广西地区中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血的发病情况及表型特征

韦媛，林丽，陈碧艳，王梁，陈秋莉，陈少科，何升

(广西壮族自治区妇幼保健院，南宁530003)



广西地区中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血的发病情况及表型特征

韦媛，林丽，陈碧艳，王梁，陈秋莉，陈少科，何升

(广西壮族自治区妇幼保健院，南宁530003)

目的 探讨广西地区人群中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血的检出率及表型特征。方法 选择14 204例血液标本，用跨越断裂点PCR(Gap-PCR)检测α、β地中海贫血常规24种基因型，用Gap-PCR检测中国型Gγ(Aγδβ)0地中海贫血缺失型基因，用血常规检测和血红蛋白(Hb)电泳分析表型特征。结果 在14 204例标本中共检出中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血杂合子10例、中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血复合β-地中海贫血1例，总检出率为0.07%。中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血杂合子中无贫血症状7例，轻度贫血3例；血液学结果显示红细胞平均体积(MCV)及红细胞平均Hb含量(MCH)降低，Hb电泳结果显示HbA2正常，HbF升高。结论 广西地区人群中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血的检出率为0.07%；其表型特征为Hb正常或轻微降低，MCV、MCH降低，HbA2正常并HbF升高。

地中海贫血；中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血；筛查；基因型；表型特征；广西壮族自治区

地中海贫血又称为珠蛋白生成障碍性贫血，是由于珠蛋白基因缺陷导致珠蛋白链合成障碍而引起的遗传性溶血性疾病。根据肽链合成障碍不同通常分为α、β、γ和δβ-地中海贫血。δβ-地中海贫血是一组因基因发育阶段特异性表达失控导致胎儿出生后血红蛋白F(HbF)持续增高的地中海贫血，其遗传异质性很大[1]。根据基因缺陷背景的不同，δβ-地中海贫血可分为缺失型和非缺失型两大类。缺失型涉及β-类珠蛋白基因簇多个成员不同程度的大片段DNA缺失。我国报道的δβ-地中海贫血大片段缺失型有中国型、广州型、云南型、比利时型及东南亚型遗传性持续性胎儿Hb增高症[2～5]，其中我国最常见的δβ-地中海贫血为中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血。本研究通过对广西地区14 204例标本进行血液学和基因型分析，探讨该地区中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血的发病情况及表型特征。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2015年1月～2016年4月在广西壮族自治区妇幼保健院、广西壮族自治区妇产医院、广西壮族自治区儿童医院要求进行地中海贫血基因检测的受检者14 204例，其中男7 269例、女6 935例，年龄10～55岁，近3个月无输血史，均来自南宁、贺州、百色等14个辖市，包括壮、汉、苗、瑶等7个民族。

1.2 基因检测 采集受检者肘部外周血2 mL，置于EDTA抗凝管，按全血基因组DNA提取试剂盒说明书用Lab-Aid 820核酸提取仪(厦门百维信生物公司)提取基因组DNA。先采用跨越断裂点PCR(Gap-PCR)检测α-地中海贫血4种缺失型基因(含-Thai)、α-地中海贫血3种点突变基因和β-地中海贫血常见17种突变基因，试剂盒均购于深圳益生堂生物公司。采用Gap-PCR检测中国型Gγ(Aγδβ)0地中海贫血缺失型基因，Gγ(Aγδβ)0缺失上游引物：5′-GGCATATATTGGCTCAGTCA-3′，Gγ(Aγδβ)0缺失下游引物：5′-TCAACAATTATCAACATTACACC-3′；正常内对照下游引物：5′-CTTGCAGAATAAAGCCTATC-3′[6]。PCR反应体系25 μL：2×mix 12.5 μL，ddH2O 6.5 μL，上游引物2 μL，下游引物1 μL，内对照下游引物1 μL，DNA模板2 μL。扩增反应条件：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性1 min，59.7 ℃退火30 s，72 ℃延伸90 s，共35个循环，最后72 ℃延伸10 min。正常对照扩增目的片段为682 bp，缺失扩增目的片段为508 bp。

1.3 血常规及Hb分型检测 采集受检者肘部外周血4 mL，取2 mL置于EDTA抗凝管，用迈瑞BC-2000血液分析仪检测红细胞参数，包括Hb、红细胞平均体积(MCV)及红细胞平均Hb含量(MCH)等。另取外周血2 mL置于枸橼酸钠抗凝真空管，用Capillarys 2 flex piercing全自动电泳仪分析Hb，包括HbA2、HbF。

