不同品种荔枝叶多糖的提取及含量比较*

范芳，翁楚垒

（广东石油化工学院环境与生物工程学院，广东茂名525000）

不同品种荔枝叶多糖的提取及含量比较*

范芳，翁楚垒

（广东石油化工学院环境与生物工程学院，广东茂名525000）

利用酶解提取法、Sevag法脱蛋白、乙醇析出法对茂名地区三种荔枝（白腊、三月红、黑叶）的荔枝叶多糖进行了初步提取，通过苯酚－硫酸法对提取物中的多糖质量进行了测定，并对不同的荔枝叶多糖的质量进行了比较。结果表明，这三种荔枝的荔枝叶多糖质量由多到少依次为：白腊＞三月红＞黑叶。

荔枝叶；多糖；提取；比较

荔枝是亚热带果树，常绿乔木，盛产于中国华南和西南等地，尤以广东和福建南部、台湾栽培最盛。现代研究表明，荔枝具有抗氧化、延缓衰老、降血糖、降血脂、抗肿瘤及调节造血功能等生理作用，初步确定活性多糖是荔枝多种生理功能的重要物质基础之一。茂名地区荔枝产量占全国60%以上，而荔枝叶目前为止还没有被利用起来，因此，本研究旨在对不同品种的荔枝叶多糖进行提取并比较其含量，为充分利用荔枝叶废弃物提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

从茂名荔枝园采摘白腊、三月红、黑叶三种荔枝叶；无水葡萄糖、苯酚、浓硫酸、氯仿、无水乙醇、正丁醇，均为分析纯。

可见分光光度计（V－50000型，上海元析仪器有限公司）；旋转蒸发器（RE－2000A，上海亚莱生化仪器厂）；循环水式多用真空泵（SHB－III型，郑州长城科工贸有限公司）；数显恒温振荡器（THZ－82B型，金坛市盛威试验仪器厂）；电动离心机（80－2型，常州奥华仪器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG－9246A型，上海精宏实验设备有限公司）；电子天平（FA12084型，上海精密科学仪器有限公司）；数显恒温水浴锅（HH－4型，常州奥华仪器有限公司）；冰箱（BCD－231E型，伊莱克斯（中国）电器有限公司）；九阳料理机（JYL－D051型，九阳股份有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 荔枝叶多糖的提取

1）酶解提取。称取荔枝叶粉末60 g，平均分为三组，各加入0.3 g（占荔枝叶粉末质量的1.5%）的纤维素酶，然后加入200mL的蒸馏水（料液质量比1∶10），放入水浴锅中在60℃温度下水浴2 h。把水浴后得到的样品用纱布（3至4层）把液体跟固体分开。把取得的液体在4℃下静置24 h后，在转速为4 000 r/min的离心机上离心20min。取上清液后重复离心两至三次［1］。

2）Sevag法脱蛋白。按照25∶4∶1的质量比在上述清液中分别加入氯仿和正丁醇，以36℃的温度在摇床里激烈摇晃30min，然后把摇晃后得到的样品以4 000 r/min的转速离心20min，去上清液。再重复脱蛋白的步骤两至三遍，就可以得到脱蛋白后的糖液［2］。

3）浓缩。把经过脱蛋白处理的样品糖液用旋转蒸发器在60℃、35 r/min的条件下进行浓缩，当浓缩液约为样品糖液体积的1/2时停止。

4）乙醇沉淀（醇沉）。向经过脱蛋白处理且经过浓缩后的糖液中加入4倍体积的乙醇（质量分数为90%），摇匀后在4℃的温度下静置24 h。把静置后的糖液以4 000 r/min的转速离心20min，除去上清液，洗净烘干后得到荔枝叶多糖的初步提取物，经过称量后可得出其质量［3］。

1.2.2 多糖质量的测定

1）标准曲线的绘制。准确吸取质量浓度为0.04mg/mL的标准葡萄糖溶液各0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL至具塞试管中，加蒸馏水至2mL，再加1mL质量分数为5%的苯酚，彻底混匀后加入5mL浓硫酸，再次彻底混匀后在沸水中水浴30min，迅速冷却至室温并静置20min。以空白试剂作为参比液进行对照，测定各溶液的吸光度，用紫外分光光度法于490 nm处测定吸光度A值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线［4］。

