11 339例孕妇无创产前检测结果对比分析

王元丽 唐明珠 杨学习

·论著·

11 339例孕妇无创产前检测结果对比分析

王元丽1唐明珠2杨学习3★

目的探讨不同年龄段及不同高危因素孕妇无创产前检测结果的对比分析。方法回顾性分析2014年12月至2015年8月进行无创产前检测的11 339例孕妇资料，分别计算21、18、13号染色体发生变异的概率。将孕妇按年龄段（＜35岁组，35～39岁组和≥40岁组）、孕产史（无不良孕产史组和有不良孕产史组）、受孕情况（自然受孕组和试管婴儿组）分组，分别比较各组间的胎儿患21、18、13⁃三体综合征的概率。结果11 339例样本中共检出82例胎儿染色体异常者，占样本总数7.2‰（82/11 339），其中，21⁃三体最常见，所占比例为67.07％（55/82）。≥40岁组阳性发生率2.45％，较＜35岁组（0.59％）和35～39岁组（0.61％）差异有统计学意义（P＜0.001）。孕产史和受孕情况2组的阳性发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论高龄孕妇是胎儿患染色体非整倍体疾病的重要危险因素，应提高无创产前检测在此类人群中的应用。

无创产前检测；三体综合征；高龄孕妇

21⁃三体综合征、18⁃三体综合征、13⁃三体综合征发病率占胎儿染色体非整倍体疾病的绝大多数，其中，21⁃三体综合征最为常见，年发病率为1/800～1/ 600，占新生儿三体型染色体疾病的70％～80％［1⁃2］。随着国家计划生育政策的放宽、外界环境因素影响以及辅助生殖技术的不断进步，高龄孕妇、具有不良孕产史夫妇以及试管婴儿的数量逐渐增多。近年来发达国家试管婴儿的出生比例明显增高，约占新生儿总数的1％～3％［3⁃4］。这些都有可能成为出生缺陷发生率升高的因素。目前，利用孕妇外周血游离DNA开展的无创产前检测已成为胎儿染色体非整倍体疾病筛查的临床探索新方向［2，5］。本研究利用下一代测序技术对孕妇外周血中的游离DNA进行测序，通过生物信息学分析胎儿遗传信息，从而检测胎儿染色体非整倍体疾病，并根据孕妇年龄和不良孕产史等高危因素分组，研究胎儿21、18、13⁃三体综合征的发生率，为无创产前检测技术在染色体非整倍体疾病高发人群中的应用提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2014年12月至2015年8月在广州达安临床检验中心进行无创产前检测的孕12周及以上的单胎妊娠孕妇11 339例，孕妇年龄范围在16～50岁，平均年龄31.34岁，其中高龄（≥35岁）4 033例，有不良孕产史996例，试管婴儿262例。

1.2 方法

1.2.1 标本收集

对孕妇提供遗传咨询并签署知情同意书后，按正常静脉采血方式采集7～10m L静脉血。采血管使用Cell⁃Free DNA BCTTM管（Streck公司，美国）。采血后轻轻颠倒混匀8～10次，使血液与管内保护剂充分混匀，达到保护作用。采集的血液可常温运输，72 h内送达实验室进行血浆分离，或立即分离后将血浆用干冰运输至实验室。

1.2.2 无创产前检测

使用基因测序仪DA8600和胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒（半导体测序法）（中山大学达安基因股份有限公司）对标本进行无创产前检测，并使用配套算法对结果进行分析，判断21、18、13号染色体的风险值（正常参考范围值为⁃3.0～3.0），检测值在正常参考范围内则判为“低风险”，超出则为“高风险”。由广州达安临床检验中心出具筛查报告，并随访获取确诊结果，以核实无创产前检测结果的准确性。

1.3 统计学分析

采用SPSS 19.0统计软件对数据进行统计分析，使用χ2检验进行组间比较，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 整体检测结果

11 339例样品中，无创产前检测为高风险孕妇82例，筛查阳性率为7.2‰（82/11 339），其中21⁃三体55例，发生率67.07％（55/82），远高于18⁃三体的29.27％（24/82）和13⁃三体的3.66％（3/82）。

