新疆地区牛和新引进牛大肠埃希菌耐药性比较

林亚军，季建莉，赵红琼，江 萍，帕力达亚森，夏利宁*

(1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052；2.新疆农业职业技术学院，新疆昌吉 831100)



新疆地区牛和新引进牛大肠埃希菌耐药性比较

(1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052；2.新疆农业职业技术学院，新疆昌吉 831100)

为了解新疆地区牛和新引进牛大肠埃希菌对临床常用抗菌药物的耐药差异，采用微量肉汤稀释法对分离的大肠埃希菌进行耐药性检测，通过卡方检验比较新疆地区牛和引进牛大肠埃希菌耐药性的差异。结果显示，新疆地区牛大肠埃希菌和引进牛大肠埃希菌除对氨苄西林(地区牛为11.90%、引进牛为6.25%)和阿莫西林(地区牛为5.55%、引进牛为5.21%)有较高的耐药率外，对其他临床常用抗菌药物的耐药率均较低，但引进牛对氟苯尼考、庆大霉素和安普霉素的中度敏感率分别为82.81%、44.79%和33.33%。经卡方检验比较，新疆引进牛对氟苯尼考、庆大霉素、安普霉素、阿莫西林和氨苄西林的中度敏感率显著高于新疆地区牛(P<0.05)。虽然被检牛源大肠埃希菌对常用抗菌药物耐药较低，但引进牛大肠埃希菌高中度敏感率会导致其耐药率短期内迅速增高，因此须在临床治疗引进牛细菌性疾病中避免使用中度敏感率高的抗菌药物。

地区牛；引进牛；大肠埃希菌；耐药率；比较

致病性大肠埃希菌为人医和兽医临床感染中最常见的病原菌之一。从发病情况看，大肠埃希菌病发病率在细菌病引发的疾病中居世界首位[1]。抗菌药物一直作为治疗大肠埃希菌病的首选药物，但随着兽医临床上的广泛应用，使大肠埃希菌耐药菌株增多，耐药谱扩大，同时加剧抗菌药物在畜禽体内的残留，给我国畜牧业的持续发展和人类的身体健康带来潜在危害[2]。目前，许多研究者对所在地牛源大肠埃希菌对临床常用抗菌药物的耐药情况进行检测[3-6]，但对新疆地区牛与引进牛大肠埃希菌的耐药情况却鲜见报道，耐药情况不明。本试验对从新疆地区牛和引进牛粪样中分离的大肠埃希菌进行药物敏感性试验，并比较新疆地区牛和引进牛大肠埃希菌对抗菌药物的耐药率，其耐药结果可为临床合理使用抗菌药物提供指导。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 2015年1月在新疆阿克苏某规模化养殖场和新疆伊犁某规模化养殖场进行样品采集，采集对象为新疆地区牛，通过肛拭子在直肠采集新鲜粪样共180份。

2015年6月在新疆石河子某规模化养殖场进行样品采集，采集对象为引进牛(新西兰牛和澳洲牛)，通过肛拭子在直肠采集新鲜粪样共192份。

1.1.2 菌株及培养基 大肠埃希菌标准质控菌(ATCC25922)购自杭州天和微生物试剂有限公司；Mueller-Hinton(MH)培养基、麦康凯培养基、普通肉汤和伊红美蓝培养基均购自北京奥博星生物技术有限公司。

1.1.3 药品 β-内酰胺类：阿莫西林(含量95.0%)(amoxicillin，AML)、头孢噻呋(含量89.6%)(ceftiofur，CEF)和氨苄西林(含量99.4%)(ampicillin，AMP)；喹诺酮类：环丙沙星(含量93.9%)(ciprofloxacin，CIP)、诺氟沙星(含量99.9%)(norfloxacin，NOF)和恩诺沙星(含量99.5%)(enrofloxacin，ENR)；氨基糖苷类：安普霉素(含量55.9%)(apramycin，APR)、阿米卡星(含量65.5%)(amikacin，AMK)和庆大霉素(含量63.3%)(gentamicin，GEN)；酰胺醇类：氟苯尼考(含量98.0%)(florfenicol，FLR)。上述药品均为标准品购自中国兽药监察所。

1.2 方法

1.2.1 大肠埃希菌分离鉴定方法 用灭菌肛拭子轻插入牛的肛门内，将沾有粪样的肛拭子放入内含1 mL灭菌营养肉汤的2 mL EP管中，恒温培养箱内37 ℃ 培养12 h，用接种环将样液在麦康凯琼脂平板上划线，置于恒温培养箱内37 ℃ 培养18 h～24 h 后，平板上生长出一致的粉红色菌落，挑取单菌落，经革兰染色及生化鉴定后，确定为大肠埃希菌后保存备用。

1.2.2 大肠埃希菌药敏试验及其判定方法 按美国临床实验室标准委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)推荐的微量肉汤稀释法进行，分别对地区牛和引进牛大肠埃希菌进行上述10种药物最小抑菌浓度(MIC)的测定，判断结果分别以敏感、中介和耐药3种形式记录结果[7-8]。

