化痰理气口服液止咳平喘及通透性药效学实验研究※

2016-12-23刘素香陈曦徐敏妮吴文平杨利生王显著白丽君窦建卫

中国中医药现代远程教育 2016年2期

刘素香陈曦徐敏妮吴文平杨利生王显著白丽君窦建卫*

刘素香1陈曦2徐敏妮1吴文平3杨利生1王显著4白丽君1窦建卫2*

化痰理气口服液源于全国名老中医黄保中主任验方蒌贝枳桔二陈汤，由全瓜蒌，浙贝母，炒枳壳，桔梗，陈皮等9味中药饮片组成。具有祛痰止咳、宽胸散结、理气平喘、健脾益气之功效。长期应用于临床，疗效确切，本研究通过镇咳、平喘、抗炎等药效学试验研究评价其药理作用，为进行院内制剂及新药的开发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及药品

1.1.1 药物与试剂化痰理气口服液（由西安市中医院院制剂室制成口服液，批号：20130301），氢溴酸右美沙芬片（北京双鹤药业股份有限公司，批号：H10920080），橘红丸（北京同仁堂股份有限公司，批号：Z51020365），氨水（广州化学试剂二厂产品，批号：060803），氨茶碱片（北京益民制药厂，批号：0750816），0.9%氯化钠注射液(陕西华山制药有限公司，批号：A100712031)，阿司匹林(Bayer Hea1thCare Manufacturing S.r.1，批号：J2013078)，伊文思蓝（国药集团化学试剂有限公司，批号：WC20090209），醋酸（广东光华化学厂有限公司，批号：20100329）。

1.1.2 实验动物72只SPF级实验动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK(陕)2007-001；实验动物使用许可证号：SCYK(陕)2012-005。豚鼠80只，体重160～200 g，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK(陕) 2007-001。

1.1.3 实验仪器JM型电子天平（余姚纪铭称重校验设备有限公司），CJ721医用雾化器，(北京西长安街医疗器械厂），电子天平（Sartorius公司，型号：BT1250D），电子天平（上海天平仪器厂，型号：FA1104JM），Stat Fax 2100型分光光度计（Awareness Techno1ogy Inc.，Pa1m City，FL，USA）。

1.2 实验方法

1.2.1 小鼠氨水引咳实验72只昆明小鼠，体重18～22 g，雌性。随机分为6组，即模型对照组，阳性药右美沙芬组（15.75 mg/kg)，橘红丸组（4.8 g/kg），化痰理气口服液高(3.0 g/kg)、中(1.5 g/kg)、低（0.75 g/kg)剂量组，每组12只。灌胃给药5d，灌胃体积20 m1/kg，1次/d。其中模型对照组给等体积蒸馏水。末次给药前不禁水只禁食12 h，末次给药1 h后将每只动物分别置于500 m1密闭钟罩内，通过空气压缩机以400 mmHg恒压喷以25%浓氨水5 s，观察小鼠咳嗽的潜伏时间及2 min内的咳嗽次数［2］。

1.2.2 磷酸组胺吸入法致喘实验选体重160～200 g豚鼠80只，雌雄各半，分别放入密闭的钟罩内，用超声雾化器喷射0.1%磷酸组织胺（His）与2%氯化乙酰胆碱（Ach）混合液15 s，喷雾停止后，观察6 min内豚鼠出现抽搐跌倒的时间，并记录从喷雾开始到抽搐、跌倒的时间，称为引喘潜伏期。如果引喘潜伏期大于120 s者，作为不敏感而排除。取筛选合格者豚鼠60只，随机按体重分为6组，即模型对照组、阳性药氨茶碱片组（75mg/kg)、橘红丸组（4.0 g/kg）、化痰理气口服液高、中、低剂量组（2.5 g/kg，1.25 g/kg，0.625 g/kg)，每组10只。灌胃给药，灌胃体积10 m1/kg，1次/d，给药5 d。其中模型对照组给等体积的蒸馏水。末次给药1 h后，以上述同样条件引喘，观察并记录引喘潜伏期（s）和6min内抽搐跌倒的动物数量［1-3］。