2 结果

14 204例受检者中共检出11例中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血，检出率为0.07%。其中中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血杂合子10例、复合β-地中海贫血1例。10例中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血杂合子均表现为小细胞低色素(MCV<80 fL，MCH<28 pg)；Hb正常7例，Hb轻度降低3例；HbA2未见异常，HbF明显升高(10.8%～22.3%)。中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血复合β-地中海贫血1例，表现为中重型地中海贫血表型，Hb 83.8 g/L，MCV 61.8 fL，MCH 19.4 pg，HbA2降低，大部分为HbF(98.8%)。见表1。

表1 11例Gγ(Aγδβ)0地中海贫血标本的血液学参数及基因型

注：β-*为βChinese(Aγδβ)0/βN。

3 讨论

δβ-地中海贫血依据其分子缺陷类型和表型特征分为五种类型：(δβ)0-地中海贫血、GγAγ(δβ)0-地中海贫血、Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血、(εγδβ)0-地中海贫血和Hb Lepore[7]。缺失型δβ-地中海贫血因涉及的有关功能基因(如Gγ、Aγ、δ和β-基因等)直接缺失而影响基因表达，也可由β-类珠蛋白基因簇中参与基因调控的座位控制区以及其他一些具有增强子作用的超敏位点的缺失而导致[8]。中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血最初由Mann等[9]于20世纪70年代首次报道，其缺失范围累及β-珠蛋白基因簇Aγ、ψβ、δ和β-基因下游具有增强效应的DNA序列以及3′-HS-1区域，缺失长度为78.9 kb[10]。β-类珠蛋白基因簇中含有2个表达γ-珠蛋白肽链的γ-基因(Gγ和Aγ)，其表达水平直接影响Gγ和Aγ的比例及HbF含量。出生后本应关闭的γ-基因因δβ-地中海贫血携带者的β-基因缺失而替代β-基因的功能，其产物(γ-珠蛋白肽链)与α-基因产物(α-珠蛋白肽链)生成HbF(α2γ2)[1]。相较于云南型纯合子仅有轻度贫血[11]，中国型纯合子临床上则有中重度贫血表现，依赖输血维持生命[12]。中国型缺失断裂点的3′端位于云南型3′端断裂点的下游约10 kb，这段缺失区域中包含了以上提到的增强子。增强子的距离效应学说可很好地解释这种差异：位于β基因下游远端的增强子序列因基因的大段丢失而被带到了邻近γ基因的位点，此增强子可对Gγ基因产生正向调节，从而使γ链的表达水平升高[1]。

本研究中广西地区的10例中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血缺失杂合子表现为无贫血或轻度贫血，HbA2在正常范围(2.3%～2.9%)，HbF则明显升高(10.8%～22.3%)，与覃丽波等[13]报道的广西地区情况相比，血液学参数范围更大。这可能是因为本研究病例较多。虽然中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血缺失杂合子临床症状轻微，但当复合β-地中海贫血时，出现中度至重度贫血，临床表型类似于中间型或重型β-地中海贫血。本研究有1例中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血复合β-地中海贫血(病例11)，中度贫血(83.6 g/L)，MCV 61.8 fL，MCH 19.4 pg，HbF 98.8%，6个月时出现贫血症状，肝脾大，依赖输血,与相关文献[14～16]报道相似。检测出的中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血且配偶为β-地中海贫血携带者4例，均给予及时回访及充分临床指导，在其孕期对胎儿进行产前诊断，分别检测出正常胎儿2例、中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血杂合子胎儿1例及中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血复合β-地中海贫血双重杂合子胎儿1例。

当Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血复合其他β-地中海贫血时，表现为中重型地中海贫血表型，临床比较容易发现。而当单纯携带中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血时，多数人未有贫血表现，血象仅表现为小细胞低色素和HbF升高，且常规17种β-地中海贫血检测结果正常，临床极容易漏诊。当发现MCV、MCH降低，HbA2未见明显异常而HbF明显增高时，或夫妻双方基因型与重型地中海贫血患儿基因结果不符合时，应考虑存在中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血或其他缺失型δβ-地中海贫血的可能。本研究从14 204例临床标本中检出11例中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血，人群发病率为0.07%，与Xiong等[17]报道的调查结果相似，为广西地区地中海贫血的流行病学调查提供新的佐证。广西是地中海贫血高发地区，人群中β-地中海贫血携带率高达6.43%[18]。如夫妻双方一方为中国型Gγ(Aγδβ)0-地中海贫血，另一方为β-地中海贫血，应给予充分的遗传咨询，建议产前诊断，以避免重型地中海贫血患儿的出生，达到优生优育的目的。

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2016-05-10)