海南省规模猪场猪传染性胸膜肺炎的血清学调查

张 艳,刘海隆,林哲敏,曹宗喜,谭树义

(1.海南省农业科学院畜牧兽医研究所，海南海口 571100；2.海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海南海口 571100)



海南省规模猪场猪传染性胸膜肺炎的血清学调查

张 艳1,2,刘海隆1*,林哲敏1,2,曹宗喜1,2,谭树义1,2

(1.海南省农业科学院畜牧兽医研究所，海南海口 571100；2.海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海南海口 571100)

为了解海南省规模猪场猪传染性胸膜肺炎(PCP)的感染情况，采集海南省8个市县16个不同规模猪场血清样品1286份，用ELISA方法对猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)ApxⅣ抗体进行检测，分析APP的感染情况。结果显示，1286份猪血清样品共检出阳性样品436份，抗体阳性率为33.90%。其中，检测母猪血清326份，抗体阳性率为47.85%；检测哺乳仔猪血清324份，抗体阳性率为37.65%；检测保育猪血清316份，抗体阳性率为18.99%；检测育肥猪血清320份，抗体阳性率为30.63%。8个市县均有APP感染，其中文昌市APP抗体阳性率最高；不同规模猪场均有APP感染，其中中型规模猪场APP抗体阳性率最高；不同品种猪均有APP感染，其中杜长陆三元杂猪APP抗体阳性率最高。说明PCP在海南省部分规模猪场中普遍存在，对猪场进行PCP的控制是十分必要的。

猪传染性胸膜肺炎；胸膜肺炎放线杆菌；血清学调查

猪传染性胸膜肺炎 (Porcine contagious pleuropneumonia,PCP) 是由胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacilluspleuropneumoniae,APP) 引起的一种高接触性传染的呼吸道疾病，以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征。APP主要通过咳嗽、喷嚏喷出带病原的分泌物和渗出物，经上呼吸道感染，也可经消化道传播。6周龄～16周龄的猪易感染，尤以3月龄的猪发病率最高，可达80%～100%，病死率50%[1]。一些病猪康复后常伴有慢性肺炎，导致生长停滞且长期带菌而成为其他猪的传染源，此病给养猪业造成较大的经济损失。1957年英国的Pattison等首次报道该病。在我国自杨旭夫等于1990年报道此病以来，现已经成为严重危害养猪业发展的主要呼吸道疾病之一[2]。近年来，随着养猪业的规模化、集约化发展，PCP的发病情况日益严重，感染率呈上升趋势，有扩大蔓延之势[3-4]。因此，为了解PCP在海南省的流行情况，以确定有效的防控措施，我们于2014年10月到2015年2月，对海南省不同规模化猪场的不同阶段猪群进行了PCP血清学调查。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 待检样品 血清样品来自海南省海口市、文昌市、临高县、澄迈县、琼海市、屯昌县、儋州市8个市县16个规模化猪场，共计1286份。其中，每个市县随机选择2个规模化猪场，每个猪场各个阶段的猪(哺乳仔猪、保育猪、育肥猪、母猪)都有饲养。每个猪场选母猪、哺乳仔猪(0～30日龄)、保育猪(31日龄～70日龄)、育肥猪(71日龄～150日龄)为采样对象，每个阶段采样不少于18头。前腔静脉或耳静脉采集血液，离心后分离血清，4℃保存备用。

1.1.2 试剂 猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV-ELISA抗体检测试剂盒，购自武汉科前动物生物制品有限责任公司，批号为141004。

1.2 方法

采用ELISA 方法进行检测，试验方法按试剂盒说明书进行，具体试验方法如下。①试剂的准备：在使用前所有试剂在常温下平衡；浓缩洗涤液用蒸馏水作20倍稀释，混匀，备用；②样品稀释：在血清稀释板中按1∶40的体积稀释待检血清样品(195μL样品稀释液中加5μL待检血清)；③对照稀释：在血清稀释板中按1∶4分别稀释阳性对照和阴性对照(180μL样品稀释液中加60μL对照血清)；④取抗原包被板，将稀释好的待检血清、阴性对照和阳性对照各取100μL加入到抗原包被板中，待检血清设1孔，阴、阳对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品，置37℃下温育30min。⑤甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板5次，200μL/孔，每次静置3min后倒掉液体，并在干净吸水纸上拍干。⑥每孔加羊抗猪酶标二抗100μL，置37℃下温育30min。⑦洗涤5次，方法同⑤。⑧每孔先加底物液A 50μL，再加底物液B 50μL，混匀，置室温下(20℃～25℃)避光显色10min。⑨每孔加终止液50μL，10min内测定结果。