1.2.3 腹腔毛细血管通透性实验72只昆明小鼠，体重18～22 g，雌性。随机分为6组，即模型对照组、阳性药阿司匹林组（40 mg/kg）、橘红丸组（4.8g/kg）、化痰理气口服液高、中、低剂量组（3.0 g/kg，1.5 g/ kg，0.75 g/kg)，每组12只。取各组小鼠，灌胃给药，灌胃体积20 mL/kg，1次/d，给药7 d。其中模型对照组给等体积蒸馏水。末次给药后45 min，尾静脉注射0.5%伊文斯蓝0.01 m1/g，再立即腹腔注射0.7%乙酸（0.2m1/只），过20 min后脱椎处死，打开腹腔，注入10 mL生理盐水冲洗，吸出洗涤液，3000 r/min离心10 min，再取上清液于590 nm处测光密度（OD）值，(OD值间接表示通透性)，并计算抑制率［4-5］。抑制率=（模型对照组吸光度-给药组吸光度）/模型对照组吸光度×100%。

1.3 统计学方法各组数据以均数±标准差（x±s）表示，数据分析使用SPSS 17.0统计软件，采用成组配对t检验，检验水平α=0.05。

2 结果

2.1 化痰理气口服液对浓氨水喷雾法所致小鼠咳嗽的作用与模型对照组比较，右美沙芬组和化痰理气口服液高剂量组明显减少小鼠咳嗽次数（P＜0.01），明显延长潜伏期（P＜0.01）。提示右美沙芬和化痰理气口服液高剂量均能明显延长小鼠咳嗽潜伏期。见表1。

表1 化痰理气口服液对浓氨水喷雾法所致小鼠咳嗽的作用（±s，n=12）

注：与模型对照组比较，▲P＜0．01

潜伏期（s）咳嗽次数（次）2 7 . 5 3 ± 9 . 2 9 1 6 . 0 0 ± 3 . 5 9阳性药右美沙芬组1 5 . 7 5 m g / k g 4 3 . 2 1 ± 1 1 . 6 9▲9 . 0 0 ± 1 . 2 8▲橘红丸组4 . 8 3 6 . 9 7 ± 6 . 5 3 1 2 . 5 8 ± 3 . 2 9化痰理气口服液高剂量组3 . 0 3 9 . 8 4 ± 7 . 7 5▲1 0 . 7 5 ± 2 . 4 9▲化痰理气口服液中剂量组1 . 5 3 7 . 0 5 ± 6 . 8 8 1 2 . 6 7 ± 3 . 5化痰理气口服液低剂量组0 . 7 5 2 8 . 8 3 ± 1 0 . 1 8 1 4 . 3 3 ± 2 . 8 4组别剂量（g生药/ k g）模型对照组-

2.2 化痰理气口服液对磷酸组胺吸入法所致豚鼠哮喘的作用与模型对照组比较，化痰理气口服液高剂量组、氨茶碱组明显延长豚鼠哮喘潜伏期，抽搐跌倒动物数量减少（P＜0.01）。提示，氨茶碱和化痰理气口服液高剂量均能明显延长豚鼠哮喘潜伏期，减少抽搐跌倒动物数量。见表2。

表2 化痰理气口服液对磷酸组胺吸入法所致豚鼠哮喘的影响（±s，n=10）

注：与模型对照组比较，▲P＜0．01

潜伏期（s）抽搐跌倒动物数（只）7 8 . 7 4 ± 1 0 . 1 2 1 0阳性药氨茶碱组7 5 m g / k g 2 7 0 . 4 5 ± 5 4 . 4 4▲2橘红丸组4 . 0 9 0 . 7 4 ± 1 0 . 3 3 3化痰理气口服液高剂量组2 . 5 1 2 3 . 7 6 ± 3 2 . 6 4▲2化痰理气口服液中剂量组1 . 2 5 9 0 . 5 4 ± 1 0 . 6 4 3化痰理气口服液低剂量组0 . 6 2 5 8 6 . 5 4 ± 1 6 . 4 3 9组别剂量（g生药/ k g）模型对照组-

2.3 化痰理气口服液对小鼠腹腔毛细血管通透性影响实验结果显示，阿司匹林组、本品大剂量组可抑制乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性，与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。提示本品大剂量具有一定的抑制乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性的作用。见表3。

