山海丹牌野菊花注射液特征图谱分析

刘嘉澍，张国跃，罗定强，宋莉，惠选柱

(1.陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710065；2.陕西医药控股集团山海丹医药有限责任公司，陕西 西安 710065)



山海丹牌野菊花注射液特征图谱分析

刘嘉澍1，张国跃1，罗定强1，宋莉1，惠选柱2

(1.陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710065；2.陕西医药控股集团山海丹医药有限责任公司，陕西 西安 710065)

目的 建立山海丹牌野菊花注射液中有效成分的含量测定及特征图谱研究方法，对其质量进行控制。方法 采用高效液相色谱法(HPLC)梯度洗脱，流动相:乙腈-0.5%磷酸溶液，梯度洗脱，流速:1.0 mL·min-1，检测波长326 nm，以木犀草苷为参照峰计算其共有峰的相对保留时间。结果 标记8个吸收值较大的共有峰，9批供试品中S峰与标准对照品峰相对应，其余特征峰的相对保留时间RSD均小于0.6%。结论 该特征图谱方法可行，可用于该厂家野菊花注射液的质量控制。

野菊花注射液；高效液相色谱法；特征图谱

野菊花注射液，其组方为单味药野菊花。具有清热解毒的功效，用于治疗外感热病、目赤肿痛、咽喉疼痛；上呼吸道感染、急性扁桃体炎属热毒上攻等。因该品种所对病症较为常见且中药注射液存在高风险性，故在质量控制方面应更加严格。野菊花注射液原标准为国家药品监督管理局标准(试行)WS-11041(ZD-1041)-2002于2002年提出，其中仅用高效液相方法对绿原酸进行含量测定，专属性较差。李晓波等[1]用气相气谱法对该制剂中的挥发性成分进行研究，建立指纹图谱且已有文献报告。但尚未见相应的高效液相色谱法(HPLC)的研究。鉴于液相方法同样具有较强的专属性且简单易操作，故本研究采用HPLC法对9批野菊花注射液的特征图谱进行研究，监测了野菊花中绿原酸、蒙花苷、木犀草苷、咖啡酸等成分，以木犀草苷为参照物，计算各共有峰的相对保留时间，以初步达到药品质量控制的目的。

1 仪器与试药

1.1 仪器 电子分析天平，型号：Sartorius公司 BP211D，BS224S，AE240；高效液相色谱仪：型号：岛津LC-20AD高效液相色谱仪(PDA检测器)Empower色谱工作软件。

1.2 试剂 乙腈为色谱纯，其他为分析纯，水为去离子水。

1.3 样品 绿原酸(批号：110753-201314)、蒙花苷(批号：111528-200606)、木犀草素(批号：111520-200504)、木犀草苷(批号：111720-200905)、咖啡酸(批号：110885-200102)对照品均由中国食品药品检定研究院提供；野菊花注射液样品由陕西医药控股集团山海丹医药有限责任公司(批号：15020028，15020027，15020026，14090012，14090011，14090010，15030034，15030035，15030033)提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Agilent C18，250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：A相为乙腈，B相为0.5%冰醋酸溶液，梯度洗脱，流动相变化比例见表1，检测波长：326 nm，流速：1.0 mL×min-1，柱温：35 ℃，进样体积：10 μL。理论板数：理论板数以绿原酸峰计算应不低于5 000[2-3]。

表1 流动相比例

2.2 供试品溶液的制备 直接取样品适量，用微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸13.58 mg，蒙花苷16.04 mg，木犀草苷9.82 mg，咖啡酸对照品8.24 mg，分别置于100 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，再精密量取25 mL置50 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，制成浓度分别为67.91.0、16.04、9.82、8.24 mg·L-1的混合对照品溶液。

2.4 方法学验证

2.4.1 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液(批号：14090010)，重复进样6次，记录色图谱。结果表明，各色谱图中8个共有峰保留时间RSD均<0.25%、峰面积RSD均<2.56%，故该方法精密度良好，符合特征图谱的要求，见表2，3。

表2 精密度保留时间结果/min

表3 精密度峰面积结果/μV·s-1

表4 稳定性保留时间结果/min

表5 稳定性峰面积结果/μV·s-1

2.4.2 重复性实验 对同一批供试品(批号：14090010)取样6份，照前述供试品制备方法制成供试品溶液，同法测定，测得RSD值为1.12%，表明该方法重复性良好。

2.4.3 稳定性实验 取供试品溶液，于室温下放置，分别在0、3、6、9、12、18、24 h进样分析，记录各色图谱。结果表明，各色谱图中8个共有峰保留时间均RSD<0.33%、均峰面积RSD<2.74%，故该方法在24 h内稳定性良好，符合特征图谱的要求，见表4，5。

