大乌泡水提物的镇痛作用研究*

毛政益， 刘 瑶， 蔡 进， 陈 瑞， 孟 鑫， 刘珈伲， 刘丽娜， 黄 静*

(贵州医科大学 药学院， 贵州 贵阳 550025)



大乌泡水提物的镇痛作用研究*

毛政益**， 刘 瑶， 蔡 进， 陈 瑞， 孟 鑫， 刘珈伲， 刘丽娜， 黄 静***

(贵州医科大学 药学院， 贵州 贵阳 550025)

目的： 研究大乌泡水提物对小鼠的镇痛作用及血清中NO含量的影响。方法:热板致痛法及冰醋酸扭体法两种方法下各选择50只小鼠，每种方法下的小鼠均分为5组，分别为大乌泡根水提物高剂量组(5.2 g/kg生药)、中剂量组(2.6 g/kg生药)、低剂量组(1.3 g/kg生药)、阳性组(2.0 mg/kg盐酸吗啡)以及阴性组(生理盐水)；热板致痛法观察小鼠的热板痛阈值和血清一氧化氮(NO)含量变化，冰醋酸扭体法观察小鼠扭体发作潜伏期、扭体次数、镇痛抑制率及血清NO水平。结果:与阴性组比较，热板法中阳性组小鼠给药后痛阈值升高，血清NO值降低，扭体法中小鼠扭体发作潜伏期升高，扭体次数减少，镇痛抑制率增高，差异均有统计学意义(P<0.05),说明热板致痛法和冰醋酸扭体法中小鼠模型成功；热板法中，与阴性组比较，大乌泡水提物高、中、低剂量组小鼠痛阈值升高,血清NO含量降低,差异有统计学意(P<0.05)；扭体法中，与阴性组比较，大乌泡根水提物高、中剂量组小鼠扭体发作潜伏期升高，高、中、低剂量组10 min内扭体次数减少、镇痛抑制率增加，高、中剂量组小鼠血清中NO含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大乌泡水提物具有镇痛作用,其作用机制可能与降低小鼠血清中NO含量有关。

镇痛； 一氧化氮； 小鼠； 大乌泡

大乌泡为蔷薇科悬钩子属植物大乌泡(RubusmultibracteatusLevl. et Vant.),又名倒生根、黄水泡、大红黄袍、无刺乌泡、糖泡叶、马莓等，全国大部分地区均有分布,主产于广东、广西、四川、云南、贵州等地。大乌泡全株及根入药，其味苦、性凉,入脾、肝二经,具清热解毒、祛风除湿、凉血、止血以及接骨的功效。《贵州草药》和《全国中草药汇编》中均有记载，记载用于感冒发热、肠炎、痢疾、腹泻、风湿痹痛、妇女倒经、骨折、咳血、风湿骨痛。大乌泡为苗药的常用药,有文献曾报道过其总黄酮的含量测定及GC/MS的分析[1]，但目前尚未见有关大乌泡镇痛研究的报道。一氧化氮(NO)作为一种神经递质和一种信息传递分子，在外周、中枢以及骨髓不同水平的痛觉调节中发挥重要作用，中枢神经系统内源性NO水平降低可表现出一定的镇痛效应，而在外周痛觉的调控中，认为抑制NO的合成可产生镇痛作用[2]。本研究通过热板致痛和冰醋酸扭体实验观察大乌泡水提液对小鼠的镇痛作用及血清NO水平的影响，报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物、药品及试剂

昆明种小鼠由重庆腾鑫生物技术有限公司提供,合格证号为SCXK(渝) 2007-0006，实验前适应性饲养3 d。大乌泡根茎药材于2011年7月购于贵州省贵阳市药材公司，经贵州医科大学龙庆德教授鉴定为蔷薇科悬钩子属大乌泡干燥根。冰醋酸(重庆川东化工集团有限公司)，阿司匹林原料药(天津科密欧化学试剂有限公司,批号20100918) ，盐酸吗啡注射液(沈阳第一制药厂,批号20110922) ，NO含量测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20130104)。

1.2 仪器

DFT-200手提式高速中药粉碎机(温岭市大得中药机械有限公司)，EL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司 )，RB-200智能热板仪(成都泰盟软件有限公司)，SHB-Ⅲ循环式多用真空泵(郑州长城科工贸易有限公司)，N-1100旋转蒸发仪(上海爱郎仪器有限公司)，UV-1750紫外分光光度计(岛津仪器有限公司)，TGL-16G高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.3 方法

