梅毒血清固定患者趋化因子受体的研究

林世庄 苏湘川 叶挺挺 朱海元 章承中 颜美秋

梅毒血清固定患者趋化因子受体的研究

林世庄 苏湘川 叶挺挺 朱海元 章承中 颜美秋

目的 研究梅毒血清固定患者趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，探讨梅毒患者免疫功能的变化。方法 检测梅毒血清固定患者（血清固定组）35例外周血趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，并以规范治疗后梅毒血清反应素试验血清转阴者梅毒患者（转阴组）40例及健康体检者（健康组）35例分别作为对照。比较3组外周血趋化因子受体水平。结果 梅毒血清固定患者CCR3表达高于健康组及转阴组，CCR5、CXCR3表达低于健康组及转阴组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。转阴组与健康组比较，趋化因子受体表达差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 趋化因子受体在梅毒血清固定患者的发病、发展中可能起着重要作用。

梅毒 趋化因子受体 血清固定

梅毒是由苍白密螺旋体引起的一种慢性系统性性传播疾病，早期侵犯皮肤、黏膜，晚期以侵犯心血管和神经系统为主。据WHO报道，全球接受正规治疗的梅毒患者有数千万，全球梅毒的年增长率为15%～20%，而我国局部地区甚至高达30%[1]。梅毒血清固定系指梅毒患者接受规范治疗6～9个月后苍白密螺旋体滴度无明显下降或治疗2年后血清反应仍未转阴[2]。血清固定患者临床症状易反复发作，且无有效治疗方法，给患者造成沉重的心理压力。近年研究发现，梅毒患者症状复发及梅毒血清固定均与机体的免疫系统有很大关系。本研究通过检测梅毒血清固定患者外周血趋化因子受体水平，进一步从分子水平层面上分析免疫功能对梅毒病情发展的影响，以便及时根除梅毒螺旋体，及早治愈梅毒患者，减轻梅毒对患者身体和精神的损害。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2010年5月至2013年8月温岭市第一人民医院及台州市立医院皮肤性病科门诊梅毒血清固定患者（血清固定组）35例（温岭市第一人民医院21例，台州市立医院14例），其中男15例，女20例，年龄19～52（29.6±7.9）岁；初次就诊时为一期梅毒3例，二期梅毒19例，潜伏期梅毒13例，血清固定时间持续1.0～6.4（2.2±0.4）年。梅毒血清反应素试验滴度1∶1者7例, 1∶2者12例，1∶4者15例，1∶8者1例。梅毒血清固定诊断标准：梅毒血清固定前均已接受规范驱梅治疗，无临床症状或治疗后临床症状消失，并经脑脊液常规、生化及梅毒反应素试验等检测排除神经梅毒后，梅毒血清反应素试验仍持续阳性，持续时间1年以上定为早期梅毒，2年以上定为晚期梅毒。排除标准：女性妊娠期，确诊梅毒后仍有不洁性生活史者，有其他免疫系统疾病以及合并严重系统性疾病、感染其他性病的患者。另以规范治疗后梅毒血清反应素试验血清转阴者梅毒患者（转阴组）40例及健康体检者（健康组）35例分别作为对照。转阴组男17例，女23例，年龄20～49（28.4±5.2）岁。健康组男15例，女20例，年龄20～52（27.8±4.9）岁。3组对象性别、年龄差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器 异硫氰酸荧光素（FITC）标记的CD4单抗以及相应同型对照抗体、PE标记的CCR3单抗、CCR5单抗及相应的同型对照PE-IgG、PE-IG2A购于eBioscience公司。APC标记的CXCR4、CXCR3单抗以及其同型对照APC-IG2A购于Abcam公司。流式细胞仪（型号：BDFACSCALIBUR）购于BD公司。

