参、赤芍、刘寄奴、桑枝、何首乌、桂枝、法半夏等21种中药组方，是在传统经验方基础上研制开发的中药制剂，具有耐缺氧、抗疲劳、调节阴阳、增强免疫力等功效。原标准中无含量测定。黄芪为方中君药，用量是其他药味的3倍以上，故控制黄芪的含量非常重要。黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分。本研究中参考文献[1－6]，采用高效液相色谱－蒸发光散射检测(HPLC－ELSD)法检测制剂中黄芪甲苷的含量，为更好地控制制剂质量提供了参考依据。

1 仪器与试药

Ultimate 3000型高效液相色谱仪（美国戴安公司）；Varian 380－LC型蒸发光散射检测器；BP211D型电子天平（德国Sartorius公司，d＝0．1mg）；DZKW型电子恒温水浴锅。抗栓通络丸（湖北省荆门市中医医院，批号为20140415，20140708，20140901）；阴性样品（自制）；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110781－200613）；乙腈为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件[3]

色谱柱：Lichrom C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；柱温：30℃；流动相：乙腈－水（32∶68）；流速：1．0mL／min；ELSD－ELSD参数，N2流速为2．0m L／min，气化温度为90℃，蒸发温度为115℃。

2．2 溶液制备

称取黄芪甲苷对照品19．45mg，精密称定，置25mL棕色容量瓶中，加甲醇约20m L使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1m L含0．778mg黄芪甲苷的对照品贮备溶液。精密吸取对照品贮备溶液10mL，置50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1 m L含0．155 6 mg黄芪甲苷的对照品溶液。取装量差异下本品，研细，取粉末15 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇100mL，浸泡过夜，水浴回流4 h，过滤；滤液水浴蒸干，残渣加水25 mL微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40m L，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40mL，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷；通过D101型大孔树脂（内径1．5 cm，高15 cm），以50 mL水洗脱，弃去水液，再用40%乙醇40mL洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解移至5m L容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。按本品处方，取除黄芪外的其他药材，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：取对照品贮备溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按拟订色谱条件分别进样10μL。结果阴性对照品溶液对测定无干扰，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密量取对照品溶液（0．1556 g／L）5，10，15，20，25μL注入高效液相色谱仪，以对照品进样量的对数值为横坐标（X）、色谱峰峰面积的对数值为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程 Y＝1．530 4X－0．313 2，r＝0．999 9（n＝5）。结果表明，黄芪甲苷进样量在0．778～3．89μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10μL，重复进样5次，测定峰面积。结果黄芪甲苷峰面积的 RSD为1．71%（n＝5），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品，按2．2项下方法制备6份供试品溶液，依法进样测定。结果平均含量为0．085mg／g，RSD为1．96%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别于0， 4，8，16，24 h时各进样10μL，测定峰面积。结果黄芪甲苷峰面积的 RSD为1．32%（n＝5），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量的同一批（批号为20140901，含量 0．105 mg／g）样品细粉约 7．5 g，共9份，精密称定，每3份为1组，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液（0．155 6 g／L）4．0，5．0，6．0 mL，按2．2项下方法制备供试品溶液，进样测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果（n＝9）

2．4 样品含量测定

取抗栓通络丸3批，按2．2项下方法制备供试品溶液，精密量取10μL，注入高效液相色谱仪，测定并计算黄芪甲苷的含量。结果批号为 20140415，20140708，20140901的样品中，黄芪甲苷的含量分别为 0．117，0．092，0．105mg／g，平均0．105mg／g。

3 讨论

3．1 指标成分选择

方中黄芪属君药，用量大，测定黄芪甲苷的含量对控制制剂质量有较大意义，故选用黄芪甲苷作指标成分进行含量测定。

3．2 检测方法确定

黄芪甲苷为皂苷类成分在紫外末端有吸收，干扰大，基线不稳，ELSD为质量通用型检测器，重复性和稳定性均较好，且方法简便，易测定。

3．3 提取方法选择

黄芪是原药材入药，用甲醇回流提取时间要充分，本试验中进行了比较，回流1，2 h均不能提取完全，为保证黄芪甲苷提取充分，选用回流4 h。因处方中药味较多，故干扰成分较多，对检测结果有干扰，通过正丁醇提取后，再经D101型大孔树脂有选择性地吸附和洗脱，能排除大多数杂质的干扰，使黄芪甲苷得到较好分离。

[1]谢长宏，段正富．抗栓通络丸的制备及临床应用[J]．湖北中医杂志，2011，33（2）：75－77．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：283－284，581－582．

[3]高文平，李 拜，刘 成，等．高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定芪杞口服液中黄芪甲苷含量[J]．中国药业，2014，23（1）：16－17．

[4]岳 莉．高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定脑络通胶囊中黄芪甲苷含量[J]．中国药业，2014，23（8）：33－35．

[5]宋 敏．HPLC－ELSD法测定妇安栓中黄芪甲苷含量[J]．中国药房，2014，25（7）：647－648．

[6]冯传平，杨 惠，狄庆锋，等．HPLC－ELSD法测定补肾温肺合剂中黄芪甲苷含量[J]．中国药师，2014，17（2）：322－323．

Content Determ ination of AstragalosideⅣ in Kangshuan Tongluo Pills by HPLC－ELSD

Wang Hong1，Yang Cihai2，Song Jun2，Tian Pinglin3
（1．Jingmen Maternal and Child Health Hospital，Jingmen，Hubei，China 448124； 2．Jingmen Institute for Food and Drug Contorl，Jingmen，Hubei，China 448124； 3．Jingmen Traditional Medicine Hospital，Jingmen，Hubei，China 448000）

Ob jective To establish the content determination method of astragaloside Ⅳ in Kangshuan Tongluo Pills by HPLCELSD．M ethods The Lichrom－C18column（250 mm×4．6 mm，5μm）was adopted，the column temperature was 30℃，the mobile phase was acetonitrile－water（32∶68），the flow rate was 1．0 mL／min．The gas flow rate was 2．0 mL／min，the drift tube temperature was 90℃．Results The injection volume of astragalosideⅣshowed good linear relationship with the peak area in the range of 0．778－3．89μg（r＝0．999 9），the average recovery rate was 99．02%，RSD＝1．43%（n＝9）．Conclusion This method is simple to operate，it is rapid and accurate，and can be used as the quality control method of Kangshuan Tongluo Pills．

HPLC－ELSD；Kangshuan Tongluo Pills；astragalosideⅣ；content determination

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)04－0075－03

王红（1967－），女，湖北荆州人，大学本科，副主任药师，主要从事医院药学工作，（电子信箱）

jzwh1967＠163．com；田平林（1962－），男，湖北荆门人，大学本科，主任中药师，研究方向为中药制剂和鉴定，本文通讯作者，（电话）0724－2278195（电子信箱）gufangle＠sina．com。参考文献：

2015－05－13；

2015－09－09)