OPN和MMP-9在胆管癌细胞侵袭转移中的作用

李志锋，刘进忠，石荣亚，赵小利，张利萍

(河北省保定市第一医院，河北 保定 071000)



OPN和MMP-9在胆管癌细胞侵袭转移中的作用

李志锋，刘进忠，石荣亚，赵小利，张利萍

(河北省保定市第一医院，河北 保定 071000)

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胆管癌细胞侵袭转移中的作用。方法应用免疫组化SP法检测OPN和MMP-9在60例胆管癌和30例正常胆管组织中的表达情况，通过两者与胆管癌临床病理特征的关系了解其在胆管癌细胞侵袭转移中的作用，并分析两者相关性。结果 OPN在胆管癌、正常胆管组织中阳性表达率分别是65.0%(39/60)，26.7%(8/30)；MMP-9在胆管癌、正常胆管组织中阳性表达率分别是71.7%(43/60)和33.3%(10/30)；OPN和MMP-9在胆管癌组织表达阳性率均明显高于在正常胆管组织，且与肿瘤浸润、淋巴结转移显著相关(P<0.05)；Spearman相关分析显示OPN、MMP-9在胆管癌组织中阳性表达呈正相关性(r=0.319，P=0.012)。结论 OPN和MMP-9在胆管癌组织中高表达，与肿瘤浸润、淋巴结转移密切相关，可能在胆管癌的侵袭转移中发挥了协同作用，可作为胆管癌重要的生物学参考指标。

胆管癌；肿瘤浸润；淋巴结转移；OPN；MMP-9

胆管癌是指发生在左右肝管汇合部至胆总管下端的恶性肿瘤，近年来发病率逐步增高。胆管癌由于高发病率和高死亡率，严重危害人类健康。浸润和转移是恶性肿瘤基本的生物学特征，也是肿瘤患者主要死亡原因。胆管癌的发病、浸润、侵袭转移是一个复杂的多基因异常调控的过程。骨桥蛋白(OPN)是一种钙结合磷酸化糖蛋白，通过与受体结合对细胞的黏附、迁移等过程进行调节，参与肿瘤细胞的增殖、浸润等病理过程。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是一种蛋白水解酶,可特异性降解细胞外基质和基底膜，促进肿瘤生长和转移。本研究采用免疫组化SP法检测基质OPN和MMP-9在胆管癌中的表达，探讨其在胆管癌细胞侵袭转移中的作用。

1 临床资料

1.1 一般资料 收集2010年10月—2015年8月我院60例胆管癌手术患者临床病历资料，男34例，女26例；年龄35～76岁，平均63.8岁；其中高分化29例，中分化19例，低分化12例；肿瘤浸润T1、T2共33例，T3、T4共27例；其中有淋巴结转移者32例，无淋巴结转移者28例。所有患者术前均未行放、化疗等相关抗癌治疗。同时选取距胆管癌2 cm正常胆管组织30例作为对照。

1.2 方法及试剂 标本取材后经中性福尔马林固定,石蜡包埋,常规行4 μm厚度连续切片。石蜡组织切片经脱蜡水化，抗原修复，血清封闭，滴加稀释的一抗，4 ℃恒温过夜，滴加二抗，DAB显色，苏木精复染，盐酸乙醇分化、脱水、透明、封片、镜检。兔抗人OPN单克隆抗体和鼠抗人MMP-9单克隆抗体购于福州迈新生物技术有限公司，SP通用型免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒均购于福州迈新生物技术有限公司。

1.3 结果判断标准 OPN、MMP-9阳性表现为胞质可见清晰的浅黄色、黄色或棕黄色颗粒。根据阳性细胞数所占比例及着色情况综合评分。着色强度：不显色或显色不清为0； 浅黄色为1分；黄色为2分；棕黄色为3分。阳性细胞百分率：阳性细胞百分数<5%，0分；5%～35%，1分；36%～65%，2分；>65%，3分。两项得分相加，0～2分为阴性，≥3为阳性。每份标本置高倍镜下选取10个不同视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，由两位高年资病理医师独立观片后盲法判读。

1.4 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件处理数据，计数资料的比较采用2检验，当某一个理论数1

2 结 果

2.1 OPN和MMP-9在胆管癌、正常胆管组织中的表达 OPN和MMP-9在胆管癌组织表达阳性率均明显高于在正常胆管组织组织，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 OPN和MMP-9在胆管癌、正常胆管组织中的表达 例(%)

2.2 OPN和MMP-9在胆管癌组织中表达与临床病理特征的关系 胆管癌组织中，OPN、MMP-9阳性表达与患者性别、年龄及肿瘤分化程度无相关性(P>0.05)，而与肿瘤浸润、淋巴结转移相关，OPN和MMP-9在胆管癌组织T3-T4中阳性率高于T1-T2(P<0.05)，淋巴结转移阳性组高于淋巴结转移阴性组(P<0.05)。见表2。