2.2 不同年龄孕妇组胎儿三体结果比较

将孕妇按年龄组分为＜35岁组，35～39岁组和≥40岁组。＜35岁组共检出阳性43例，发生率0.59％（43/7 306），35～39岁组检出20例，发生率0.61％（20/3 256），≥40岁组检出19例，发生率2.45％（19/777），结果见表1。＜35岁和35～39岁2个组间阳性发生率差异无统计学意义（P＞0.05），≥40岁和＜35岁、35～39岁组差异具统计学意义（P均＜0.001）。其中，21⁃三体和18⁃三体的发生率组间的差异性和总体阳性发生率相似，13⁃三体发生率在各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 不同孕产史组胎儿三体结果比较

按照孕产史情况分为无不良孕产史组和有不良孕产史组。无不良孕产史组共检出阳性71例，发生率0.69％（71/10 343），有不良孕产史组共检出阳性11例，发生率1.1％（11/996），结果见表2。有不良孕产史组阳性发生率比无不良孕产史组高，但2组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.4 不同受孕方式组胎儿三体结果比较

按照受孕方式情况分为自然受孕组和试管婴

儿组。自然受孕组共检出阳性81例，发生率0.73％（81/11 077），试管婴儿组共检出阳性1例，发生率0.38％（1/262），结果见表3。2组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 不同年龄孕妇组胎儿三体结果比较Table 1 Comparation of fetal trisomy syndrome results in differentwomen age groups

表2 不同孕产史组胎儿三体结果比较Table 2 Comparation of fetal trisomy syndrome results in differentwomen pregnancy history groups

表3 不同受孕方式组三体结果比较Table 3 Comparation of fetal trisomy syndrome results in different fertilization ways groups

3 讨论

21⁃三体综合征、18⁃三体综合征、13⁃三体综合征发病率占胎儿染色体非整倍体疾病的绝大多数，其中，21⁃三体综合征发病较高，为1/800～1/600［2］。本研究人群中，筛查阳性率为7.2‰（82/11 339），其中21⁃三体55例，发生率67.07％（55/82）。这比国内水平稍低，考虑可能与本研究所选择标本来源和年龄范围偏广有关。在国内研究中，Liao等［6］对1 760例孕妇进行无创产前检测，共报道16例异常，阳性率为9‰。郑静等［1］对1 566例孕妇进行分析得出，该人群阳性发生率为14.7‰，21⁃三体发生率为78.26％。刘丛丛［7］在对2 152例孕妇无创检测结果的分析发现有22例阳性，综合阳性率为10.2‰。目前，孕期胎儿染色体异常的检测方法主要以侵入性的产前诊断技术为主，均存在一定的流产风险，难以被广大孕妇和家庭接受。而传统的血清学筛查方法检出率为60％～65％，假阳性率高。自1997年胎儿游离DNA被发现存在于孕妇外周血以来，基于下一代测序技术的无创产前检测以其安全、快速以及准确的优势被迅速用于孕妇特别是高龄孕妇的产前染色体非整倍体筛查［2，5，8⁃9］。刘丛丛［7］在对2 152例孕妇无创基因检测的结果分析发现，该技术对21、18、13号染色体非整倍体的检测灵敏度为92.3％～100％，特异性度99.95％～100％。Palomaki等［10］也通过该技术分析得出，283例染色体非整倍体异常样本复合检出率为98.9％，总的假阳性率仅0.5％。所以，无创产前

检测技术在染色体异常筛查中具有很高的应用价值。

医学上将年龄≥35岁的初产产妇界定为高龄产妇，随着孕产妇年龄增大，其卵巢内处于减数分裂期的初级卵母细胞在体内停留时间会逐渐延长，且高龄孕产妇更易受内外环境影响，其卵巢功能发生老化和退化，使胚胎期染色体变异的几率增加［11］。国际和国内相关法规也明确建议应对高龄产妇进行产前诊断［12］。本研究发现，孕妇年龄≥40岁其胎儿发生染色体异常的比例明显高于其他2组（P＜0.001），35～39岁组虽与＜35岁组间阳性发生率差异无统计学意义（P＞0.05），但其概率也略高于＜35岁组。郑静等［1］在对1 566例标本的三体结果分析中，也发现≥40岁组孕妇阳性发生率明显高于35～39岁组与＜35组。谭卫荷等［11］对898例孕妇进行核型结果分析，发现21⁃三体和18⁃三体在≥40岁组孕妇中发生率也显著高于35～39岁组与＜35组。

