Ag85A抗体IgG表型在结核性胸膜炎诊断中的应用

苏永胜 宋 磊 李 丹 张秀芳 华树成

(吉林大学第一医院，吉林 长春 130021)



Ag85A抗体IgG表型在结核性胸膜炎诊断中的应用

苏永胜 宋 磊 李 丹 张秀芳 华树成

(吉林大学第一医院，吉林 长春 130021)

目的 探讨Ag85A抗体IgG在结核性胸膜炎患者外周血清及胸腔积液中的表达水平并探索其对临床诊断与预后判断的指导意义。方法 收集53例结核性胸膜炎患者，38例恶性肿瘤胸膜转移患者和28例良性胸水患者的外周血及胸腔积液，并收集12例正常人的外周血，ELISA法检测血清和胸腔积液中Ag85A抗体IgG的表达，并对胸腔积液进行总蛋白和乳酸脱氢酶(LDH)检查。结果 与肿瘤胸膜转移患者、良性胸水患者和正常人相比，结核性胸膜炎患者外周血及胸腔积液中Ag85A抗体IgG水平明显升高(P<0.01)；而肿瘤胸膜转移患者、良性胸水患者和正常人体液中的Ag85A抗体IgG水平无明显差异(P>0.05)。胸腔积液中Ag85A抗体IgG吸光度为1.435，可作为诊断结核性胸膜炎的cut-off值，其敏感性和特异性分别为79.2%和87.2%。结核性胸膜炎患者胸腔积液中Ag85A抗体IgG水平与胸腔积液中总蛋白质和LDH含量呈正相关。结论 胸腔积液中Ag85A抗体IgG水平可作为结核性胸膜炎诊断和预后判断的生物学标志物。

结核性胸膜炎；Ag85A

结核性胸膜炎诊断的金标准是结核菌的检出或活检胸膜有典型结核感染的病理特TGH ，但检出率低或创伤性操作限制了其在临床上的广泛应用〔1〕。本文通过对Ag85A抗体IgG在各种胸膜炎中的表达水平进行比较，初步探讨其在结核性胸膜炎诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2012年12月至2015年6月吉林大学第一医院呼吸内科住院和门诊患者共131例，其中结核性胸膜炎53例，均为首次发病，在诊断之前未经任何抗结核药物治疗；恶性肿瘤胸膜转移患者38例，非结核感染胸膜炎28例，12例健康对照者(HC)。见表1。

表1 入组患者的一般资料

结核性胸膜炎诊断符合Thwaites诊断标准〔2〕。同时收集恶性肿瘤胸膜转移患者，非结核菌感染性胸膜炎和正常人作为对照。所有患者排除合并其他传染性疾病如艾滋病(HIV)、麻疹和伤寒等，除外近1 w出现心衰、烧伤、外伤和手术等应激情况者。

1.2 主要试剂和仪器 96孔板(corning，美国)，Ag85A抗原(Abcam，美国)，HRP标记的抗人IgG抗体(Abcam，美国)，酶标仪(Bio-Tek，美国)。

1.3 检测方法 采集静脉血5 ml，不抗凝，800 r/min离心10 min后取血清。并留取胸腔积液5 ml，离心后取上清液分装储存于-80℃冰箱。测定时将样品放于冰上解冻，Ag85A抗原包被96孔板，按照ELISA方法对样品中Ag85A抗体IgG进行检测。在450 nm处测各样品的OD值。

1.4 统计学方法 应用SPSS15.0软件，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。胸腔积液中Ag85A抗体IgG对结核性胸膜炎诊断价值的评定采用受试者工作特征曲线(ROC)分析，相关性分析采用Spearman相关法。

2 结 果

2.1 血清和胸腔积液中Ag85A抗体IgG的表达 结核性胸膜炎患者血清中Ag85A抗体IgG的OD值为(2.66 ± 0.17)g/L；肿瘤胸膜转移患者、非结核感染性胸膜炎和健康对照血清中的Ag85A抗体IgG的OD值分别为(1.78 ± 0.29)g/L、(1.93±0.29)g/L，结核性胸膜炎组患者血清中Ag85A抗体IgG水平明显高于后三者(P<0.01)。结核性胸膜炎患者胸腔积液中的Ag85A抗体IgG的OD值为(107.8±4.94)ng/L，也较肿瘤胸膜转移患者(73.58±3.76)ng/L、非结核感染性胸膜炎和健康对照(76.25±5.09)ng/L明显升高(P<0.01)。

2.2 Ag85A抗体IgG对结核性胸膜炎的诊断价值 胸腔积液Ag85A抗体IgG可作为诊断结核性胸膜炎的生物学标志物，其最佳诊断切点值(cut off)为OD值1.435(AUC=0.866，P<0.01)，此值在诊断结核性胸膜炎时的敏感度为79.2%，特异度为87.2%。见图1。

