含氯消毒液对全自动酶免检测结果影响的分析

冯丽霞 杨静

含氯消毒液对全自动酶免检测结果影响的分析

冯丽霞 杨静

目的：验证含氯消毒液对全自动酶免检测结果的影响，改进实验方法，消除影响因素。方法：控制变量法，在相同的实验条件下使用未经含氯消毒液处理的板架和经含氯消毒液处理的板架比较分析，得出结论。结果：酶免试验过程中由于各种因素的影响，均会造成结果的异常。使用含氯消毒液浸泡过的板架对ELISA方法中以TMB做底物的试验有假阳性干扰。结论：对含氯消毒液消毒后重复使用的微板架流水冲洗干净后用蒸馏水冲洗三次，再晾干使用可有效避免了酶免试验过程的花板现象发生。

含氯消毒剂；全自动酶免；花板；分析

1 材料与方法

1.1 一般资料及设备 选用我站无偿献血者样本。全自动酶免分析系统为Uranus120AE，洗板机和酶标仪均为进口配置。手工检测所用洗板机为TECAN. COLU.MBUS，酶标仪为WellscanMK3。

1.2 消毒液 消毒片剂，生产商为德州安捷高科消毒制品有限公司，批号为20150102。

1.3 试剂 HBsAg（北京万泰,批号:B20141031），抗HCV（北京万泰,批号C20150407）HBsAg室内质控血清（北京康彻斯坦生物，批号:201411003），抗HCV室内质控血清（北京康彻斯坦生物，批号:201411003）。试剂和质控血清均批检合格，在有效期内使用。

1.4 环境 采用空调和加湿器控制温湿度，每次实验结束后按照清洁消毒操作规程用500mg/L含氯消毒剂对实验室操作台及地面进行消毒，同时对当次实验中的板架及板条流水冲洗3次后，用3000mg/L含氯消毒液浸泡90分钟，再用流水冲洗3次，晾干备下次实验用。

1.5 方法

1.5.1 实验准备。准备未经含氯消毒液处理的板架（简称正常板架）和使用3000mg/L含氯消毒液浸泡消毒处理过的板架（简称消毒板架）。

1.5.2 对照实验。先使用消毒板架，采用全自动酶免分析系统与手工法进行献血者样本检测。然后对花板的项目用在不更换试剂和洗液的情况下，立即使用正常板架再次上机检测，同时手工法使用消毒板架进行检测，胶纸封板。实验过程中，为便于双排洗涤，对非整条及非偶数板条给予对应补孔。（补孔板条有含氯消毒液处理与未处理两种）操作方法按说明书进行，全自动酶免系统由工程师维护检测，确保加样、洗板等过程均未存在交叉污染。

1.5.3 控制变量消除其他干扰因素。对出现花板的检测项目不更换试剂和洗液，立即使用正常板架再次检测，全自动酶免系统未出现花板。同时用浸泡过的微板架进行手工法检测，胶纸封板也未出现花板，说明未存在试剂、洗液和样品之间的交叉污染。

1.6 统计处理 采用SPSS17.0软件统计分析，P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 全自动酶免系统两种类型板架检测花板情况 使用消毒板架和正常架检测同一批献血员样本抗HCV出现明显差异，经卡方检验进行统计分析，χ2=19.26，P＜0.05。结果见表1。

表1 全自动酶免系统两种类型板架检测花板情况

2.2 全自动酶免检测方法HBsAg阴性对照（N）、阳性对照（P）检测值 更换检测项目做阴阳性对照试验，使用两种板架检测HBsAg阴性对照血清样品（N）和阳性血清样品(P)，将所得s/co进行比对分析，阳性对照（P）：t=2.64＞2.26，P＜0.05，阴性对照（N）：t=25.64＞2.26，P＜0.05，同样存在差异，具有统计学意义。见表2。

表2 全自动酶免检测方法HBsAg阴性对照（N）、阳性对照(P)检测值

3 讨论

酶免试验过程中由于各种因素的影响，会造成结果的异常。基层血站因检测样本数量少，用ELISA进行献血者样本检测时，存在板架重复使用的情况，为防止实验室感染，实验室人员对重复使用的板架用“84”液进行浸泡消毒处理。由于氯离子是卤素元素，化学性质活泼，具有氧化性质，它与酶分子中的氨基或羧基起反应，使得酶活性受到抑制[1]。不能完全催化底物显色，致使OD值、S/CO值降低，因此使用84消毒液浸泡处理的板架进行全自动酶免检测可使HBsA⁃gOD值及S/CO值降低，处于临界值标本检测呈假阴性这与报道一致[2]。

含氯消毒液最显著的优势是杀菌效果明显，但杀菌的同时会残留在空气中，并污染洗涤液。我们所用的显色剂“B”，主要成分是四甲基联苯胺（TMB）,而酶标记物中的酶为辣根过氧化物酶。实验中所使用的消毒片主要成分为氯，分解后的游离氯能取代TMB上的氢，使其呈蓝色[3]，全自动酶免分析系统出现花板是因板架及补孔的板条上含大量氯离子引起。手工法未出现花板，主要是因为孵育过程中有胶粘封板，微孔与微孔间、微孔与外界空气之间相对隔离，有效避免氯离子对实验结果的影响。

同时，微板孵育过程中，加热散发致孵育盖上残留一定量的氯离子以及使用流水冲洗板架的力度和时间不一，使板架中残留的氯离子浓度不同，等因素，都均造成酶反应孔的颜色变化,酶标仪比色时样本吸光度上升[4],造成HBsAg阴性对照血清样品呈不同程度显色。

我们通过调查和各种对照试验发现，“84”消毒液对ELISA方法中以TMB做底物的试验有假阳性干扰，尤其是使用“84”液浸泡过的板架，对全自动酶免检测结果存在严重的实验污染。为此，我们采取了一系列方法，如：实验前后开窗通风，实验中工作人员不接触84消毒液，对重复使用的微板架用流水冲洗干净后用蒸馏水冲洗三次再晾干使用等系列措施，有效避免了酶免实验过程的花板现象发生。

[1]潘文干.生物化学[M].第5版.北京:人民出版社,2008:50-51.

[2]贤永娥.含氯消毒剂对酶联免疫法结果的影响[J].中国健康月刊, 2011,30(4):377.

[3]朱胜.对一起含氯消毒剂影响酶联免疫吸附试验结果分析[J].中华医院感染学杂志,2010,23(13):1896.

[4]刘忠伦,刘波,刘继来.84消毒液对酶联免疫法检测结果的影响[J].现代检验医学杂志,2004,19(3):27-28.

A

1004-2725（2016）11-0845-02我站实验室在近期使用全自动酶免分析系统对献血者样本进行HBsAg、抗HCV、抗-TP、抗HIV检测的过程中，经常发生各检测项目不同程度花板的现象。花板是因洗板不彻底、孵育时间过长等多种因素造成的假阳性。为探究造成假阳性的原因,我们在逐一排除其他因素后分析了含氯消毒液对全自动酶免检测结果影响，结果如下。

737100甘肃 金昌，金昌市中心血站检验科

冯丽霞，E-mail:903696543@qq.com