1.2.3 统计分析 耐药率差异性统计采用SPSS 20软件进行卡方检验。

2 结果

2.1 大肠埃希菌的分离鉴定

对新疆地区牛共采集的180份粪样经细菌的分离培养共分离得到126株大肠埃希菌，分离率为70.0%。对新疆引进牛共采集的192份粪样经细菌的分离培养共分离得到192株大肠埃希菌，分离率为100%。

2.2 新疆地区牛和引进牛大肠埃希菌耐药情况及其差异性比较

由表1可知，新疆地区牛大肠埃希菌对氨苄西林(11.90%，15/126)、阿莫西林(5.55%，7/126)、环丙沙星(2.38%，3/126)和诺氟沙星(1.59%，2/126)耐药。同时，对阿莫西林(12.70%，16/126)、氨苄西林(10.32%，13/126)和庆大霉素(8.73%，11/126)有相对较高的中度敏感率。新疆引进牛大肠埃希菌对氨苄西林(6.25 %，12/192)、阿莫西林(5.21%，10/192)、头孢噻呋(0.52%，1/192)、庆大霉素(0.52%，1/192)、恩诺沙星(0.52%，1/192)、环丙沙星(0.52%，1/192)和氟苯尼考(0.52%，1/192)耐药。引进牛对氟苯尼考(82.81%，159/192)、庆大霉素(44.79%，86/192)、安普霉素(33.33%，64/192)和阿莫西林(28.65%，55/192)有较高的中度敏感率。通过卡方检验发现，新疆地区牛对氨苄西林的耐药率显著高于引进牛(P<0.05)，新疆引进牛对氟苯尼考、庆大霉素、安普霉素、阿莫西林和氨苄西林的中度敏感率显著高于新疆地区牛(P<0.05)。

表1 新疆地区牛和引进牛大肠埃希菌对被检药物的耐药性比较

Table 1 Comparison of resistance rate ofE.colifrom local cattle and imported cattle of Xinjiang to detected drugs

药物Drugs地区牛大肠埃希菌(n=126)E.colifromlocalcattle敏感率/%Sensitiverate中度敏感率/%Mediationrate耐药率/%Resistancerate引进牛大肠埃希菌(n=192)E.colifromimportedcattle敏感率/%Sensitiverate中度敏感率/%Mediationrate耐药率/%Resistancerate环丙沙星Ciprofloxacin95.242.382.3898.950.520.52诺氟沙星Norfloxacin97.620.791.5999.480.520恩诺沙星Enrofloxacin93.656.35096.882.60.52安普霉素Apramycin92.06A7.94B066.67a33.33b0阿米卡星Amikacin1000098.441.560庆大霉素Gentamicin91.27A8.73B054.69a44.79b0.52阿莫西林Amoxicillin81.75A12.7B5.5566.15a28.65b5.21头孢噻呋Ceftiofur98.411.59094.275.210.52氨苄西林Ampicillin77.7810.32B11.90C7518.75b6.25c氟苯尼考Florfenicol100A0B016.67a82.81b0.52

注：同行数据肩标大小写字母(敏感率用A和a，中度敏感率用B和b，耐药率用C和c)表示差异显著(P<0.05)。

Note:Different lowerease letters in the same row mean significant difference atP<0.05 level (Sensitivity rates were A and a, intermediate rates were B and b, and the resistance rates were C and c).

2.3 新疆地区牛和引进牛大肠埃希菌多药耐药比较

新疆地区牛多药耐药在0～4耐均有分布，以0耐(87.3%，110/126)为主导，其次为1耐(6.35%，8/126)、2耐(5.56%，7/126)和4耐(0.79%，1/126),其他几耐均为0 %；新疆引进牛0～3耐均有分布，以0耐(92.71%，178/192)为主导，其次1耐(2.08%，4/192)、2耐(3.65%，7/192)和3耐(1.56%，3/192)，4～9耐均为0 %。新疆地区牛和引进牛比较，其多药耐药情况相似，均以0耐为主。

2.4 新疆地区牛和引进牛大肠埃希菌的耐药谱型

新疆地区牛大肠埃希菌1耐的主要耐药谱型为AMP(6.35%，8/126)；2耐的主要耐药谱型为AMP/AML(5.56%，7/126)；4耐的耐药谱型为AMP/AML/NOR/CIP(0.79%，1/126)。新疆引进牛大肠埃希菌1耐的主要耐药谱型为AMP(2.08%，4/192)；2耐的主要耐药谱型为AMP/AML(3.65%，7/192)；3耐的耐药谱型为AMP/AML/EFT(1.56%，3/192)。

3 讨论

3.1 新疆地区牛与引进牛大肠埃希菌耐药情况分析

新疆地区牛和引进牛大肠埃希菌对被检药物有不同程度的耐药，但是耐药情况都较轻。新疆地区牛对氨苄西林的耐药率最高也仅为11.9%，地区牛对被检药物都较为敏感，造成这一现象的原因可能有：养殖场规模较小，发病率低，较少使用上述被检药物。新疆引进牛对部分被检药物有较高的中度敏感率，如氟苯尼考的中度敏感率高达82.81%，显著高于新疆地区牛(0%)。氟苯尼考注射液于1996年通过美国FDA(Food and Drug Administration)注册登记，被批准用于牛呼吸系统疾病[10]，此后，在许多国家养殖场将氟苯尼考作为抗菌药物广泛应用于治疗牛的细菌性疾病。对新疆养牛场的用药调研中发现，鲜见氟苯尼考用于治疗牛细菌性疾病，这可能是新疆地区牛大肠埃希菌对氟苯尼考中度敏感率低的主要原因。

