高效液相色谱法测定水中α-萘酚和β-萘酚

张国祯，李丹丹，马可婧

（甘肃省环境监测中心站，甘肃 兰州730020）

高效液相色谱法测定水中α-萘酚和β-萘酚

张国祯，李丹丹，马可婧

（甘肃省环境监测中心站，甘肃 兰州730020）

建立了液液萃取—高效液相色谱法测定水样中α-萘酚和β-萘酚的分析方法。对流动相组成及流速、柱温、萃取剂种类、色谱柱类型等条件进行了优化。选用三氯甲烷为萃取剂，乙腈:水（0.1%乙酸）=50:50为流动相，流速1mL/min，柱温40℃，作为色谱条件。在1L空白水样中添加低浓度水平的萘酚标准溶液（加标量为0.2μg），测定平行样品7份，α-萘酚加标回收率为92%～117%，标准偏差为5.5%；β-萘酚加标回收率为96%～121%，标准偏差为5.1%。当萃取体积为1L，浓缩至1mL，进样量为10μL时，α-萘酚和β-萘酚的方法检出限分别为0.15μg/L和0.17μg/L。

液液萃取；高效液相色谱；α-萘酚；β-萘酚

萘酚属于多环芳烃类物质的一种，由于羟基位置的不同有两种同分异构体，分别为α-萘酚和β-萘酚，是医药、农药、染料、化妆品生产合成等行业的重要中间体，有毒，对皮肤、黏膜有强烈的刺激作用，易于经皮肤吸收。在我国环境行业，《地表水环境质量标准》（GB3838-2002）、《污水综合排放标准中》（GB8978-1996）以及医药等行业排放标准中，水环境萘酚的各类水质限量标准和标准检验方法尚未建立，目前仍将其归类于挥发酚中。2015年环保部组织征集水体中萘酚类化合物的测定方法。因此，研究水中萘酚类化合物的的测定方法具有重要的意义。

目前，α-萘酚和β-萘酚的测定方法主要有紫外光谱法[1]、荧光光谱法[2-5]、高效液相色谱法[6-8]、电化学分析法和联用技术[9]。关于环境水体中α-萘酚和β-萘酚同时测定的方法报道不多。杨彤通过固相萃取，利用U-BondapackC18(0.39cm×30cm)色谱柱，甲醇和水(含1%乙酸)为流动相，完成了水体中α-萘酚和β-萘酚的同时测定[10]。本文采取液液萃取-高效液相色谱法成功实现了清洁地表水中α-萘酚和β-萘酚的测定。

1 实验材料与方法

1.1 样品采集与保存

采样选用棕色玻璃瓶灌装，采样时水样应充满采样瓶并加盖密封，防止空气进入，样品在4℃下避光保存。

1.2 仪器与试剂

仪器：配有四元梯度泵和荧光检测器（FLD）的液相色谱仪（Aglient1200）、液相色谱柱Discovery@C18 (25cm×4.6mm，5μm)、分液漏斗（1000mL）、氮吹仪（NEVAP 111）、有机相滤头（津隆，有机，0.22μm）。

试剂和水：甲醇、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳均为色谱纯级，乙酸等均为优级纯，实验用均为超纯水。

标准品：α-萘酚标准品（Accustandard），浓度为100mg/L；β-萘酚标准品，纯度为99.0%。

1.3 标准曲线绘制

称取10mgβ-萘酚,使用甲醇溶解并转移到100mL容量瓶中，定容至刻度线，β-萘酚浓度为100mg/L。将浓度为100mg/L的α-萘酚和β-萘酚标准溶液分别稀释至50mg/L、20mg/L、10mg/L。依次移取 20mg/Lα-萘酚和β-萘酚标准溶液 10、25、50、100μL，定容到1mL，移取50ppmα-萘酚和β-萘酚标准溶液100μL，定容到1mL，配制成浓度分别为0.2、0.5、1、2、5、10mg/L的混合标准溶液，用于绘制外标标准曲线。

1.4 样品前处理

量取1000mL水样到1000mL分液漏斗，加入20mL三氯甲烷，振摇5min,静置分层，萃取3次，合并有机相，有机相采用氮吹仪浓缩至1mL。

1.5 样品分析

进样体积为10μL，流速为1.0mL/min，色谱柱为Discovery@C18(25cm×4.6mm，5μm),柱温为40℃，荧光检测波长为λex=282nm，λem=480nm，流动相为乙腈:水（0.1%乙酸）=50:50。等梯度洗脱，流速为1mL/min。

2 实验结果与讨论

2.1 流动相选择

分别选用甲醇—水、乙腈—水、甲醇—水（0.1%乙酸）、乙腈—水（0.1%乙酸）为流动相，通过比较发现乙腈:水=55:45和 甲醇:水(0.1%乙酸)=55:45条件下，峰面积相对较小，峰宽较大，且色谱系统柱压较高，故选择乙腈:水=50:50和乙腈:水（0.1%乙酸）= 50:50体系。乙腈+水体系下，综合峰高、峰面积、峰宽、响应因子等因素，最终选择乙腈:水（0.1%乙酸）= 50:50，如图1所示。