2.3 OPN和MMP-9在胆管癌组织中相关性 在60例胆管癌组织标本中，OPN和MMP-9均表达阳性为32例，OPN阳性而MMP-9阴性为7例，OPN阴性MMP-9阳性为11例，OPN和MMP-9均为阴性10例。Spearman相关分析发现，胆管癌组织中OPN与MMP-9的表达呈正相关(r=0.319，P=0.012)。

表2 OPN和MMP-9在胆管癌组织中表达与临床病理特征的关系 例

3 讨 论

OPN是一种含特有RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列的钙结合磷酸化糖蛋白，在人体肾脏、平滑肌、胎盘、骨基质等不同组织细胞中均有发现。OPN有两种受体，一种是钙依赖性的整合素受体，OPN通过特有RGD序列位点与整合素受体结合；还有一种为CD44受体。OPN通过与其受体结合，可增强细胞趋化、黏附、迁移功能，抑制细胞凋亡，并促进细胞外基质重塑和血管生成，促使肿瘤的浸润和侵袭转移[1]。

目前，已有大量研究表明[2-4]，OPN在胃癌、结直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌等多种实体瘤中异常高表达，与肿瘤的发生、浸润和转移密切相关。李天然等[5]观察OPN转染人骨髓间充质干细胞(BMSCs)对高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)增殖、侵袭能力的影响，结果发现经 OPN 转染的BMSCs细胞对 MHCC97-H细胞侵袭具有明显的促进作用。Wang等[6]通过RT-PCR及免疫组化方法对结肠癌组织研究发现，OPN的高表达显著增加了结肠癌的淋巴转移与血行浸润，与肿瘤TNM的分期呈正相关，同时OPN mRNA高表达患者的生存期明显低于OPN mRNA低表达患者，因此认为OPN mRNA在结肠癌的发生、发展中有促进作用，可以成为结肠癌患者预后的独立预测因素。本研究中OPN在胆管癌组织过表达，与胆管癌细胞浸润、淋巴结转移显著相关，预示OPN在胆管癌的浸润、侵袭转移过程中发挥着重要作用，

MMP-9是细胞外基质蛋白水解酶家族成员之一，主要由巨噬细胞、中性粒细胞、血管内皮细胞和某些恶性肿瘤细胞合成分泌。MMP-9作为蛋白水解酶, 可对Ⅳ、Ⅴ型胶原和弹性蛋白构成的细胞基质(ECM)进行降解和破坏，为肿瘤提供转移的通道，加强肿瘤细胞黏附能力，并参与新血管形成，促进肿瘤生长和转移[7]。MMP-9通过降低肿瘤细胞之间的黏附性，提高肿瘤细胞的浸润和游走能力，促使肿瘤细胞突破基底膜向周围浸润转移，导致恶性肿瘤的侵袭转移。

在许多恶性肿瘤组织中均可检测到MMP-9呈高表达, 其表达与肿瘤的侵袭和转移密切相关[8-10]。卢建军等[11]应用免疫组织化学染色方法检测MMP-9在子宫内膜癌组织中的表达情况，发现MMP-9在子宫内膜癌组织中特异性高表达。张凤梅等[12]通过免疫组织化学SP方法检测MMP-9在胃癌和正常胃黏膜组织中的表达，结果表明MMP-9在胃癌组织呈高表达，且表达水平与癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移及大网膜转移有显著相关性，因此认为MMP-9在胃癌浸润、转移过程中发挥重要作用。本研究结果显示，MMP-9在胆管癌组织中异常高表达，表达水平与胆管癌浸润深度、淋巴结转移显著相关，即随着肿瘤浸润及淋巴结转移增加，MMP-9表达阳性率升高。

本实验中Spearman双变量相关性分析发现，OPN和MMP-9在胆管癌组织表达成正相关，二者表达阳性率升高具有一致性，因此认为，OPN和MMP-9在胆管癌的发生、侵袭转移中具有协同促进作用。其可能机制是OPN通过PI3K/Akt信号途径激活核转录因子(NF-κB)，提高尿激酶型纤溶酶激活物分泌，促使 MMP-9表达升高，引起细胞外基质和基底膜降解，从而导致肿瘤细胞发生浸润和转移[13]。

综上所述，OPN和MMP-9表达水平与胆管癌的肿瘤浸润、淋巴结转移密切相关，预示两者可能在胆管癌细胞侵袭转移过程中发挥重要作用，联合检测两项指标有助于胆管癌生物学行为的判断和预后的评估。同时为胆管癌的靶向治疗提供了新的研究方向。

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刘进忠，E-mail：504693127@qq.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.33.031

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1008-8849(2016)33-3733-03

2016-03-05