孕妇乙型肝炎病毒感染模式与宫内感染的关系分析

叶建美，江丽燕

孕妇乙型肝炎病毒感染模式与宫内感染的关系分析

叶建美，江丽燕

目的分析孕妇乙型肝炎病毒感染模式与新生儿宫内感染的关系，为其临床防治工作提供参考。方法

孕妇；肝炎，乙型；肝炎病毒；宫内感染

乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）感染是世界范围内的难题，约有一半的人群为母婴传播所致[1]。我国是HBV感染高发区，出生后乙肝疫苗接种失败是新生儿感染HBV的主要原因。研究表明[2]，宫内感染是母婴传播的主要方式之一，HBV病毒经由胎盘、羊水以及阴道分泌物等上行传播至胎儿。其感染机制十分复杂，现有研究已证实母亲HBV的复制程度高是宫内感染的独立危险因素[3]。HBV的复制程度受到病毒感染模式的影响，本研究追踪分析HBV感染孕妇病毒感染模式与新生儿感染率的关系，以期为宫内感染的预防提供数据支撑。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集浙江省丽水市莲都区人民医院2012年7月至2015年12月收治的113例HBV感染孕妇；年龄22～37岁，平均（29.5±4.1）岁。纳入标准：（1）参考文献[4]诊断标准；（2）足月妊娠。排除标准：（1）妊娠期高血压、妊娠期糖尿病等妊期合并症；（2）先兆流产或早产；（3）明显黄疸；（4）孕期服用过免疫类药物；（5）合并有其他类型的肝炎病毒症状。其中单胎101例，双胞胎9例和三胞胎3例；剖宫产51例，顺产62例；孕周37～40周，平均（38.3±1.4）周；新生儿体质量3.1～4.9 kg，平均（3.7±1.1）kg。

1.2 研究方法

1.2.1 样本采集和预处理于分娩前1周左右采集孕妇空肘腹静脉血5～8m l；并于分娩时取脐带血，生产1个月后，主-被动免疫接种前取新生儿外周静脉血；置于灭菌管。所得的血液样品均分为两份：一份常温静置40min以上，3000 r/min离心15min分离血清；另一份采用梯度离心法获得外周血单个核细胞（PBMC）；所得样品均－20℃冷冻保存。

1.2.2 HBVM的测定HBVM指乙肝两对半相关指标，包括HBV表面抗原（HBsAg）、抗-HBs、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、抗-HBe及抗乙型肝炎核心抗原（简称抗-HBc）。采用全自动电化学发光免疫分析仪（COBAS6000，上海罗氏）以及上海卡迈舒化学技术有限公司提供的乙肝两对半检测ELISA试剂盒进行测定，严格根据说明书操作步骤进行。

1.2.3 病毒载量的测定同时检测血清和PBMC的HBV-DNA载量，其中之一为阳性时则为阳性。血清HBV-DNA检测需同时考察到外周血清和单个核细胞。检测方法为PCR荧光探针法，HBVDNA荧光PCR检测试剂盒由上海艾研生物科技有限公司提供。血清样品先以TRIZOL试剂提取总RNA，然后再进行反转录和实时荧光定量PCR扩增实验。PBMC样品采用1 640完全培养基培养，37℃、5%CO2，至对数生长期，调整细胞浓度为109/L，加入细胞裂解液，以裂解法提取DNA，行荧光定量PCR扩增实验。结果以指数形式表示，有效范围为103～108copy/m l，不足103copy/m l的为阴性病例。

1.2.4 宫内感染判断方法胎儿脐血检测到HBsAg或HBV-DNA阳性者，1个月后复查新生儿股静脉血，HBsAg或HBV-DNA阳性者即为宫内感染。

1.3 统计方法采用SPSS 16.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV-M与宫内感染的关系本组病例共发现11种HBV-M组合类型，前4位最常见的分别是小三阳、HBsAg与抗-HBc双阳性、大三阳及HBsAg阳性，其孕妇比例分别为37.2%、18.6%、17.7%、15.0%；113例孕妇共发生宫内感染31例，发生率27.4%，其中感染率最高的是大三阳60.0%，其次是小三阳26.2%、HBsAg与抗-HBc双阳性23.8%以及HBsAg与HBeAg双阳性17.6%；大三阳的感染率与小三阳、HBsAg与抗-HBc双阳性及HBsAg与HBeAg双阳性相比，差异均有统计学意义（2=6.637、5.528、6.838，均P＜0.05）。其他HBVM组合类型的孕妇例数本身偏少，未发现宫内感染。见表1。

表1 113例孕妇的HBV-M组合类型及宫内感染情况例(%)

2.2 病毒载量与宫内感染的关系本组病例HBV-DNA阳性率为50.4%（57例），根据HBV-DNA载量结果对孕妇进一步分组（血清和PBMC结果差异较大时已较高者为主），分为阴性、103～105，105～107，＞1074组。病毒载量在103～105、～107、＞107者宫内感染率均高于阴性者（2=11.755、21.996、27.395，均P＜0.05）。见表2。

表2 113例孕妇的HBV-DNA载量水平及宫内感染情况例（%）

3 讨论

孕妇感染HBV后，可能损伤胎盘血管，并通过垂直感染影响胎儿的免疫功能和正常发育，正因如此，妊娠合并乙肝是常见的高危妊娠之一，及时阻断HBV母婴垂直传播是乙型肝炎防治的一项重要工作。目前，对于HBV宫内感染的临床诊断标准，尚未达成共识。一般以出生时HBsAg或HBV-DNA阳性作为宫内感染的标准；也有研究指出[5]，出生时新生儿体内的抗体几乎全部来源于母体，此时阳性结果并不能完全预测宫内感染。因此本研究对出生时HBsAg或HBV-DNA阳性胎儿，于1个月后取其股静脉血，再次测定HBsAg或HBVDNA阳性率。以出生时脐血和1个月后静脉血均呈HBsAg或HBV-DNA阳性者为宫内感染标准，来分析孕妇HBV感染模式与新生儿宫内感染的关系。