3 结果

3.1 特征峰的确定 取野菊花注射液9批供试品，按“2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件进行测定，对得到的色谱图进行特性图谱的研究。共确认了9个色谱峰。通过比对保留时间和紫外吸收图谱的方法，指认了4个色谱峰，分别为1号峰为绿原酸，3号峰为咖啡酸，4号峰为木犀草苷，8号峰为蒙花苷。如图1所示。选择8个共有峰中保留时间适中，且为检测指标性成分的木犀草苷峰作为S峰，保留时间为40.08 min。

注：1.绿原酸；3.咖啡酸；4.木犀草苷；8.蒙花苷。

图1 混合对照溶液及样品图谱

3.2 特征图谱的建立[4]选择8个共有峰中保留时间适中，且为检测指标性成分的木犀草苷峰作为S峰。供试品图谱与木犀草苷对照色谱峰进行比较，其中4号峰，即S峰应与木犀草苷色谱峰保留时间(40.08 min)一致，并计算其他7个共有特征峰的相对保留时间，要求分离度不小于1.5。结果见表6及图2。

图2 不同批次样品图谱比较

4 结论

因此次样品收集量较少且均为同一厂家，故仅对不同批次样品进行比较批间差异。利用指纹图谱系统比较得9批供试品图谱相似度均大于0.98，得出该制剂批间差异小，质量较为稳定。

5 讨论

实验开始前，在国家药监局网站上查询发现，野菊花注射液生产厂家有三家，除本实验中所选用厂家外，仅有江西一家厂家仍在生产，但样品收集存在困难，故仅分析了一个厂家的样品，分析其批间质量差异，针对该厂家样品进行初步质量方法的建立。

在野菊注射液中，绿原酸，蒙花苷，木犀草素，木犀草苷，咖啡酸为原料野菊花的主要活性成分[5-7]，根据5种成分的UV光谱的特征吸收，从野菊花注射液供试品DAD图谱中提取不同波长下的色谱图进行比较，结果表明，326 nm下得到的色谱基线平稳，并兼顾各个成分检测灵敏度，且有较大的吸收值，因此选为测定波长为326 nm。

实验过程中发现供试品中绿原酸峰与另一色谱峰极性相似，猜测为绿原酸的同系物，分离度不高，故调整流动相比例后发现，在乙腈∶0.1%磷酸比例为15∶85时分离度可达2.1，分离度较好。

[1] 李晓波，谭晓杰，贾英，等.野菊花注射液的GC指纹图谱[J].沈阳药科大学学报，2007,24(9)：556-559.

[2] 林丽美，李春，刘塔斯，等.野菊花药材HPLC指纹图谱[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(22):120-123.

[3] 陶君彦，张晓昱，黄志军，等.HPLC法同时测定木瓜中绿原酸、咖啡酸的含量[J].中国药房，2007,18(12)：912-914.

[4] 耿家玲，王祥红，田润涛，等.灯盏花素注射液HPLC特征图谱研究[J].药物分析杂志，2011,31(8)：1511-1513.

[5] 郭巧生，房海灵，申海进.不同产地野菊花中绿原酸、咖啡酸和蒙花苷含量[J].中国中药杂志，2010,35(9)：1160-1163.

[6] 刘婷娜，朱恩圆，侴桂新等.野菊花高效液相色谱指纹图谱及质量评价方法的建立[J].时珍国医国药，2009，20(4)：823-825.

[7] 郭巧生，房海灵，申海进.不同产地野菊花中绿原酸、咖啡酸和蒙花苷含量[J].中国中药杂志，2010,35(9)：1160-1163.

Specific chromatograms of shanhaidan yejuhua injection by HPLC

LIU Jiashu，ZHANG Guoyue，LUO Dingqiang，et al

(ShaanxiInstituteforFoodandDrugControl，Xi′an,Shaanxi710065,China)

Objective To establish a method for the determination of the content and the study on the feature map of the active ingredients in Shanhaidan Yejuhua Injection,and to study its quality control.Methods HPLC Gradient elution was used with the mobile phase of acetonitrile-0.5% phosphate.The flow rate was set at 1.0 mL·min-1and the detection wavelength was 326nm.The relative retention time was calculated with galuteolin as the reference peak.Results A total of 8 larger absorption values were marked,and the S peak of the 9 batches was correspondent to the standard control.The relative retention time of the other characteristic peaks was less than 0.6%.Conclusions The method is feasible,and can be used for the quality control of shanhaidan yejuhua injection in the factory.

Yejuhua injection;HPLC;Specific chromatograms

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.10.016

2016-05-17，

2016-08-05)