2）多糖质量的测定。准确称取三种荔枝叶多糖提取物10mg，于100mL容量瓶中加蒸馏水定容至刻度，混匀后各吸取1.0mL于具塞试管中，分别加入蒸馏水至2mL，再加入1mL质量分数为5%的苯酚，混匀后加入5mL浓硫酸，再次充分混匀，在沸水中水浴30min后，迅速冷却至室温并静置20min。以蒸馏水为空白对照，用紫外分光光度法于490 nm处测定粗多糖样品的吸光度A值，每种荔枝叶多糖提取液重复以上步骤三次，求平均值。

2 结果与分析

2.1 荔枝叶多糖提取

依据上述荔枝叶多糖提取方法，对白腊、三月红、黑叶三种荔枝叶多糖进行提取，称重后结果见表1。

表1 不同品种荔枝叶粗多糖提取量

2.2 葡萄糖标准曲线

以质量浓度为0.04mg/mL的标准葡萄糖溶液制作标准曲线，紫外分光光度计测定吸收值见表2。

表2 苯酚－硫酸法制作糖标准曲线

由表2绘制吸光值与葡萄糖质量之间关系的标准曲线，如图1所示。

由图1可以得到回归方程如下：y＝0.005 04x－0.002 93，R2＝0.996 87，回归方程R2大于0.99，因此该葡萄糖标准曲线可信。

2.3 三种荔枝叶多糖含量测定结果

根据上述多糖质量测定方法，可得到荔枝叶粗多糖的A490，如表3所示。

图1 葡萄糖标准曲线

表3 三种荔枝叶多糖的A490值

代入2.2标准曲线公式，可得三种荔枝叶多糖质量如表4所示。

表4 三种荔枝叶多糖质量

由表4可绘制出三种荔枝叶多糖质量柱状图，如图2所示。

图2 三种荔枝叶多糖质量比较

由图2可以看出，在第1次和第3次实验平均值的结果中，白腊荔枝叶多糖含量高于其它两个品种，而第二次实验中三月红的数据偏大，误差较大，但通过求平均值，第四组柱状显示结果与第1和第3次实验结果相同。

多糖提取率的公式如下：

将表4中平均值数据代入上述公式，可得三月红、白腊、黑叶多糖提取率分别为0.23%、0.20%、0.14%。

3 结论

经过以上实验数据可以得出：（1）三月红、白腊、黑叶的荔枝叶多糖提取率分别为0.23%、0.20%、0.14%；（2）三种荔枝的荔枝叶多糖含量由多到少依次是白腊、三月红、黑叶。因此，若要大规模地提取多糖，可考虑选择白腊荔枝叶。

［1］刘晓涵，陈永刚，林励，等.蒽酮硫酸法与苯酚硫酸法测定枸杞子中多糖含量的比较［J］.食品科技，2009，34（9）：270－272.

［2］鲁吉珂，古国峰，汪瑞，等.蝉花多糖提取工艺优化研究［J］.食品工业科技，2013，34（22）：196－199.

［3］李巧云，居红芳，翟春.五味子粗多糖提取工艺的研究［J］.食品科学，2004，25（5）：105－109.

［4］毛淑敏，许家珍，周帅飞.苯酚－硫酸法联合DNS法测定金银花不同花期多糖的含量［J］.中南药学，2015，13（1）：90－93.

Polysaccharides Extraction from Different Kinds of Litchi Leaves and Comparison of Content

FAN Fang，WENG Chulei
（College of Environmental and Biological Engineering，Guangdong University of Petrochemical Technology，Maoming 525000，China）

The polysaccharides in three kinds of litchi leaves is initially extracted bymethods of enzymatic hydrolysis，Sevag deproteinization and ethanol precipitation，and the content of polysaccharide in each kind of sample is determined by using phenol－sulfuric acidmethod.The polysaccharide contents from the three different Litchi leaves are compared，and the result is：Baila＞Sanyuehong＞Heiye.

Litchi Leaves；Polysaccharide；Extraction；Comparison

TQ281

A

2095－2562（2016）01－0028－03

（责任编辑：贺嫁姿）

2016－01－11；

2016－01－29

茂名市科技计划项目（0130320）

范芳（1977—），女，湖南隆回人，硕士，实验师，主要研究方向为天然产物的提取及活性研究。