在酶标仪上测各孔OD 630nm值。试验成立的条件是：阳性对照孔OD 630nm值均≥0.6；阴性对照孔OD 630nm值均<0.3。如果S(样品孔OD 630nm值)≥ P(阳性对照孔OD 630nm值)×0.25，判为阳性；如果S

2 结果

2.1 不同地区APP的检测结果

共检测1286份猪血清，总阳性率为33.90%，不同采样点APP检测结果见表1。由表1可以看出，APP在所有调查地区均有检出，其中屯昌县APP抗体阳性率最低，为18.75%；文昌市APP抗体阳性率最高，为51.81%。

表1 不同地区APP检测统计Table 1 Statistics of APP detection in different areas

2.2 不同生长阶段猪APP的检测结果

APP抗体阳性率与猪的日龄存在一定关系，具体见表2。其中，母猪的APP抗体阳性率最高，为47.85%；其次是哺乳仔猪，为37.65%，育肥猪为30.63%；保育猪APP的抗体阳性率最低，为18.99%。

表2 不同生长阶段猪APP检测统计Table 2 Statistics of APP detection in different growth stages of pigs

2.3 不同养殖规模猪场APP的检测结果

APP抗体阳性率与猪场的规模存在一定关系，具体见表3。其中，中型规模场APP的抗体阳性率最高，为40.85%；其次是大型规模场，为34.17%；小型规模场APP的抗体阳性率最低，为26.88%。

表3 不同养殖规模猪场APP检测统计Table 3 Statistics of APP detection in different scale pig farms

2.4 不同品种猪APP的检测结果

不同品种猪APP的抗体阳性率略有不同，具体见表4。其中，屯昌黑猪的APP抗体阳性率最低，为27.50%；其次是定安黑猪，为32.50%，五指山猪为33.75%，杜长大三元杂猪为34.81%；杜长陆三元杂猪的APP抗体阳性率最高，为35.80%。

表4 不同品种猪APP检测统计Table 4 Statistics of APP detection in different breeds of pigs

3 讨论

3.1 检测方法

目前诊断PCP常用的血清学方法主要有间接血凝反应和酶联免疫吸附试验(ELISA)[5]。其中，间接血凝反应敏感、操作简单，可进行早期诊断，但也存在自身的局限性，如亚临床感染或带菌状态下易造成假阴性；酶联免疫吸附试验敏感性好，简便快速，适合于临床诊断、实验室检测和血清学调查等[6]。APP是引起PCP的主要病原菌，研究发现APP的l5个血清型菌株均能在感染猪体内分泌外毒ApxIV，且ApxIV种属特异性强，是一种用于临床诊断的良好抗原[7-8]。ApxlV -ELISA可有效区分APP灭活疫苗或亚单位疫苗免疫猪与自然感染猪，并能与其他猪呼吸道疾病病原如猪链球菌、副猪嗜血杆菌等进行鉴别诊断[9]。因此，APP ApxIV-ELISA抗体检测试剂盒更适合基层大批量检测APP感染情况。

3.2 不同地区 PCP流行情况

我国多个省市均有PCP的血清学调查报告，但是血清抗体阳性率有所差别。如广东东莞地区APP抗体总阳性率为20.06%[10]，湖南省部分猪场APP抗体总阳性率为34.46%[11]，湖北西南地区APP抗体总阳性率为28.18%[12]。本次调查发现，APP在海南省8个市县16个规模猪场均有检出，APP抗体总阳性率达到33.90%；其中文昌市APP抗体阳性率最高，为51.81%。说明APP在海南省部分规模猪场中普遍存在，感染率较高，分析原因可能有：①引种传播，部分三元杂猪场不能做到自繁自养，需要引种，因检疫把关不严，从而将本病引入场内；②调研猪场大多存在单位面积饲养密度大，相互拥挤，造成接触传播；③卫生条件差，粪便不能及时清理，空气质量差，不通风；④防治不及时，所有调查猪场均未进行PCP疫苗的免疫接种，部分猪场PCP的防控意识淡薄，存在发病后才治疗的现象。

