胃癌组织中EGFR、Her-2的表达及相关性分析

戴木根 刘思宇 余璟璐 王永辉 叶斌

胃癌组织中EGFR、Her-2的表达及相关性分析

戴木根 刘思宇 余璟璐 王永辉 叶斌

胃癌是全世界范围内发病率第3位、病死率第2位的恶性肿瘤[1]，同时也位居我国恶性肿瘤病死率的前列，而传统的手术、化疗、放疗及综合治疗等措施，病死率高，疗效欠佳，不良反应大，因此，临床迫切需要探索更有效的治疗方法。分子靶向治疗能够针对肿瘤特定标志物，其治疗靶点小，化疗不良反应小，对延长肿瘤患者生存期疗效较确定，为恶性肿瘤提供了个体化治疗方案，已经成为胃癌综合治疗的重点和热点。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）以及人类表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor-2,Her-2）都是受体酪氨酸激酶家族HER/erbB成员，参与介导细胞分化、生存、迁移、侵袭、黏附、损伤修复等功能，和胃癌病理类型、淋巴结转移、预后等密切相关，是胃癌分子靶向治疗的重要靶点。本文旨在研究胃癌患者中EGFR、Her-2表达情况，分析其相关性和临床意义，为临床提供新的治疗方向，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 收集2013年1月至2015年12月在本院行胃癌根治术的214例胃癌患者，术前均未放疗及化疗，收集术后病理标本及相应癌旁组织，病理标本经甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，组织学检查确诊为腺癌。其中男152例，女62例；年龄31～89岁，中位年龄61岁；病理类型：高分化腺癌11例（5.1%）、中分化腺癌（高-中分化腺癌、中分化腺癌）69例（32.3%）、低分化腺癌（低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌）134例（62.6%）；TNM分期依据2013年第2版的《AJCC癌症分期手册》，其中Ⅰa期13例（6.1%）、Ⅰb期29例（13.5%）、Ⅱa期19例（8.9%）、Ⅱb期22例（10.3%）、Ⅲa期27例（12.6%）、Ⅲb期33例（15.4%）、Ⅲc期59例（27.6%）、Ⅳ期12例（5.6%）；HE组织切片检查见脉管癌栓103例（48.1%），神经侵犯58例（27.1%）。

1.2 试剂 鼠抗人单克隆抗体(ZM-0093，克隆号UMAB96)和兔抗人单克隆抗体（ZA-0023，克隆号EP3）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 方法 采用免疫组织化学Envision二步法。首先石蜡切片，胃癌组织经4%甲醛固定、脱水、石蜡包埋后，蒸馏水充分冲洗后用PBS溶液浸泡5min；然后再用3%H2O2在室温下孵育5～10min，用PBS溶液充分冲洗3次，每次2min，滴加一抗工作液，37℃孵育1～2h，用PBS溶液充分冲洗3次，每次2min，滴加试剂Envision通用型二抗50μl，室温孵育20min，用PBS溶液冲洗3次，每次2min，显示剂染色（DAB），自来水充分冲洗，苏木素复染1～2min，水洗蓝化、脱水、透明、封片、镜检。

1.4 结果判读 EGFR：胃癌组织中细胞无着色或胃癌组织中着色癌细胞数占总细胞数＜10%为阴性。阳性着色一般显色在胃癌细胞膜处，呈现棕色或棕褐色。着色细胞≥10%而细胞膜非环状着色为（+）；10%～50%细胞膜轻/中度环状着色为（++）；＞50%细胞膜环状强着色为（+++）。Her-2：无反应为阴性；＜10%出现细胞膜着色为（+）；10%～30%着色呈棕黄色或棕褐色为（++）；＞30%强着色为（+++）。

1.5 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件；计数资料以频数和构成比表示，无序分类资料采用χ2检验，单向有序分类资料采用趋势χ2检验，偏态资料采用秩和检验。EGFR与Her-2在胃癌中表达的相关性采用Spearman秩相关分析。

2 结果

2.1 EGFR和Her-2在胃癌中的表达及其相关性 胃癌组织中EGFR表达（+++）阳性率为36.5%，（++）阳性率为16.8%，（+）阳性率为22.4%，阴性率为24.3%；Her-2表达（+++）阳性率为17.3%，（++）阳性率为14.5%，（+）阳性率为32.2%，阴性率为36.0%；EGFR和Her-2两者共同表达阳性率为61.7%（132/214）。但这些患者中，癌旁组织未见EGFR、Her-2的高表达。Spearman秩相关分析显示EGFR与Her-2在胃癌组织中的表达呈正相关（r=0.416，P＜0.05），见表1。

表1 EGFR和Her-2在胃癌中的表达（例）

2.2 EGFR、Her-2蛋白表达与胃癌临床病理因素的关系 EGFR的表达与胃癌患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度神经侵犯和脉管癌栓无相关（均P＞0.05），与淋巴结转移和TNM分期相关（均P＜0.05）。Her-2的表达与胃癌患者性别、年龄、肿瘤直径和TNM分期无相关（均P＞0.05），与分化程度、神经侵犯、脉管癌栓和淋巴结转移相关（均P＜0.05），见表2。