1.2.2 检测方法 观察外周血CD4+T细胞趋化因子受体表达情况：流式细胞仪双标法检测外周血CD4+T细胞表面CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3的表达。抽取空腹外周血5ml，抗凝备用。分别取用A、B、C、D、E 5个离心管，其中A管做阴性对照，B管加入FITC-CD4单抗（0.5μg）+PE-CCR3单抗（0.5μg），C管加入FITC-CD4单抗（0.5μg）+PE-CCR5单抗（0.5μg），D管加入FITCCD4单抗（0.5μg）+APC-CXCR4单抗（0.5μg），E管加入FITC-CD4单抗（0.5μg）+APC-CXCR3单抗（0.5μg）。各管分别加入100μl的新鲜抗凝全血，混匀，经过避光孵育、裂解、离心、弃上清液后，各管加入l%多聚甲醛溶液150μl固定后，上机检测，统计3组外周血CD4+T细胞CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4的表达率。

1.3 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件，计量资料以表示。两两比较方差齐者采用LSD-t检验，方差不齐者采用Tamhane检验。

2 结果

3组外周血CD4+T细胞CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4表达率的比较见表1。

表1 3组外周血CD4+T细胞CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4表达率的比较（%）

由表1可见，血清固定组外周血CCR3表达高于转阴组，CCR5、CXCR3水平低于转阴组，差异均有统计学意义（t=13.82、12.23、10.43，均P＜0.01）；血清固定组患者外周血CCR3表达高于健康组，CCR5、CXCR3表达低于健康组，差异均有统计学意义（t=12.51、11.32、10.31，均P＜0.01）；转阴组与健康组比较，外周血CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4差异均无统计学意义（t=1.23、1.05、1.14、1.19，均P＞0.05）。

3 讨论

梅毒血清固定现象目前非常普遍，约占梅毒患者的15.00%～34.02%[3]。国内外研究显示梅毒血清固定患者体内Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-12的血清浓度显著降低，低于正常对照组、梅毒未治疗组和梅毒治疗后阴性组，且梅毒血清固定患者体内NK细胞、中性粒细胞的吞噬杀伤能力低下，不能有效清除梅毒螺旋体[4-5]。Th1型细胞的减少使体内Th1/Th2平衡失衡，而Th2型细胞可通过分泌细胞因子IL-10等并抑制由Th1细胞分泌的细胞因子介导的免疫应答，造成免疫杀伤与清除能力的下降，使梅毒螺旋体逃过细胞免疫应答的作用，引起梅毒血清抗体持续固定[6-7]。

趋化因子是一类在淋巴细胞募集过程中发挥关键作用的蛋白质超家族。趋化因子受体是一类介导趋化因子行使功能、与G蛋白相偶联的受体，它的表达是趋化因子发挥作用的一个重要决定因素。趋化因子及其受体能精确地调节免疫系统的反应，免疫系统中免疫活性细胞的动态分布、各类细胞的分化发育、活化都受到趋化因子受体的影响和调控，在机体的生理发育及疾病的病理过程中均起着重要作用。趋化因子受体在分化的Th亚群Th1/Th2上表达不同，趋化因子及其受体在趋化T细胞的同时，还能直接或间接影响T细胞分化为Th1与Th2。趋化因子受体的类型和表达量的差异是调节Th1/ Th2活化和极化状态的重要因素[8]。我们既往研究发现二期、三期梅毒患者外周血CCR3升高，CCR5下降，趋化因子受体CCR3、CCR5在梅毒患者清除体内梅毒螺旋体的免疫反应中可能起着重要作用[9]。本研究发现梅毒血清固定患者与健康受试者及梅毒血清反应素试验转阴性的患者比较，外周血CCR3水平明显增高，CCR5、CXCR3水平明显降低。转阴组与健康组比较，外周血CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4的表达差异无统计学意义，提示机体的正常免疫力是梅毒血清反应素试验转阴的一个重要条件。结合CCR5、CXCR3主要表达在Th1细胞上，CCR3主要表达在Th2细胞上[10]，血清固定患者中，外周血中CCR5、CXCR3降低，CCR3升高，导致Th1活化不充分，Th2表达相对亢进，Th1/Th2表达失衡，机体免疫应答不完整，部分免疫功能低下。梅毒患者的细胞免疫状态在梅毒的发病中起着重要的作用，细胞免疫功能低下不仅可增加感染梅毒螺旋体的机会，而且影响病情的发展和转归。梅毒患者由于免疫功能低下，不能产生对梅毒螺旋体的正常免疫应答，从而使一部分梅毒螺旋体逃过了机体的细胞免疫，导致机体未能及时彻底清除梅毒螺旋体，致使感染进入慢性阶段，最终导致了血清固定的发生[11]。