1.3.1 药材提取与制备 取大乌泡粗粉200 g，加水2 000 mL，回流提取2次，每次2 h,合并提取液，过滤，将滤液液浓缩制成浸膏24.4 g。

1.3.2 热板致痛阈值及血清NO水平 取雌性昆明种小鼠，体重在18～22 g，置于(55±0.5)℃热板上,记录小白鼠自开始放置于热板至出现舔后足所需时间作为该鼠的痛阈值,凡舔后足时间<5 s或>30 s或跳跃者弃之不用,重复测正常痛阈值,取两次正常痛阈平均值作为该鼠给药前痛阈值[3-7]。将合格的小鼠随机分为5组,每组10只, 分为大乌泡水提物高剂量组(5.2 g/kg生药)、中剂量组(2.6 g/kg生药)、低剂量组(1.3 g/kg生药)、阳性组(盐酸吗啡2.0 mg/kg)以及阴性组(生理盐水)。除阳性组第7天皮下注射盐酸吗啡(每只小鼠0.1 mL/10 g体重)外,其余各组分别灌胃相应浓度大乌泡水提物或生理盐水,每天1次,连续7 d,末次给药后15、30、60、90以及120 min分别测定小鼠痛阈值,如60 s仍无反应,痛阈以60 s计算。小鼠眼球取血，分离血清，-20 ℃冰箱保存。采用硝酸还原酶法测定血清中NO的含量,具体步骤参照NO检测试剂盒使用说明书进行[8-9]。

1.3.3 镇痛抑制率 取昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组，分组与给药同“1.3.2”项，各组于末次给药30 min后,给每只小鼠腹腔注射0.7%冰醋酸(0.1 mL/10 g体重)，记录各组扭体发作的潜伏期和20 min内小鼠扭体次数，并计算镇痛抑制率，镇痛抑制率(%)=(模型组平均扭体次数-给药组平均扭体次数) /模型组平均扭体次数×100%。实验过程中室温维持在(18±1)℃。 小鼠眼球取血，分离血清[10-13]。采用硝酸还原酶法测定血清中NO的含量,具体步骤参照NO检测试剂盒使用说明书进行。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 致痛阈值及血清NO值

与阴性组比较，大乌泡水提物高、中、低剂量组分别在给药后15、30、60、90 和120 min痛阈值提高,并且大乌泡根水提物高、中、低剂量组小鼠血清中NO含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1和表2。

Tab.1 Pain threshold of hot plate before and after administration of mice in each group

与阴性组比较, (1)P<0.05,(2)P<0.01

Tab.2 NO content in serum of each group of mice in hot plate test

与阴性组比较, (1)P<0.05,(2)P<0.01

2.2 镇痛作用及血清NO值

阴性组比较，大乌泡水提物高、中剂量组小鼠扭体发作潜伏期提高，高、中、低剂量组10 min内扭体次数减少、镇痛抑制率增加，高、中剂量组小鼠血清中NO含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3和表4。

3 讨论

大乌泡作为常用的苗药，在民间应用广泛，有清热解毒、祛风除湿、凉血，止血以及接骨等作用。本课题组根据民间用药经验，取大乌泡地上部分常温干燥后，对药材进行水提得到浸膏，分别用高、中、低三个剂量对小鼠进行灌胃，采用热板镇痛法

Tab.3 The incubation period, the frequency of twisting body and the analgesic inhibition rate of the mice in each group

与阴性组比较, (1)P<0.05,(2)P<0.01

Tab.4 Serum NO content in acetic acid writhing method in each group of mice

(1)与阴性组比较，P<0.05

和冰醋酸扭体法观察其镇痛效应，实验结果证明大乌泡水提物有良好的镇痛效果，而且高剂量与阴性组比较差异非常显著，对于临床应用有重大的意义。

NO是迄今为止在体内发现的第一个气体信息分子,已成为生物学领域研究的热点和前沿之一。NO作为一种神经递质和信息传递分子,在外周、中枢以及脊髓不同水平的痛觉调节中发挥重要作用。中枢神经系统内源性NO水平的降低表现出一定的镇痛效应;而在外周痛觉的调控中,认为抑制NO的合成可产生镇痛作用。本课题组采用硝酸还原酶法分别检测实验各组小鼠的血清中NO的含量，实验结果显示大乌泡水提物高剂量和中剂量组的NO含量与阴性对照组比较有显著差异，高剂量组和阴性对照组比较有显著性差异。实验结果说明大乌泡的镇痛作用机制可能是抑制NO的合成有关。

[1] 程伟,秦文杰,陈索红,等.大乌泡叶中总黄酮含量测定[J].中国中医药信息杂志， 2009(9)：42-43.