不良孕产史包括自然流产、死胎和胎儿发育畸形等，在引起不良孕产史的众多因素中，染色体异常是一个重要的病因之一［3，13］。在本研究中，有不良孕产史组共检出21、18和13⁃三体11例，发生率1.1％（11/996）。较无不良孕产史组0.69％（71/ 10 343）无显著差异。不良孕产史多发生在染色体位置异常和多态性核型中。何淑贞等［3］在对217对有不良孕产史的夫妇进行染色体核型分析中发现有9例异常的核型和55例多态性核型，检出率分别为2.07％和12.67％。其中异常核型包括4例罗伯逊易位，4例平衡易位，1例倒位。汤素环等［13］对375对不良孕产夫妇进行核型分析发现，有81例异常核型（5.0％），其中51例常染色体异常（6.8％）如相互异位、倒位等。因此，不良孕产史与染色体核型异常之间存在密切联系，而多态性核型如Y染色体异质性等具有遗传效应，会导致胎儿患染色体核型异常疾病概率增加。

随着体外受精技术的不断发展，近年来，发达国家试管婴儿约占新生儿总数的1％～3％，出生比例明显升高［4］。由于试管婴儿技术采用体外受精—胚胎移植，其过程皆在体外完成，很多因素可引起遗传物质发生改变［14］。试管婴儿出生缺陷和围产期合并症日益受到人们的关注，许多学者对此做了研究，但研究结论各不相同［15］。本研究人群中，自然受孕组阳性发生率0.73％（81/11 077），与试管婴儿组0.38％（1/262）的差异无统计学意义（P＞0.05），这与许小艳等［15］的分析相似，该研究对150例试管婴儿和200例自然受孕婴儿的出生缺陷及新生儿期并发症等指标进行比对分析发现，试管婴儿出生缺陷与自然受孕婴儿无显著差异。而米弘瑛等［14］对43例试管婴儿和50例自然受孕婴儿的出生缺陷及围生期疾病等情况进行比对发现，试管婴儿出生缺陷发生率显著高于自然受孕婴儿。

综上所述，高龄孕妇是胎儿患染色体异常疾病的一个重要危险因素。应用无创产前检测技术对高龄孕妇进行胎儿染色体异常筛查，并结合侵入性产前诊断技术对筛查阳性结果进行核实。这样可降低有创性检测的人数及孕妇的负担。同时，应加强无创产前检测技术在其他出生缺陷疾病方面的研发与应用，提高除21、18、13⁃三体综合征以外的染色体疾病的准确性，更好地应用于不良孕产史和试管婴儿等高危因素孕妇的异常检测，才能更好地降低新生儿出生缺陷的发生率。

［1］郑静，卓越，孙大康，等.不同年龄段孕妇无创DNA产前检测结果对比分析［J］.中国妇幼保健，2015，30（36）：6538⁃6540.

［2］丁辰月，吴畏，刘嘉茵.测序技术在无创产前筛查中的应用及进展［J］.国际生殖健康/计划生育杂志，2014，33（3）：201-204.

［3］何淑贞，蒲育栋，曹金如，等.217对不良孕产史夫妇细胞遗传学分析［J］.海南医学，2016，27（15）：2542-2543.

［4］张惠琴，樊蕊，田国华，等.试管婴儿双胎及自然受孕双胎临床分析［J］.中国当代儿科杂志，2015，17（1）：63-67.

［5］李玉芝，任景慧，林琳华，等.大规模并行基因组测序技术应用于无创产前染色体非整倍体的研究［J］.华中科技大学学报：医学版，2012，41（4）：475-480.

［6］Liao C，Yin AH，Peng CF，et al.Noninvasive prena⁃tal diagnosis of common aneuploidies by sem iconduc⁃tor sequencing［J］.PNAS，2014，111（20）：7415-7420.