Th1/Th2偏移现象加速了梅毒螺旋体的增殖并促进疾病向梅毒潜伏阶段及血清固定方向发展，这与感染进入慢性阶段有一定的关系，但具体机制还有待于进一步研究。所以笔者认为，趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3在梅毒患者清除体内梅毒螺旋体的免疫应答中可能起着重要作用，提示我们对梅毒患者的治疗，临床上除采用常规的抗生素驱梅治疗外，可配合免疫调节剂，调节和增强机体的免疫功能，减少梅毒血清固定的发生。

[1] 徐峰,张洪为.梅毒感染及其流行特征的回顾性研究[J].国际检验医学杂志,2014,35(10):1295-1296.

[2] 刘百灵,马杰,张晓燕.梅毒血清固定患者外周血调节性T细胞和Th17细胞相关因子研究[J].临床皮肤科杂志,2014,43(3):140-142.

[3] Lin L R,Tong M L,Fu Z G,et al.Evaluation of a colloidal gold immunochromatography assay in the detection of treponema pallidum specificigm antibody in syphilis serofast reaction patients: A serologic marker for the relapse and infection of syphilis[J]. Diagn Microbiol Infect Dise,2011,70(1):10-16.

[4] 黄显翔.梅毒血清固定患者体内Th1/Th2细胞因子水平的变化[J].中国皮肤性病学杂志,2014,28(11):1138-1156.

[5] Zhao F,Wang S,Zhang X,et al.Protective efficacy of a Treponema pallidum Gpd DNA vaccine vectored by chitosan nanoparticles and fused with interleukin-2[J].Can J Microbiol,2012,58(2): 117-123.

[6] Venturini M,Sala R,Semenza D,et a1.Reflectance confocal Microscopy for the in vivo detection of treponema palladium in skin lesions of secondary syphilis[J].J Am Acad Dermatol,2009(60): 639-642.

[7] Hook E W,Behets F,Van Damme K,et al.A phase III equivalence trial of azithromycin versus benzathine penicillin for treatment of early syphilis[J].J Infect Dis,2010(201):1729-1735.

[8] 万超,刘志芳.梅毒发病机制与Th9细胞亚群及趋化因子间的关系[J].疾病监测与控制杂志,2015,9(7):478-480.

[9] 林世庄,苏湘川,叶挺挺,等.不同期别梅毒患者外周血CD4+T细胞表面趋化因子受体的研究[J].浙江医学,2014,36(23):1939-1941.

[10] 姜培娟,林其德,鲍世民.趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3与自然流产的相关性[J].上海交通大学学报(医学版),2008,28(12): 1535-1540.

[11] 刘隽华,韩建德,陈木开,等.梅毒血清固定者与治疗后阴转者的免疫功能比较研究[J].中国艾滋病性病,2008,14(4):385-386.

Chemokine receptor levels in peripheral T-lymphocytes of patients with seroresistance syphilis

LINShizhuang,SUXiangchuan,YETingting，et al.Department of Dermatology,Wenling First People's Hospital,Wenling 317500,China

【 Abstract】 Objective To investigate chemokine receptors levels in peripheral T-lymphocytes of patients with seroresistance syphilis. Methods The chemokine receptors CCR3,CCR5,CXCR4,CXCR3-expressing T-lymphocytes were detected in 40 patients with seroresistance syphilis,40 patients with negative results after treatment and 35 healthy adults as controls. Results The expression of CCR3 on CD4+T cells was increased,the expression of CCR5 and CXCR3 was declined in peripheral blood of seroresistance syphilis in comparison with those of the healthy subjects and patients with negative results after treatment(P＜0.01). Conclusion The chemokine receptors may be involved in the onset,development of seroresistance syphilis.

Syphilis Chemokine receptor Seroresistance

2015-04-07）

（本文编辑：杨丽）

温岭市科技计划项目（2012WLCA0071）

317500 温岭市第一人民医院皮肤科（林世庄、叶挺挺、朱海元、章承中、颜美秋）；台州市立医院皮肤科（苏湘川）