高效液相色谱法测定抑毒调肝合剂中虎杖苷含量*

罗宏丽，肖顺林，陈　昆

（西南医科大学附属医院药学部，四川 泸州　646000）

高效液相色谱法测定抑毒调肝合剂中虎杖苷含量*

罗宏丽，肖顺林，陈昆

（西南医科大学附属医院药学部，四川 泸州646000）

目的 建立测定抑毒调肝合剂中虎杖苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（23∶77），检测波长为306 nm，流速为1.0 mL／min，柱温为30℃。结果 虎杖苷质量浓度在20.32～203.20 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 1），平均回收率为94.76%，RSD为1.77%（n=9）。结论 该方法简便、快速、准确、重复性好，可用于抑毒调肝合剂的质量控制。

高效液相色谱法；抑毒调肝合剂；虎杖苷；含量测定

抑毒调肝合剂是由丹参、黄精、虎杖、党参、贯众5味中药组方的中药复方制剂，经水煮醇沉而成，服用方便，具有补气、解毒、调肝、健脾的作用，临床用于治疗症见疲乏无力、不思饮食、肝区隐痛、自汗的慢性肝炎患者。虎杖苷作为虎杖的主要成分之一，已被《中国药典》定为虎杖药材的定量指标，具有改善微循环、抗脂质过氧化损伤、保肝等重要药理作用［1-3］，故以虎杖苷作为本制剂的定量指标具有重要意义。本研究中以虎杖苷为指标成分，建立了测定抑毒调肝合剂中虎杖苷含量的高效液相色谱（HPLC）法，方法简单、快速、分离度好、重复性好，可用于抑毒调肝合剂的质量控制。现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

Dionex Ultimate3000型高效液相色谱仪（美国戴安公司）；Kromasystem2000型色谱工作站，Hamilton ASO-0023型液相色谱进样器（Bio.Tek Instrument Snl公司）；Sartorius1712型分析天平（德国 Sartorius公司）；AS10200型超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。

1.2试药

虎杖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为111575-200502）；抑毒调肝合剂（西南医科大学附属医院，批号分别为150312，150425，150516，150620，规格为每支20 mL）；乙腈为色谱纯，乙醇为分析纯，水为重蒸馏水。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30℃；流动相：乙腈-水（23∶77）；流速：1.0 mL／min；检测波长：306 nm；进样量：20 μL。

2.2溶液制备

对照品溶液：称取虎杖苷对照品5.08 mg，精密称定，置5 mL容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。

供试品溶液：精密量取抑毒调肝合剂5 mL，置具塞锥形瓶中，用45 mL稀乙醇超声30 min，冷却，摇匀，静置，取上清液置50 mL容量瓶，用稀乙醇定容，作为供试品溶液。

阴性对照品溶液：按处方比例称取不含虎杖的其他药材，按抑毒调肝合剂生产工艺制备缺虎杖的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

系统适用性试验：分别精密吸取2.2项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL，注入色谱仪，按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。在此色谱条件下，对照品溶液与供试品溶液色谱主成分峰的保留时间基本一致，阴性对照无干扰，见图1。其理论板数按虎杖苷峰计应不低于3 000。

图1　高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取虎杖苷对照品溶液0.1，0.2，0.5，0.8，1.0 mL，分别置5 mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，制成质量浓度依次为 20.32，40.64，101.60，162.56，203.20 μg／mL的系列标准溶液，摇匀，按拟订色谱条件分别进样20 μL，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=1.152 2X-4.161 3，r=0.999 1（n=5）。结果表明，虎杖苷质量浓度在20.32～203.20 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液20 μL，按2.1项下色谱条件重复进样6次，记录色谱图。结果的RSD为0.76%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，在室温条件下分别于0，2，4，6，8，10，12，24 h时进样20 μL，记录峰面积。结果的 RSD为1.16%（n=8），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批（批号为150516）样品适量，共5份，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定峰面积。结果虎杖苷的平均含量为151.64 μg／mL，RSD为1.21%（n=5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取5 mL已知含量的抑毒调肝合剂适量，置试管中，再分别精密加入低、中、高质量浓度的虎杖苷对照品溶液，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4样品含量测定

分别取4批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定不同批号的样品中虎杖苷的含量。结果批号分别为 150312，150425，150516，150620的样品中虎杖苷的含量分别为155.36，149.05，158.72，164.83 μg／mL。

3　讨论

取虎杖苷对照品溶液，在200～400 nm波长范围进行紫外扫描，发现在306 nm波长处有最大吸收，所以选取306 nm为检测波长。本试验中考察了乙腈-水（18∶82）、乙腈-水（20∶80）、乙腈-水（25∶75）、乙腈-水（23∶77）等不同流动相对主峰保留时间、峰形及分离度的影响［4-9］。结果发现，乙腈-水（23∶77）作为流动相能实现虎杖苷与其他成分的有效分离，峰形良好，保留时间适当，理论板数较高，故选其作为流动相。试验还发现，柱温对虎杖苷分离测定影响较大，在25℃时，主峰的保留时间过长，柱温过高，其分离度不好，当柱温选择30℃时，结果满意，故选用30℃为柱温。

虎杖苷在光照条件下不稳定，易分解，故试验需避光操作。虎杖苷易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水，在提取过程中考察了以甲醇、50%甲醇、无水乙醇、50%乙醇（稀乙醇）为提取溶剂，分别进行15，20，25，30，35 min超声。结果发现，稀乙醇超声提取30 min效果最好，样品回收率高，方法简便，易于操作，且用稀乙醇作为溶剂的供试品溶液在24 h内稳定。

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中国药业，2011，20（10）：29-30.

Content Determination of Polydatin in Yidu Tiaogan Mixture by HPLC

Luo Hongli，Xiao Shunlin，Chen Kun
（Department of Pharmacy，The Affiliated Hospital of Southwest Medical College，Luzhou，Sichuan，China 646000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of polydatin in Yidu Tiaogan Mixture.MethodsThe analysis was carried out at 30℃on an Hypersil C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase consisted of acetonitrilewater（23∶77）and a flow rate of 1.0 mL／min.The detection wavelength was 306 nm.ResultsThe calibration curve of polydatin was linear in the range of 20.32-203.20 μg／mL（r=0.999 1）.The average recovery was 94.76%，RSD=1.77%（n=9）.Conclusion This method is simple，accurate，reproducible and applicable for the quality control of Yidu Tiaogan Mixture.

HPLC；Yidu Tiaogan Mixture；polydatin；conten determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）20-0045-03

*四川省泸州市科技计划项目，项目编号：2015-S-45（3／5）。

罗宏丽（1979-），女，汉族，四川乐山人，硕士研究生，主管药师，研究方向为临床药学，（电话）0830-3165750（电子信箱）luohongli＠stu.xjtu.edu.cn。

（2015-10-14；

2016-06-08）