［7］刘丛丛.母血游离胎儿DNA在21-三体、18-三体产前筛查的应用研究［D］.北京：北京协和医学院，2012.［8］李燕芳，张兰珍，田耕，等.胎儿游离DNA用于无创产前检测21、18、13三体综合征的临床研究［J］.中国妇产科临床杂志，2015，16（2）：126-129.

［9］林洋洋，徐婉芳，刘彦慧，等.大规模平行测序技术在产前无创检测胎儿染色体异常中的临床应用［J］.中国优生与遗传杂志，2016，24（1）：52-54.

［10］Palomaki GE，Deciu C，K loza EM，et al.DNA se⁃quencing ofmaternal plasma reliably identifies trisomy 18 and trisomy 13 aswellas Down syndrome：an inter⁃national collaborative study［J］.GenetMed，2012，14（3）：296-305.

［11］谭卫荷，郭晓燕，张金云，等.不同年龄段孕妇妊娠中期羊膜腔穿刺及羊水细胞染色体核型分析结果的对比分析［J］.中国妇幼保健，2014，29（1）：125-127.

［12］沈国松，张甦，何平亚，等.779例高龄孕妇的产前筛查与诊断结果分析［J］.中国产前诊断杂志，2009，1（2）：29-32.

［13］汤素环，李付广，谭卫荷，等.不良孕产夫妇的染色体核型分析［J］.中国药物经济学，2015，Z1：245-247.

［14］米弘瑛，李利，麻新梅，等.试管婴儿新生儿情况分析［J］.实用医学杂志，2013，29（4）：593-594.

［15］许小艳，杨景晖，麻新梅，等.试管婴儿新生儿期并发症及出生缺陷分析［J］.中国当代儿科杂志，2015，17（4）：350-355.

Com parative analysis of the non⁃invasive prenatal test results among 11 339 pregnantwomen

WANG Yuanli1,TANGM ingzhu2,YANG Xuexi3★
(1.Guangzhou Darui Biotechnology Co.,Ltd.,Guangzhou,Guangdong,China,510665;2.Guangzhou Daan Clinical Laboratory Centre,Guangzhou,Guangdong,China,510665;3.School of Laboratory Medicine and Biotechnology,Southern MedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong,China,510515)

Objective The objective is to explore non⁃invasive prenatal test for pregnantwomen in different age and risk factor groups.Methods Non⁃invasive prenatal test results from 11 399 pregnant women were recorded from December 2014 to August 2015,and the incidence rates of trisomy 21/18/13 variationswere calculated.The pregnantwomenwere divided into differentgroupsaccording to age(＜35⁃years⁃old group,35～39⁃years⁃old group,and≥40⁃years⁃old group),pregnancy history(normalpregnancy history group and abnormal pregnancy history group)and conception method(natural conception group and IVF group).The incidence rates of trisomy 21/18/13 syndrome w ithin these groupswere compared.Results In 11 339 cases, 82 were found w ith fetal chromosomal abnormalities,accounting for 7.2‰(82/11 339),the trisomy 21 syndrome was themost common w ith the rate of 67.07％(55/82).The proportion of positive trisomy syndrome in the≥40⁃years⁃old group(2.45％)was statistically significantly different(P＜0.001)compared w ith the＜35⁃years⁃old group(0.59％)and 35～39⁃years⁃old group(0.61％).There was no significant differences of the

Non⁃invasive prenatal test;Trisomy syndrome;Advancedmaternalage pregnantwomen

广东省科技计划下一代基因测序生物信息云分析服务平台及其关键技术研究（2015A030401040）；广州市科技计划基于下一代测序技术的唐氏综合征无创筛查系统研发和应用研究（201400000004⁃4）

1.广州市达瑞生物技术股份有限公司，广东，广州510665 2.广州达安临床检验中心，广东，广州510665 3.南方医科大学检验与生物技术学院，广东，广州510515

★通讯作者：杨学习，E⁃mail：yxxzb@sohu.com

positive trisomy syndrome rate between the pregnancy history and different fertilization ways groups(P＞0.05).Conclusion The advanced age of the pregnant women is an important risk factor in the fetal chromosomalaneuploidy disease,which should be improved the use of non⁃invasive prenatal test.