3.2 与国内其他地区牛源大肠埃希菌耐药情况比较

近年来，国内也有很多关于牛源大肠埃希菌耐药性报道，姚琼芬等[4]在猪源和牛源大肠埃希菌耐药性比较试验中发现牛源大肠埃希菌对氨苄西林耐药率为 24.0%、庆大霉素 10.2%、头孢噻呋 5.7%、阿米卡星 4.5%、环丙沙星 10.3%和恩诺沙星 10.2%，该结果均高于本试验中新疆地区牛和引进牛的耐药结果，但与本研究相近之处在于对氨苄西林的耐药率都是最高，耐药情况都不是很严重。且该试验中氟苯尼考(75.0%)有较高的中度敏感率，该结果远高于本试验中新疆地区牛对氟苯尼考(0%)的中度敏感率，但低于新疆引进牛对氟苯尼考(82.81%)的中度敏感率；余婷等[11]对宁夏牛源大肠埃希菌进行耐药性监测，发现对庆大霉素、恩诺沙星、阿米卡星、诺氟沙星、环丙沙星的耐药率分别为 40.9%、19.7%、15.1%、7.6%、6.1%，该结果均高于本试验。但其对庆大霉素(12.12%)、氨苄西林(3.03%)和氟苯尼考(0%)的中度敏感率均低于本试验中新疆引进牛的试验结果；余致山等[12]对内蒙古牛源大肠埃希菌耐药进行检测，结果显示环丙沙星的耐药率为 13.8%、诺氟沙星 7.58%、庆大霉素 40.91%、恩诺沙星 19.7%、阿莫西林/克拉维酸 31.04%、氨苄西林75.86%和阿米卡星 17.24%，均高于本试验结果；张陆等[13]对腹泻犊牛进行耐药检测，发现头孢噻呋耐药率为 19.2%、诺氟沙星 11.5%、环丙沙星 11.5%和恩诺沙星 7.7%，该结果均高于本试验；南海辰等[14]对塔城牛源大肠埃希菌进行检测，结果显示氨苄西林 60.0%、阿莫西林/克拉维酸 50.0%、恩诺沙星 40.0%、庆大霉素 40.0%、头孢噻呋 35.0%、阿米卡星 25.0%、诺氟沙星 10.0% 和环丙沙星 10.0%的耐药率均高于本试验；对阿莫西林/克拉维酸14.5%、氨苄西林 18.2%、头孢噻呋1.8%和恩诺沙星1.8%的中度敏感率均高于本试验中新疆地区牛，但均低于本试验中新疆引进牛。从以上比较中可以看出，牛源大肠埃希菌耐药率普遍较低，对各种被检抗菌药物的耐药率各有不同，但新疆引进牛有耐药情况加重的风险，出现这种差异的原因可能是，不同地区养殖场用药方案根据各地区的实际发病情况而定，导致细菌对各种抗菌药物的耐药率不同。

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Comparisons of Antimicrobial Resistance ofE.coliof Local Cattle and Imported Cattle in Xinjiang

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,XinjiangUrumqi,830052,China; 2.XinjiangAgriculturalVocationalTechnicalCollege,Changji,Xinjiang,831100,China)

In order to compare the antimicrobial resistance ofE.colifrom local cattle and imported cattle to clinical antimicrobial drugs,the broth dilution method was used to detect resistance ofE.colito clinical antimicrobial drugs, and by chi square test to compare the difference of resistant rate ofE.colifrom local cattle and imported cattle.The results showed thatE.colifrom local cattle and imported cattle in Xinjiang had higher resistant rate to ampicillin (local cattle was 11.90%, imported cattle was 6.25%) and amoxicillin (local cattle was 5.55%, imported cattle was 5.21%), and had low resistant rate to other detected drugs.But intermediary rates ofE.colifrom imported cattle were higher to florfenicol (82.81%), gentamicin (44.79%) and apramycin (33.33%).The chi-square test results showed that resistant rate ofE.colifrom imported cattle was significantly higher than that of local cattle in Xinjiang to florfenicol, gentamicin, apramycin, amoxicillin and ampicillin (P<0.05).Although resistant rate ofE.colifrom cattle in Xinjiang is low to commonly used antimicrobial, the high intermediary rate ofE.colifrom imported cattle made resistance rates increasing rapidly, so we should avoid to use the drugs with high intermediary rate to imported cattle in the clinical treatment.

local cattle; imported cattle;E.coli; drug resistance rate; comparison

2016-03-07

国家自然科学基金项目(31260614)

林亚军(1992-)，女，河北邢台人，硕士研究生，主要从事兽医药理与毒理学研究。*通讯作者

S852.612

B

1007-5038(2016)11-0126-04