HBV-M是反映HBV感染状态的常规指标，本组病例共发现11种HBV-M组合类型，前4位最常见的分别是小三阳、HBsAg与抗-HBc双阳性、大三阳及HBsAg阳性，其孕妇比例分别为37.2%、18.6%、17.7%及15.0%；这与国内其他报道结果基本相仿[6]。本组病例的宫内感染发生率为27.4%，其中大三阳的感染率最高，高达60.0%，与文献[7]报道相似。另外，本研究发现即大三阳之后宫内感染率风险最高的三种HBV-M组合类型分别是小三阳（26.2%）、HBsAg与抗-HBc双阳性（23.8%）及HBsAg与HBeAg双阳性（17.6%），差异无统计学意义（P＞0.05）。既往研究指出，HBeAg是HBV核心颗粒中的一种可溶性蛋白质，间接反映了病毒复制水平，因此HBeAg阳性说明病毒具备较高的血液传染能力，新生儿HBV感染和母亲HBeAg阳性明显相关[8]。本组HBV-M组合类型中，凡是HBeAg阳性或抗-HBe阳性者均局部较高的胎内感染率，也证实了其风险性。

另外，部分研究指出[9]，高载量HBVDNA也能增加新生儿HBV宫内感染风险，当孕妇HBV-DNA超出106copies/m l时，可能导致婴儿免疫失败。实质上，HBV-DNA载量是反应其传染性最直接的高特异性指标。基于HBV复制水平不高，本研究结合血清和PBMC两种样品来检测HBV-DNA阳性率，结果发现阴性、103～105，105～107，＞107者宫内感染率分别为5.4%、37.5%、48.3%、 66.7%，证实宫内感染率随着HBV-DNA载量的升高而升高，也说明了高载量HBV-DNA的风险性。也提示对于过高水平的HBV-DNA载量应给以适当的选择性阻断治疗，或行HBV疫苗与HBIV联合接种，以保障新生儿健康。

综上所述，本研究孕妇乙肝病毒感染模式与新生儿宫内感染关系的考察结果显示，大三阳孕妇宫内感染发生率较高，应做重点预防，小三阳及HBeAg阳性孕妇也存在一定程度的感染风险，可依据HBV-DNA载量作适当预防。

[1]高争,谭乐静,王晓红.妊娠晚期注射乙肝免疫球蛋白阻断乙肝病毒母婴传播的临床研究[J].医学理论与实践,2014,27(11): 1411-1413.

[2]张红霞,费安兴.乙肝病毒母婴传播及阻断分析[J].湖北理工学院学报,2013,29(5): 52-54,58.

[3]胡洪波.孕妇乙型肝炎血清学模式与新生儿宫内感染的相关性分析[J].实用预防医学,2011,18(12):2388-2389.

[4]中华医学会肝病学分会,中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].中华肝脏病杂志,2011,19(1):13-24.

[5]王兰芳.乙肝病毒携带产妇感染状态与新生儿母婴传播的相关性研究[D].安徽医科大学,2014.

[6]周学梅,刘小丽,邹婧,等.孕妇乙型肝炎病毒感染模式与宫内感染的关系分析[J].中华医院感染学杂志,2016,26(13):3066-3068.

[7]牛兆仪,王芳,靳晴,等.乙型肝炎病毒母婴垂直传播与乙肝抗原及乙肝DNA载量的关系研究[J].中外医疗,2014,27:105-106.

[8]李纪凤,李玮.孕妇乙型肝炎病毒感染对妊娠结局的影响分析[J].中华医院感染学杂志,2014,24(18):4619-4621.

[9]白淑芬,杨立新,王艳,等.乙型肝炎病毒感染孕妇病毒载量与婴儿免疫失败关系研究[J].中华实用诊断与治疗杂志,2011, 25(12):1230-1231.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.10.057

R714

A

1671-0800(2016)10.1369-03

2016-09-09

（本文编辑：姜晓庆）

323000浙江省丽水，丽水市莲都区人民医院

叶建美，Email：huyonghua 21@163.com

回顾性分析113例乙型肝炎病毒（HBV）感染孕产妇的临床资料，所有孕产妇均于分娩前抽取肘静脉血，新生儿取脐带血和出生后1个月静脉血，采用酶联免疫吸附实验检测血清学标志物HBV-M，采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA水平。结果本组病例共发现11种HBV-M组合类型，前4位最常见的分别是小三阳、HBsAg与抗-HBc双阳性、大三阳及HBsAg与HBeAg双阳性，比例分别为37.2%、18.6%、17.7%、15.0%。宫内感染发生率为27.4%，感染率由高到低依次为大三阳（60.0%）、小三阳（26.2%）、HBsAg与抗-HBc双阳性（23.8%）及HBsAg与HBeAg双阳性（17.6%）；大三阳的感染率明显高于其他各组（均＜0.05）。本组病例HBV-DNA阳性率为50.4%，宫内感染率随着HBV-DNA载量的升高而升高，组与组之间的差异有统计学意义（＜0.05）。结论大三阳宫内感染发生率较高，应做重点预防，小三阳及HBeAg阳性孕妇也存在一定程度的感染风险，可依据HBV-DNA载量作适当预防。