[2] 高冲，刘永平.中药镇痛作用机制及其发展概况[J].承德医学院学报， 2010(3)：321-323.

[3] 任守忠,李鑫，郭建生,等.安胃丸抗炎镇痛作用的实验研究[J].西北药学杂志， 2012(1):49-51.

[4] 陈艳芬，江涛，唐春平,等.高良姜总黄酮抗炎镇痛作用的实验研究[J].广东药学院学报， 2009(2)：188-191.

[5] 欧阳杰湖，潘善庆，陈子渊.刺壳花椒提取物消炎镇痛作用的实验研究[J].中医药导报， 2008(12)：71-73.

[6] 陈志东，吴铁,冯容喜.壮骨肾宝胶囊抗炎镇痛作用研究[J].时珍国医国药， 2007(9)：2223-2224.

[7] 徐淑云，卞如滚，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民出版社， 2002:882.

[8] 董燕，李萍.酶还原法测定血清中一氧化氮浓度[J].宁波医学， 2000(9):434-435.

[9] 李桂兰，杨文初.血清中亚硝酸盐浓度的催化光度测定法II[J].徐州医学院学报， 1998(5)：406-407.

[10]庞来祥，王玉香，刘燕,等.清咽亮嗓口服液抗炎、解热、镇痛作用研究[J].中医药信息， 2011(1)：52-54.

[11]佟继铭，刘玉玲，刘永平,等.赤雹根总皂苷镇痛作用机制研究[J].时珍国医国药， 2012(5)：1085-1087.

[12]杨建成,吴高峰,吕秋凤,等.牛磺酸对小鼠的镇痛作用研究[J].动物医学进展， 2010(11)：71-73.

[13]李先辉,李春艳,贾薇,等.野鸦椿提取物抗炎镇痛效应的研究[J].时珍国医国药， 2009(8)：2041-2042.

(2016-07-23收稿，2016-10-28修回)

中文编辑： 文箐颍； 英文编辑： 刘 华

An Study on Analgesic Effect of the Water Extract ofRubusmultibracteatusLevl.et Vant

MAO Zhengyi, LIU Yao,CAI Jin, CHEN Rui, MENG Xin, LIU Jiani, LIU Lina, HUANG Jing

(CollegeofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550025 ,Guizhou,China)

Objective: To investigate the analgesic effect of the water extract ofRubusmultibracteatusLevl.et Vant and observe the level of the nitric oxide content in the rat serum. Methods: Acetic acid writhing method and Hot-plate method were used to study the analgesic activities. Under the two methods, the mice were randomly divided into 5 groups: high dose group (5.2 g/kg crude drug), middle dose group (2.6 g/kg crude drug), low dose group (1.3 g/kg crude drug), positive control group (2.0 mg/kg morphine hydrochloride) and negative control group(normal saline). Hot plate induced pain threshold and changes of serum nitric oxide (NO) content in mice were observed under Hot-plate method while the latent period, the times of twisting, the inhibition rate of analgesia and the level of serum NO in mice were observed under Acetic acid twisting method. Results: Compared with the negative control group, the pain threshold was increased after treatment in positive group and NO level was decreased under Hot-plate method while the writhing body seizure latency was increased, writhing times were reduced and analgesic inhibition rate was increased under Acetic acid writhing method. The differences were statistically significant (P<0.05), which showed that the mouse model of Hot plate method and Acetic acid writhing were successfully established. In Hot plate method, compared with the negative control group, in high, middle and low dose group, the mice pain threshold was increased, serum NO content was reduced, and the difference was statistically significant (P<0.05). In Acetic acid writhing method, compared with the negative control group, the writhing body seizure latency was increased in high and low dose group, writhing times were reduced and analgesic inhibition rate was increased in high, middle and low dose group, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: The water extract ofRubusmultibracteatusLevl.et Vant shows significant analgesic effect, whose mechanism may be related to its power to reduce NO conten in serum.

analgesic effect; nitric oxide； mice;RubusmultibracteatusLevl.et Vant

**[基金项目]贵州省科技厅中药攻关项目[黔科合ZY(2011)3005]

E-mail:huangjgy@sohu.com

时间：2016-11-15 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1164.R.20161115.1757.012.html

R285.1

A

1000-2707(2016)11-1285-03

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.11.010

**贵州医科大学2012级硕士研究生