表3 化痰理气口服液对小鼠腹腔毛细血管通透性影响（±s，n=12）

注：与模型对照组比较，▲P＜0．01

O D值抑制率（%）0 . 5 4 ± 0 . 1 8 0 . 0 0阳性药阿司匹林组4 0 m g / k g 0 . 3 2 ± 0 . 1 1 4 0 . 8 6▲橘红丸组4 . 8 0 . 4 1 ± 0 . 1 5 2 5 . 4 5化痰理气口服液高剂量组3 . 0 0 . 3 6 ± 0 . 1 2 3 3 . 1 7▲化痰理气口服液中剂量组1 . 5 0 . 4 0 ± 0 . 1 5 2 6 . 2 2化痰理气口服液低剂量组0 . 7 5 0 . 4 6 ± 0 . 1 2 1 5 . 9 6组别剂量（g生药/ k g）模型对照组-

3 讨论

自2003年8月至今，我们应用黄保中主任验方蒌贝枳桔二陈汤观察治疗慢性阻塞性肺疾病痰气交阻型病例计1000余例，疗效显著，具有良好的应用前景。此方不仅具有祛痰止咳、散结平喘、宽胸理气、健脾益气之功效，同时可以减少COPD患者住院率，改善生活质量，患者的咳痰时间和痰量减少明显优于对照组［6］。此方由全瓜蒌、浙贝母合《医宗金鉴》枳桔二陈汤化裁而成。具有化痰散结，宽胸理气，止咳平喘之效［7］。方用全瓜蒌、浙贝清热化痰散结，宽胸理气；桔梗宣散壅塞之肺气，且载药上行达肺；枳壳化痰除痞、行气畅中；桔梗、枳壳二者相伍，升降气机，有“通肺利膈下气”之效；枳壳与白术配伍，取枳术丸之意，健脾消痞，升清降浊；“脾为生痰之源，肺为贮痰之器”，方中陈皮、云苓、法半夏、炒白术，健脾益气化痰，以绝生痰之源；全瓜蒌、白术、枳壳配伍可通腑泻热、使邪有出路。肺与大肠相表里，肺气壅塞，腑气不通，则气短喘咳不止，若腑气通，肺气宣散，则咳喘自平。方中苦寒药瓜蒌、贝母与辛温药陈皮、半夏并用，不寒不燥。主要针对“痰”“气”交阻病因，切中病理要害。此方为治疗慢阻肺痰气交阻型的有效方剂。

但由于中汤药煎煮麻烦费时费力，口感差，不少患者望而却步；另外慢性咳喘病患者往往服药时间较长，除了急性期治疗外，缓解期也应坚持巩固，中汤药的依从性差使部分患者不能坚持。口服液具有口感好，携带方便，胃肠道刺激小，对含有挥发油类药物能最大程度保持原药药效的优势，在最大限度不影响原汤剂疗效的基础上，将黄师蒌贝枳桔二陈汤由原来的汤剂进行剂型改革，名为化痰理气口服液，对其进行祛痰、止咳、平喘作用的药理研究以验证其作用，为方便更多的患者服用，同时为进行院内制剂及新药的开发，进行前期准备工作。

本实验采用经典的氨水致小鼠咳嗽以及氯化乙酰胆碱-磷酸组胺致哮喘法来评价化痰理气口服液的止咳、平喘作用。挥发后的氨水可形成一种刺激性气体，这种气体对气管-支气管刺激强烈，可诱发咳嗽反应，检测氨水致咳小鼠咳嗽潜伏期、咳嗽次数，可评价药物的止咳作用。而豚鼠是一种易致敏实验动物，2%氯化乙酰胆碱-0.1%磷酸组胺混合喷雾可激发气管炎症反应，导致气管痉挛，诱使豚鼠发生哮喘，检测引喘潜伏期可评价药物平喘作用。本实验研究结果表明，高剂量的化痰理气口服液可明显减少氨水致小鼠咳嗽的次数，延长咳嗽潜伏期，增加氯化乙酰胆碱-磷酸组胺混合喷雾诱发的哮喘潜伏期，证明有明显的止咳、平喘作用，同时此药具有抑制乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性的作用。这为化痰理气口服液的综合开发利用和进行院内制剂及新药的开发提供了实验依据和科学依据。