图1 胸腔积液Ag85A抗体IgG诊断价值的ROC分析

2.3 Ag85A抗体IgG与结核性胸膜炎病情的相关性 结核性胸膜炎患者胸腔积液中的Ag85A抗体IgG水平与胸水中总蛋白以及乳酸脱氢酶(LDH)含量呈正相关，相关性分别为0.373(P<0.01)和0.438(P<0.01)。

3 讨 论

Ag85A是结核分支杆菌合成的一种外分泌蛋白，分子量约为35 kD，与Ag85B和Ag85C构成复合物，具有分支杆菌酸转移酶的活性，在结合菌细胞壁的生物合成过程中发挥着重要作用〔3〕。Ag85A曾被当做生物标志物用于结合诊断的研究。Kumar等〔4〕研究显示，在对0～18岁的人群中，Ag85A作为结核病诊断的的敏感性为56%，而特异性为72%。由于Ag85A作为结核菌的一种重要的抗原，可诱导机体产生强烈的免疫反应。因此，作为Ag85A的抗体表型被推测在结核病患者体内表达增加，并可用于结核诊断的标志物。Osada-Oka等〔5〕发现，Ag85A在活动性和陈旧性结核病患者的血浆中的水平明显高于正常人，用于陈旧性结核的诊断敏感性为86.7%。Senoputra等〔6〕的研究同样显示Ag85A在结核病患者血清中表达增高，并与其他抗结核抗体水平存在相关性。但Ag85A抗体在结核性胸膜炎患者胸水中的表达以及对结核性胸膜炎的诊断意义尚未完全清楚。本研究与前人的研究结果一致。本研究还发现，与健康人、其他感染性胸膜炎和肿瘤胸膜转移患者比较，结核性胸膜炎患者的胸腔积液中Ag85A抗体IgG水平也发生上调。

目前依靠胸腔积液常规检查只能分辨积液的来源是渗出性还是漏出性，结核性胸膜炎的诊断仍靠结核杆菌和(或)结核典型病灶的检出。但由于结核性胸膜炎胸腔积液中结核菌检出率非常低，典型病灶的检查需要依赖于有创性的胸膜活检。因此结核性胸膜炎的诊断特别是早期诊断仍是一个重要问题。本研究发现胸腔积液Ag85A抗体IgG水平还可作为区别结核性胸膜炎和其他胸膜炎或肿瘤的生物学标志物。

Ag85A抗体IgG高表达是结核菌感染和机体免疫系统相互作用的体现。胸腔积液总蛋白和LDH含量反映结核性胸膜炎病情的严重程度，常被应用于判断结核性胸膜炎预后的两项重要指标。本研究表明，除了作为诊断依据外，胸腔积液Ag85A抗体IgG水平还可作为评估结核性胸膜炎疾病严重程度的重要指标。

1 Wallis RS,Maeurer M,Mwaba P,etal.Tuberculosis-advances in development of new drugs,treatment regimens,host-directed therapies,and biomarkers〔J〕.Lancet Infect Dis,2016;16(4):34-46.

2 Thwaites GE,Chau TT,Stepniewska K,etal.Diagnosis of adult tuberculous meningitis by use of clinical and laboratory features〔J〕.Lancet,2002;360(9342):1287-92.

3 Belisle JT,Vissa VD,Sievert T,etal.Role of the major antigen of mycobacterium tuberculosis in cell wall biogenesis〔J〕.Science,1997;276(5317):1420-2.

4 Kumar G,Dagur PK,Singh M,etal.Diagnostic potential of Ag85C in comparison to various secretory antigens for childhood tuberculosis〔J〕.Scand J Immunol,2008;68(2):177-83.

5 Osada-Oka M,Tateishi Y,Hirayama Y,etal.Antigen 85A and mycobacterial DNA-binding protein 1 are targets of immunoglobulin G in individuals with past tuberculosis〔J〕.Microbiol Immunol,2013;57(1):30-7.

6 Senoputra MA,Shiratori B,Hasibuan FM,etal.Diagnostic value of antibody responses to multiple antigens from Mycobacterium tuberculosis in active and latent tuberculosis〔J〕.Diagn Microbiol Infect Dis,2015;83(3):278-85.

〔2015-11-19修回〕

(编辑 袁左鸣)

吉林省科技厅资助项目(No.20130413030GH)

华树成(1961-)，男，教授，主要从事呼吸疾病研究。

苏永胜(1991-)，男，硕士，主要从事呼吸疾病研究。

R561.1

A

1005-9202(2016)21-5373-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.21.074