此外，猪群感染APP的情况可根据临床症状的有无和血清学状态依次划分为3个类型，即临床症状阳性血清学阳性(1类)；临床症状阴性血清学阳性(2类)；临床症状和血清学均为阴性(3类)[13]。本次调查发现2类居多，说明海南部分猪场APP的隐性感染普遍。因此，各养殖场和动物防疫部门应当高度重视，对猪场进行PCP的防控，防止2类猪群转化为1类，引起PCP暴发。

3.3 不同规模猪场PCP的流行情况

不同规模猪场APP的感染存在差异。调查发现，中型规模猪场APP抗体阳性率最高，为40.85%；其次是大型规模场，小型规模猪场APP的抗体阳性率最低。这与张光辉等[14]对河南省APP血清学调查发现的小型养猪场APP抗体阳性率最高，大型养猪场APP抗体阳性率最低的结果不一致，这可能与当地猪的饲养密度、管理水平、防疫水平、环境等因素有关。在海南中、大型规模猪场饲养密度大，病原传播风险高。大部分调研中型规模猪场饲养管理和疫病防控水平弱于大型猪场，缺乏猪日常保健用药方案。而部分调研小型猪场猪的饲养密度较低，管理人员责任心强于中型养猪场，所以出现中型规模猪场APP抗体阳性率最高的结果。

3.4 不同生长阶段猪PCP的流行情况

调查发现，APP在所有阶段的猪均有感染，其中母猪和哺乳仔猪的阳性率较高，分别为47.85%和37.65%，这与桂文龙等[15]对江苏兴化市PCP的血清学调查结果一致。推测可能由于母猪饲喂时间较长，加之管理不严和饲养条件有限，较易感染APP，如果感染没有引起发病，就易成为带菌者，长期以来就容易产生抗体。而哺乳仔猪的阳性率较高，可能是母源抗体和自然感染的双重结果。

3.5 不同品种猪PCP的流行情况

从检测结果来看，杂交猪的APP抗体阳性率略高于地方猪，如杜长陆三元杂交猪的APP抗体阳性率为35.80%，杜长大三元杂交猪的APP抗体阳性率为34.81%。这可能与杂交猪场对外引种，检疫不严，引入本病有关。

综上所述，PCP在海南省部分猪场普遍存在，养猪场应加强对猪场的饲养管理，提高猪的卫生环境和饲养条件，加强对PCP的防控(尤其是母猪和仔猪)，定期进行疫苗免疫接种。

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Serological Investigation on Porcine Contagious Pleuropneumonia in Scale Pig Farms of Hainan Province

ZHANG Yan1,2,LIU Hai-long1,LIN Zhe-min1,2,CAO Zong-xi1,2,TAN Shu-yi1,2

(1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,HainanAgriculturalAcademy,Haikou,Hainan,571100,China；2.KeyLaboratoryofTropicalAnimalBreedingandDiseaseResearch,Haikou,Hainan,571100,China)

In order to understand the infection of porcine contagious pleuropneumonia(PCP) in scale pig farms of Hainan province,1286pig sera collected in 16different scaled pig farms in Hainan province were tested withActinobacilluspleuropneumoniae(APP) ApxⅣ antibody detection kit.The results showed the total positive rates were 33.90% (436/1286),among which the positive rate was 47.85% (156/326) in sows,37.65% (122/324) in sucking pigs,18.99% (60/316) in weaned pigs and 30.63% (98/320) in fattening pigs.Wenchang city got the highest positive rate，and middle-scaled pig farms got higher positive rate too.All the breeds were infected with APP,the DLL hybrid pigs got the highest positive rate.The above results indicated that the porcine contagious pleuropneumonia occurred in part scale pig farms of Hainan and the PCP control is necessary.

Porcine contagious pleuropneumonia;Actinobacilluspleuropneumoniae; serological investigation

2015-05-28

海南省科研院所技术开发专项(KYYS-2014-32)

张 艳(1979-)，女，山西阳城人，副研究员，博士，主要从事动物疫病防治研究。*通讯作者

S858.28

B

1007-5038(2016)01-0129-04