高效液相色谱法测定金钱草片中槲皮素和山柰素含量

陈健

（重庆市涪陵食品药品检验所，重庆 408000）

高效液相色谱法测定金钱草片中槲皮素和山柰素含量

陈健

（重庆市涪陵食品药品检验所，重庆 408000）

目的 建立测定金钱草片中槲皮素和山柰素含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为Agilent C18柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流动相为甲醇－0．4%磷酸溶液（50∶50），流速为 1．0 m L／min，检测波长为360 nm，柱温为30℃。结果 槲皮素质量浓度在1．034～20．68 g／m L范围内与峰面积线性关系良好（r＝0．999 3），加样回收率为97．53%，RSD为0．89%（n＝6）；山柰素质量浓度在2．061～41．22 g／mL范围内与峰面积线性关系良好（r＝0．999 1），加样回收率为98．11%，RSD为0．76%（n＝6）。结论该方法简单、准确、重复性好，可用于金钱草片中槲皮素和山柰素的含量测定。

高效液相色谱法；槲皮素；山柰素；金钱草片

金钱草片具有清利湿热、通淋、消肿的功效。方中金钱草的有效成分为槲皮素和山柰素等，原标准中无金钱草的含量测定项[1]。为此，笔者参考文献[2－4]，采用高效液相色谱（HPLC）法对金钱草片中槲皮素和山柰素的含量进行测定，现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

安捷伦 1260型高效液相色谱仪（安捷伦公司）；Sartorius－ME215S型电子天平。

1．2 试药

金钱草片（江西博士达药业有限责任公司，批号分别为 20140301，20140702，20140901）；槲皮素对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100081－200406，质量分数为96．5%）；山柰素对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110861－200808，质量分数93．2%）；甲醇为色谱纯（经0．45μm滤膜过滤），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Agilent C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇－0．4%磷酸溶液（50∶50）；流速：1．0mL／min；检测波长：360 nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

2．2 溶液制备

对照品溶液：称取槲皮素对照品10．72mg、山柰素对照品22．12 mg，精密称定，置100 m L容量瓶中，加80%甲醇使溶解，并定容至刻度，作为母液对照品溶液；再精密量取1m L母液对照品溶液置10 m L容量瓶中，加80%甲醇使溶解，并定容至刻度，即得对照品溶液。

供试品溶液：称取样品约0．3 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过；精密量取续滤液25mL，精密加入盐酸5m L，置90℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，移至50 m L容量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

阴性对照品溶液：按金钱草片制备工艺制备缺金钱草的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验：按拟订色谱条件，取2．2项下3种溶液，依法进样测定。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同时间处有一致的色谱峰，而阴性对照品溶液则无此色谱峰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取2.2项下母液对照品，分别精密量取1，5，10，15，20mL，加80%甲醇分别定容于100mL容量瓶中，按2.1项下色谱条件进样测定，以质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：槲皮素 Y＝48.524X+8.023 4，r＝0.999 3 (n＝5)，质量浓度在1.034～20.68μg／m L范围内与峰面积线性关系良好；山柰素 Y＝51.420X－19.361，r＝0.999 1(n＝5)，质量浓度在 2.061～41.22μg／m L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取2.2项下对照品溶液，进样10μL，连续测定6次。结果槲皮素、山柰素峰面积的 RSD分别为0.54%和0.45%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取批号为20140301的样品，依法制备供试品溶液6份，分别进样测定含量。结果槲皮素、山柰素含量的 RSD分别为0.85%和0.72%（n＝6），表明该方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h时进样10μL，记录峰面积，考察其稳定性。结果槲皮素、山柰素峰面积的 RSD分别为 0.88%和0.82% （n＝6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：取批号为20140301的样品6份，精密加入槲皮素对照品（质量浓度为0.103 4 g／L）和山柰素对照品（质量浓度为0.206 1 g／L）适量，按拟订方法制备供试品溶液，并依法进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

按拟订含量测定方法测定3批样品，以外标法计算含量。结果批号为20140301，20140702，20140901的金钱草片中槲皮素和山柰素的含量分别为1.472mg／g和1.604 mg／g，1.408 mg／g和 1.687 mg／g，1.526 mg／g和1.754mg／g。

3 讨论

取槲皮素和山柰素对照品溶液，在250～450 nm波长处进行紫外扫描，结果槲皮素和山柰素对照品均在360 nm波长处有最大吸收，参照2010年版《中国药典（一部）》金钱草项下的检测波长，将此次试验的检测波长定为360 nm。

试验中考察了水解时间，于0.5，1.0，2.0，5.0 h水解后测定槲皮素和山柰素的含量，在水解1.0 h后含量无明显增加，故采用水解1.0 h。

[1]WS3－B－1560－93，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第八册)[S]．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：248．

[3]谭忠谋，韦建乔，蒙露露．高效液相色谱法测定金钱草颗粒中槲皮素含量[J]．中国药业，2012，21（9）：24－25．

[4]梁国华，梁晓琪．HPLC测定复方肝炎颗粒中槲皮素和山奈素的含量[J]．中国实验方剂学杂志，2013，19（24）：90－92．

Content Determ ination of Quercetin and Kaem p feride in Lysim achia Christinae Tab lets by HPLC

Chen Jian
（Fuling Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 408000）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of the quercetin and kaempferide in Lysimachia christinae Tablets．M ethods The Agilent C18column（250 mm×4．6 mm，5μm）was used with methanol－0．4% phosphoric acid solution（50∶50）as the mobile phase，the detection wavelength was 360 nm，the flow rate was 1．0 mL／min，the column temperature was 30℃．Results The sample side of quercetin in the range of 1．034－20．68μg／m L showed the good linear relation with the peak area（r＝0．999 3），The average recovery rate was 97．53%，RSD was 0．89%（n＝6）；The sample side of kaempferide in the range of 2．061－41．22μg／mL showed the good linear relation with the peak area（r＝0．999 1），The average recovery rate was 98．11%，RSD was 0．76%（n＝6）．Conclusion The method is simple，accurately and reproducible，it can be used to determine the quercetin and kaempferide in Lysimachia Christinae Tablets．

HPLC；quercetin；Kaempferide；Lysimachia Christinae Tablets

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)06－0062－02

2015－07－28)