图1 色谱分离谱图

2.2 色谱柱和柱温、流速的选择

选用了不同厂家不同型号色谱柱，通过比较发现液相色谱柱Discovery@C18(25cm×4.6mm，5μm)峰型和峰面积较好。

对不同柱温（25、30、40℃）条件下萘酚类化合物的分离效果进行比较，发现柱温对峰高和峰面积的影响变化不大，但峰宽依次略有降低，所以色谱柱温选择40℃。

比较了 0.8、1、1.2mL/min条件下色谱分离效果，α-萘酚和β-萘酚的分离度依次减小。0.8mL/min保留时间较长，峰宽较大。1.2mL/min两峰的分离度较差，故最终选择流速为1mL/min。

2.3 检测波长的选择

通过参考文献比较，选用荧光检测波长分别为λex=282nm，λem=480nm。

2.4 萃取条件的优化

选用二氯甲烷、氯仿、四氯化碳做为萃取有机溶剂，在空白样品中分别加标2mg/L、10mg/L各100μL，按照样品前处理方法进行萃取。浓缩至1mL，取10μL进入色谱柱，通过比较发现使用氯仿作为萃取溶剂效率较高，回收率较好。见表1。

表1 不同萃取条件回收率测定

2.5 线性范围、相关系数和检出限

配制0.2、0.5、1、2、5、10mg/L的萘酚类化合物混合标准溶液，得到α-萘酚和β-萘酚不同浓度响应值，通过线性方程拟合，其标准曲线、相关系数、方法检出限见表2。实验表明，各萘酚浓度为0.2～10mg/L具有良好的线性关系，相关系数＞0.9997。

表2 各萘酚化合物标准曲线、相关系数和方法检出限

在1L空白水样中加入低浓度萘酚类化合物（加标量为0.2μg），按照样品分析步骤平行测定7份，根据3倍标准偏差计算两种萘酚类化合物的方法检出限。当萃取体积为1L，浓缩至1ml，进样量为10μL时，α-萘酚和β-萘酚的方法检出限分别为0.15μg/L和0.17μg/L。

2.6 方法准确度和精密度

在1L空白水样中添加低浓度水平的萘酚标准溶液（加标量为0.2μg），平行样品7份，按照上述前处理和样品分析方法，测得加标回收率和相对标准偏差，见表3。

3 结论

以三氯甲烷为萃取剂，乙腈:水（0.1%乙酸）=50: 50为流动相，流速1mL/min，柱温40℃的液液萃取—高效液相色谱法，能够同时测定水体中α-萘酚和β-萘酚，具有良好的线性关系、准确度、精密度。当萃取体积为1L，浓缩至1ml，进样量为10μL时，α-萘酚和β-萘酚的方法检出限分别为0.15μg/L和0.17μg/L。该方法适用于地表水中α-萘酚和β-萘酚的测定，具有一定的应用和推广价值。

表3 α-萘酚和β-萘酚7次空白加标平行分析结果

[1] 刘美君，高国正．双波长紫外分光光度法同时测定-萘酚和-萘酚的含量［J］．郑州大学学报:自然科学版，1990，22(2):83-86

[2］ 胡敬田，杨景和，周广军，等．荧光同步扫描-双波长标准加入法同时测定-萘酚和-萘酚［J］．分析化学，1996(9): 1059-1061．

[3］ 李耀群，黄贤智，许金钩，等．导数-可变角同步荧光法用于1-萘酚和2-萘酚的同时测定［J］．高等学校化学学报，1993，14(3):334-335．

[4］ 巫淼鑫，郑用熙．-环糊精增敏荧光法分别测定1-萘酚和2-萘酚混合物中各自含量［J］．江苏石油化工学院学报，1994，6(Z1):42-46．

[5］ 周纯，王琼娥，庄惠生，等．直接荧光光度法同时测定水中痕量的1-萘酚2-萘酚［J］．光谱学与光谱分析，2008，28(1):2628-2632．

[6］ 张孝松，林长山，何天敬，等．反相高效液相色谱法同时测定1-萘酚和2-萘酚［J］．化学试剂，1989，11(8):129-131．

[7］ 段文胜，干丽君．高效液相色谱法测定1，5-萘二酚中的1-萘酚和2-萘酚［J］．上海染料，2003，31(2):31-32．

[8］ 黎俊宏，李贵荣，唐宏兵，等．反相高效液相色谱法测定尿中-萘酚-萘酚对硝基酚和间硝基酚［J］．光谱实验室，2011，28(2):782-786．

[9］ 叶存玲，刘清玲，王治科，等．分散液相微萃取-高效液相色谱法测定水中-萘酚和-萘酚［J］．分析试验室，2010，29(8):40-43．

[10］杨彤．高效液相色谱法同时测定水中的-萘酚和-萘酚［J］．广州化工，2012，40(7):143-144．

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