表2 EGFR和Her-2阳性表达与临床病理因素的关系[例（%）]

3 讨论

胃恶性肿瘤是一个多因素、多步骤作用的结果，在这个过程中其表达的许多蛋白及细胞因子间可能存在相互影响。Her/erbB家族信号通路参与了肿瘤细胞的增殖、分化、迁移、黏附、抗凋亡和细胞转化[2-4]，EGFR、Her-2在Her/erbB家族的活化和信号传导中起重要作用。EGFR通常位于细胞膜表面，促进细胞增殖，EGFR阳性表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用，其与肿瘤细胞的肿瘤侵袭、增殖、血管生成、转移及细胞凋亡的抑制都有关联，它的过表达往往预示恶性肿瘤预后不良[5-6]。Her-2与EGFR结构相似，正常情况下Her-2处于非激活状态，当Her-2受到某些致癌因素的作用后，因其结构或表达失控而被激活表达Her-2蛋白，从而使胃癌组织具有肿瘤转化活性，可促使细胞间发生恶性转化[7]。检测胃癌组织中过度表达的EGFR、Her-2有助于判断预后。

本研究结果显示214例胃癌患者中EGFR、Her-2的表达率较高，而在胃癌旁组织中均未见阳性表达。结果提示EGFR、Her-2表达是胃黏膜细胞发生癌变的重要标志，可作为胃癌诊断和预后的参考指标[8]。此外，EGFR、Her-2的表达和性别、年龄、肿瘤直径均无相关性，即表明胃癌一旦发生两种蛋白可以稳定地表达。临床TNM分期中，Ⅲ、Ⅳ期EGFR、Her-2的阳性表达明显多于Ⅰ、Ⅱ期，说明伴随着肿瘤的发展，侵袭、浸润能力的增强，EGFR、Her-2的表达也随之增强，从而进一步加速了胃癌的恶化。Spearman秩相关分析显示EGFR与Her-2在胃癌组织中的表达呈正相关。EGFR和Her-2有共同的细胞外区、跨膜区和细胞内区，伴随着EGFR的信号传导增加可上调Her-2的信号传导，EGFR与Her-2联合表达对胃癌的进展可能有协同作用[9]。本研究结果还发现，61.7%的患者EGFR和Her-2同时表达，两者表达呈正相关，但具体的机制尚未阐明，需进一步研究。

总之，EGFR与Her-2均具有跨膜酪氨酸及酶活性，可促进肿瘤的发生、发展。本研究表明，两个指标相互之间存在复杂而密切的联系，通常在胃恶性肿瘤细胞中过度表达。而且表达水平与胃癌浸润程度、预后及患者生存率相关，是预后不良的重要指标[10]。探究其表达及相互关系可更清楚地了解胃癌的发生、发展及生物学行为，对诊断、治疗及预后预测有重要的临床意义，同时可以为靶向药物的个体化治疗提供参考和疗效预测。

[1] Strong VE,D'Amico TA,Kleinberg L,et al.Impact of the 7th Edition AJCC staging classification on the NCCN clinical practice guidelines in oncology for gastric and esophageal cancers[J].J NatlCompr Canc Netw,2013,11(1):60-66.

[2] Meric-Bernstam F,Hung MC.Advances in targeting human epidermal growth factor receptor-2 signaling for cancer therapy[J]. Clin Cancer Res,2006,12(12):6326-6330.

[3] Holbro T,CivenniG,Hynes N E.The ErbB receptors and their role in cancer progression[J].Exp CellRes,2003,284(1):99-110.

[4] Korkaya H,Paulson A,Iovino F,et al.HER2 regulates the mammary stem/progenitor cell population driving tumorigenesis and invasion[J].Oncogene,2008,27(47):6120-6130.

[5] Pérez-Soler R.HER1/EGFR targeting:refi ning the strategy[J]. Oncologist,2004,9(1):58-67.

[6] Stonecypher M S,Chaudhury A R,Byer S J,et al.Neuregulin growth factors and their ErbB receptors form a potential signaling network for schwannoma tumorigenesis[J].J Neuropathol Exp Neurol,2006,65(2):162-175.

[7] 张成，高广荣,李达,等．PAR-2、EGFR和Ki67在胃癌组织中的表达及临床意义[J].中华临床医师杂志,2013,7（4）:1450-1453．

[8] 陈斌,罗荣城,崔斐,等.胃癌Her-2/NEU基因表达与预后相关性[J].南方医科大学学报,2006,26（3）:265-267．

[9] Onn A,Correa A M,Gilcrease M,et al.Synchronous overexpression of epidermal growth factor receptor and HER2-neu protein is a predictor of poor outcome in patients with stage I non-small celllung cancer[J].Clin Cancer Res,2004,10(1 Pt 1):136-143.

[10] 卞保祥,郑义同,宴淼,等．EGFR及Her-2蛋白在胃癌组织中的表达临床价值[J].白求恩军医学院学报,2011,9（4）:249-251.

2016-02-28）

（本文编辑：陈丽）

323000 丽水市中心医院消化内科（戴木根、叶斌），检验科（刘思宇、余璟璐），肿瘤科（王永辉）

叶斌，E-mail：yebind2016@163.com