[1]中华医学会呼吸病学分会．特发性肺(间质)纤维化诊断和治疗指南(草案)[J]．现代实用医学，2003，15(2):129-130．

[2]张济周，杨梁梓．中西医对肺纤维化发病机制的研究进展[J]．云南中医中药杂志，2009，30(9):75-77．

[3]赵兰才，武维屏．肺间质纤维化的中医研究进展述评(综述)[J]．北京中医药大学学报，2000，23(4):70-72．

[4]李辉．李国勤辨治特发性肺间质纤维化经验[J]．中医杂志，2009，50(2): 122-123．

[5]丁明桥，徐朝霞，王鹏．肺间质纤维化的中医发病机制探讨[J]．辽宁中医

（1西安市中医医院肺病科，陕西西安710021；2西安交通大学医学部药学院陕西西安710061；3西安市中医医院肝病科，陕西西安710021；4西安市中医医院药剂科，陕西西安710021）

目的评价化痰理气口服液的止咳平喘作用以及对小鼠腹腔毛细血管通透性影响。方法采用小鼠氨水引咳实验、磷酸组胺豚鼠引喘方法实验进行化痰理气口服液止咳及平喘作用的研究。采用伊文思蓝实验进行毛细血管通透性实验研究。结果止咳实验显示，本品高剂量能显著延长小鼠引咳潜伏期和减少2min内的咳嗽次数；平喘实验显示，本品高剂量能明显延长豚鼠引喘潜伏期，本品大剂量及氨茶碱组可减少抽搐跌倒动物数量；毛细血管通透性实验显示，本品大剂量具有抑制乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性的作用。结论化痰理气口服液具有明显的止咳平喘的功效，并且抑制乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性的作用。

化痰理气口服液；止咳平喘；毛细血管通透性

LIU Suxiang1， CHEN Xi2， XU M inni1， WU Wenping3， YANG Lisheng1， WANG Xianzhu4， BAI Lijun1， DOU Jianwei2*
(1. Department of Pu1monary Disease， Xi'an Hospita1 of Traditiona1 Chinese Medicine， Xi'an 710021， China；2. Schoo1 of Pharmacy， M edica1 Co11ege of Xi'an Jiaotong University， Xi'an 710061， China；3. Department of Hepato1ogy， Xi'an Hospita1 of Traditiona1 Chinese Medicine， Xi'an 710021， China；4. Department of Pharmacy， Xi'an Hospita1 of Traditiona1 Chinese M edicine， Xi'an 710021， China)

Objective To eva1uate the re1ieving cough and asthma effects of Huatan Liqi ora11iquid and its inf1uence on b1ood caPi1-1ary Permeabi1ity of the abdomina1 in mice.Methods AdoPting cough exPeriment and asthma exPeriment induced by ammonia in mice and histamine PhosPhate in guinea Pigs resPective1y method to study the re1ieving cough and asthma effects of Huatan Liqi ora1 1iquid.B1ood caPi11ary Permeabi1ity was observed by Evans b1ue exPeriment.Resu lts Cough exPeriment showed that the grouP of high dose cou1d significant1y Pro1ong themice cough incubation Period and the frequency of cough in 2 min,re1ieving asthma exPeriments showed that the grouP of high doses can obvious1y Pro1ong asthma incubation Period of the guinea Pig,the grouPof high doses and aminoPhy11ine can decrease the amount of twitched anima1s induced by histamine PhosPhate in guinea Pigs,and caPi11ary Permeabi1ity exPeriments have shown that high doses of the Product Possesses inhibitory effected on acetic acid to imProve b1ood caPi11ary Permeabi1ity of the abdomina1 cavity.Conclusion Huatan Liqi ora11iquid has obvious effect of re1ieving cough and asthma,and it can inhibit the action of the acetic acid to imProve b1ood caPi11ary Permeabi1ity of the abdomina1 cavity.

Huatan Liqiora11iquid；re1ieving cough and asthma；caPi11ary Permeabi1ity

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.02.071

1672-2779（2016）-02-0137-03