高效液相色谱法测定巴戟口服液中淫羊藿苷含量

潘 伟，赵 悦，王小柳

（重庆市永川食品药品检验所，重庆 402160）

高效液相色谱法测定巴戟口服液中淫羊藿苷含量

潘 伟，赵 悦，王小柳

（重庆市永川食品药品检验所，重庆 402160）

目的 建立测定巴戟口服液中淫羊藿苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为 Syncronis C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为乙腈－水（30∶70），体积流量为1.0 mL／min，柱温为30℃，检测波长为270 nm。结果 淫羊藿苷进样量在0.010 2～0.101 5 g范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.38%，RSD＝1.51%（n＝6）。结论 该方法简便、准确、重复性好，可有效控制巴戟口服液的质量。

巴戟口服液；高效液相色谱法；淫羊藿苷；含量测定

巴戟口服液收载于《卫生部颁药品标准·中药成方制剂(第十四册)》，由巴戟天、何首乌、杜仲、肉苁蓉、续断、仙茅、金樱子、淫羊藿（叶）、覆盆子、当归、党参、熟地黄、枸杞子、甘草、黄芪及狗脊组方，有补肾壮腰、固精止遗、调经等功效[1－2]。淫羊藿为方中重要有效成分。淫羊藿在我国有悠久的药用历史，来源于小檗科Berberidaceae淫羊藿属 Epimedium L.植物，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效[3]。现代药理研究表明，淫羊藿提取物具有广泛的生理活性[4]，淫羊藿苷就是其中一种重要有效成分。目前，李丽娜等[5]研究了该制剂中二苯乙烯苷（何首乌有效成分）的含量。采用高效液相色谱法测定巴戟口服液中淫羊藿苷的含量，为进一步提高巴戟口服液的质量控制水平提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪及其化学工作站（美国Agilent公司，包括四元梯度泵、DAD检测器、自动进样器）；XP205型、AL204型电子天平（Mettler Toledo公司）；SB－5200DTDN型超声清洗器；UP超纯水机。

1.2 试药

甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。淫羊藿苷对照品（批号为110737－200415）购自中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Syncronis C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈－水（30∶70）；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL／min；柱温：30℃；进样量：10 μL。在此条件下，淫羊藿苷理论板数为12 394，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

称取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并制成100.00 μg／mL的对照品贮备液，稀释10倍，即得对照品溶液。精密量取供试品（重庆希尔安药业有限公司，批号为160302）1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方工艺称取不含淫羊藿成分，依法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品溶液1，2，3，4，5，10 μL，注入色谱仪，记录峰面积。以峰面积（A）为纵坐标、淫羊藿苷进样量（C）为横坐标进行线性回归，得回归方程 A＝2 247.4 C＋0.409 8，r＝1.000 0（n＝6）。结果表明，淫羊藿苷进样量在0.010 2～0.101 5 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积。结果的 RSD为0.60%（n＝6），表明仪器精密性良好。

重复性试验：取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果测得巴戟口服液中淫羊藿苷含量分别为20.04，20.52，20.37，19.86，20.17，19.77μg／mL，平均20.12 μg／mL，RSD为 1.43%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置12 h，每隔2 h进样10 mL，记录峰面积。结果的 RSD为1.00%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验：精密量取已知含量的同一批样品（批号为160302）1 mL，共6份，分别加入淫羊藿苷对照品适量，混匀，依法制备供试品溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果（n＝6）

2.4 样品含量均匀度测定

随机抽取同一批（批号为160302）巴戟口服液10支，每支精密量取1 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，照2.1项下条件进样测定，读取峰面积，按外标法计算含量。结果见表2。

2.5 样品含量测定

取对照品溶液和各批供试品溶液，各进样10 μL，记录峰面积，按外标法计算含量。结果批号为160302，160303，160401的样品中，淫羊藿苷含量分别为20.12，20.08，20.68 μg／mL。

表2 样品含量均匀度测定结果

3 讨论

查阅文献[6－7]及结合预试验，最终选取乙腈－水（30∶70）作为流动相，柱温为 30℃洗脱。在该体系下，淫羊藿苷色谱峰峰形良好，对称性高，背景干扰小。

由表2可见，同一批药品的含量差异不大，表明该制剂生产工艺较稳定。同时，从3批含量测定结果来看，不同批号的样品含量差异也不大，表明该制剂药材品质较为稳定。

2015年版《中国药典(一部)》[3]淫羊藿药材项下规定，淫羊藿苷的含量不得少于0.60%，按照处方折算理论值，本品含淫羊藿苷应为60 μg／mL，结合3批样品测定结果，实际淫羊藿苷的测得量约为20 μg／mL，这可能与提取工艺有关。故该结果可为巴戟口服液中淫羊藿苷限度的拟订提供依据。

中医认为，淫羊藿具有壮肾阳和补肾阴的功效[8]，可广泛应用于临床，但与含量相关。本试验所建立的方法准确、快速、高效，可为该药的质量控制提供科学依据。

[1]WS3－B－2668－97，卫生部颁药品标准·中药成方制剂(第十四册)[S].

[2]廖婷婷，罗先钦，黄崇刚，等.巴戟口服液补肾壮阳作用的实验研究[J].重庆中草药研究，2009（2）：23－26.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：327.

[4]范曾丽，权秋梅.淫羊藿的药理研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（17）：9 264－9 266.

[5]李丽娜，林生文，朱炳辉.HPLC测定巴戟口服液的含量[J].现代食品与药品杂志，2006，16（3）：31－32.

[6]赵世翔.高相液相色谱法测定万通筋骨片中淫羊藿苷的含量[J].中国药业，2012，21（14）：48－49.

[7]刘宝磊，孙佳石.高相液相色谱法测定补肾口服液中淫羊藿苷的含量[J].中国药业，2013，22（18）：56－57.

[8]狄凯军，张静波.国内外淫羊藿苷药理作用研究要览[J].自然杂志，2003，25（4）：191－196.

Content Determination of Icariin in Baji Oral Liquid by HPLC

Pan Wei，Zhao Yue，Wang Xiaoliu
（Yongchuan Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 402160）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of icariin in Baji Oral Liquid.Methods The Syncronis C18 column（250 mm × 4.6 mm，5 μm）was used with a mobile phase consisting of CH3CN－H2O （30∶70）at the flow rate of 1.0 mL／min；the column temperature was maintained at 30℃，and the detection wavelength was set at 270 nm.Results The standard curve for icariin was linear in the range of 0.010 2－0.101 5 μg.The average recovery was 99.38% with RSD of 1.51%（n＝6）.Conclusion The method is simple，accurate，reproducible，and can be used to the quality control of Baji Oral Liquid.

Baji Oral Liquid；HPLC；icariin；content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2016)22－0067－02

潘伟（1991－），男，江西宜春人，硕士研究生，助理工程师，主要从事药品检测工作，（电子信箱）weipan1103＠163.com。

2016－07－11)