高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸钠含量

李 玲，陈乃江，姜 燕

(江苏省连云港市药品检验所，江苏 连云港 222006)

高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸钠含量

李 玲，陈乃江，姜 燕

(江苏省连云港市药品检验所，江苏 连云港 222006)

目的 建立测定对乙酰氨基酚口服溶液中防腐剂苯甲酸钠含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为乙腈－0.05 mol／L乙酸铵（15∶85），流速为1.0 mL／min，检测波长为230 nm，柱温为30℃，进样量为20 L。结果 苯甲酸钠质量浓度在10.04～100.4 g／mL范围内与峰面积线性关系良好(r＝0.999 9)，平均回收率为99.83%，RSD为0.99%（n＝9），苯甲酸钠检测限为1.3 ng。结论该方法适用于对乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸钠的质量控制，可为该品种标准的提升提供参考。

高效液相色谱法；对乙酰氨基酚口服溶液；苯甲酸钠；防腐剂；含量测定

对乙酰氨基酚是临床使用极其广泛的解热镇痛药[1]，属于乙酰苯胺类药物。对乙酰氨基酚口服溶液为液体制剂，在液体制剂的制备过程中很难完全避免微生物污染，为确保产品的安全性，会添加一定量的防腐剂，以达到有效的防腐目的[2]。苯甲酸及其钠盐由于价格低廉及抑菌范围广，目前在国内仍作为主要防腐剂添加到口服液类药品、食品中，但过量摄入防腐剂对人体有一定毒性。苯甲酸及其钠盐的使用颇受争议，在有些国家已经限制或禁止使用[3]。我国尚未对口服液类药品中防腐剂的含量测定方法作出规定，本研究参考有关防腐剂检验标准及文献[4－6]，采用高效液相色谱法对对乙酰氨基酚口服溶液中的苯甲酸钠含量进行测定，以便控制防腐剂使用量，保证用药的安全性，为提高产品质量标准提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695型高效液相色谱仪（Waters 2996 DAD检测器，Empower色谱工作站，Waters公司）；Sartorius BP211D型电子分析天平(十万分之一)。

1.2 试药

苯甲酸钠对照品（批号为 100433－200301，含量100%），购自中国食品药品检定研究院；对乙酰氨基酚口服溶液和滴剂（市售）；乙腈为色谱纯，乙酸铵为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流动相：乙腈－0.05 mol／L乙酸铵（15∶85）；流速：1.0 mL／min；检测波长：230 nm；柱温：30℃；进样量：20 μL。理论板数按苯甲酸钠峰计算应不低于4 000。

2.2 溶液制备

精密称取苯甲酸钠对照品50.21 mg，置100 mL容量瓶中，加水超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液5 mL置50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，即得对照品溶液。

精密量取本品2 mL置100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别取2.2项下对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图。结果苯甲酸钠与对乙酰氨基酚及其他杂质均能完全分开，苯甲酸钠的保留时间约为5.5 min，表明该方法专属性良好。色谱图见图1。

线性关系考察：精密量取上述对照品贮备液1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0 mL，分别置50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，各精密吸取20 μL注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标、对照品质量浓度（X，μg／mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝56 533 X＋14 515，r＝0.999 9(n＝7)。结果表明，苯甲酸钠质量浓度在10.04～100.4 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液（批号为AAF4519），分别于0，2，4，6，8，12 h时进样，记录峰面积。结果的 RSD为 0.8%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

图1 高效液相色谱图

精密度试验：取同一对照品溶液，连续进样6次，测定苯甲酸钠峰的面积。结果的 RSD＝0.4%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品（批号为 AAF4519），依法平行制备供试品溶液6份，分别进样测定。结果苯甲酸钠含量平均值为0.197%，RSD为0.5%（n＝6），表明方法的重复性良好。

加样回收试验：取9份已测知含量的样品（批号为AAG0388），精密量取1 mL，分别置100 mL容量瓶中，平均分成3组，分别精密加入对照品贮备液3，4，5 mL，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，计算回收率。结果见表1。

表1 苯甲酸钠加样回收试验结果（n＝9）

检测限和定量限确定：精密量取苯甲酸钠对照品溶液适量，加水逐步稀释进样，根据信噪比 S／N＝3和S／N＝10分别确定检测限和定量限。结果苯甲酸钠的检测限和定量限分别为1.3 ng和4.0 ng。

2.4 样品含量测定

取对乙酰氨基酚口服溶液和滴剂，依法制备供试品溶液，在拟订色谱条件下，精密吸取20 μL注入高效液相色谱仪，测定，记录峰面积，按外标法计算含量。结果见表2。

表2 苯甲酸钠含量测定结果（n＝5）

3 讨论

3.1 流动相选择

考察了不同的流动相体系对柱效和不同成分及杂质分离度的影响，结果表明，乙酸铵优于纯水相、乙腈－乙酸铵系统优于甲醇－乙酸铵系统；同时考察了流动相中不同浓度的乙酸铵对柱效的影响，结果在乙腈－0.05 mol／L乙酸铵（15∶85）条件下，各色谱峰之间的分离度较好，且基线平稳，峰形良好。

3.2 提取溶剂选择

考察了水和流动相作为提取溶剂，结果2种溶剂均能达到充分提取的效果。考虑到操作简便，因此选择水作为提取溶剂。

3.3 应用价值

在同一生产企业内，防腐剂苯甲酸钠添加的量基本一致，但不同企业间添加的量有较大差异性。苯甲酸钠广泛应用于口服液体制剂中，但对人体有一定毒性[3]，本试验建立的苯甲酸钠含量检测方法可对口服液体制剂的质量标准提高提供参考。

[1]刘文英.药物分析[M].北京：人民卫生出版社，2004：153.

[2]崔福德.药剂学[M].北京：人民卫生出版社，2003：19.

[3]兰金苹，宁丽峰，张益文，等.高效液相色谱法测定口服液类药品中苯甲酸的含量[J].中国卫生检验杂志，2009，19(1)：4－6.

[4]黎艳刚，段 峰，郭丽蓉，等.HPLC测定布洛芬口服溶液中苯甲酸钠、安赛蜜含量[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(8)：69－71.

[5]杨武军，刘雪峰.布洛芬混悬液中苯甲酸测定方法的建立[J].中国药师，2016，19(2)：382－384.

[6]李小安，吴少平，刘海静，等.盐酸氨溴索口服溶液中苯甲酸钠的含量测定方法学研究[J].安徽医药，2011，15(1)：40－42.

Content Determination of Sodium Benzoate in Acetaminophen Oral Solution by HPLC

Li Ling,Chen Naijiang,Jiang Yan
(Lianyungang Institute for Drug Control,Lianyungang,Jiangsu,China 222006)

Objective To determine the content of sodium benzoate in acetaminophen oral solution by HPLC.Methods The Phenomenex Gemini C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used,and the mobile phase was acetonitrile－0.05 mol／L ammonium acetate(15∶85).The flow rate was 1.0 mL／min and the detection wavelength was set at 230 nm.The column temperature was 30℃ and the injection volume was 20 μL.Results The linear range of sodium benzoate was 10.04－100.4 μg／mL(r＝0.999 9),the average recovery was 99.83% and RSD was 0.99%(n＝9),the limit of detection was 1.3 ng.Conclusion The method is applicable to the quality control of sodium benzoate in acetaminophen oral solution,which can provide reference for the standard improvement.

HPLC;acetaminophen oral solution;sodium benzoate;content determination;preservatives assay

R927.2；R971＋.1

A

1006－4931(2016)21－0063－03

2016－06－11)