不同来源芍药的质量分析

张宏莲，孙辑凯，张梅娟，董巍，沙伟，朱巍巍

1.齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔161000；2.齐齐哈尔大学，黑龙江齐齐哈尔161000

不同来源芍药的质量分析

张宏莲1，孙辑凯1，张梅娟2，董巍1，沙伟2，朱巍巍2

1.齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔161000；2.齐齐哈尔大学，黑龙江齐齐哈尔161000

目的通过实验，检视野生、市售及药用植物园栽培赤芍中所含成分的数目，测定指标成分芍药苷含量，作为评价栽培赤芍质量优劣的科学依据。方法采用薄层色谱法，将对照溶液及供试液点样10 μL于GF254板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，254 nm下检视；采用HPLC法，条件是采用Waters E2695色谱系统，Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（250×9.4 mm，5 μm）；以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（50∶50）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长230 nm，进样量10 μL。结果在254 nm下检视，野生、市售及药用植物园栽培赤芍的TLC板明显的荧光斑个数分别为6、11、10；芍药苷的保留时间是5.078 min，野生、市售、栽培赤芍中芍药苷的含量分别为6.6%、7.4%、7.0%。结论依据TLC检视及HPLC结果可知，野生、市售及药用植物园栽培赤芍所含化学成分的种类有显著差异，不同来源的芍药中芍药苷的含量相近、相差不显著。

芍药；芍药苷；薄层色谱法；质量分析

芍药科（Paeonia）植物世界上仅一属（芍药属Paeontia L），约35种，原产于我国，栽培历史悠久，其根供药用亦有悠久的历史，主产于内蒙古、辽宁、河北、黑龙江、吉林、陕西、甘肃、山西等地。来源于芍药根的中药有赤芍、白芍两种，虽然都源于同一种植物，但是它们各自的功能主治却相差甚远，几乎没有相近之处[1-4]。2015年版《中国药典》第一部正文部分收载赤芍为毛艮科植物芍药（Paeonia lactiflora Pall.）或川赤芍（Paeonia veitchii Lynch）的干燥根，具有清热凉血、散瘀止痛、敛阴止汗的功效[2-8]，而白芍则为芍药的根经水煮、晒干后的炮制品。

通过查阅相关文献资料可知，对赤芍化学成分及指标成分芍药苷定量的报道屡见不鲜。该单位药用植物园从齐齐哈尔市周边地区引种道地赤芍，在仿野生环境下对赤芍种子做催熟处理后，人工栽培两年，采用TLC、HPLC法对其进行成分比较及芍药苷的定量检测，与内蒙古野生、产自山东的市售赤芍相比较，以初步评价栽培赤芍的质量。

1　仪器与材料

仪器：Waters E2695高效液相色谱仪、自动薄层色谱仪。

试剂和材料：芍药苷对照品、甲醇（默克化工技术有限公司）、磷酸二氢钾、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸、去离子水。实验样品经鉴定为赤芍的野生品、市售、栽培品的干燥根，编号分别为Y、S、C。

2　方法

2.1TLC检查

2.1.1对照品溶液的制备取芍药苷对照品，加乙醇制成2 mg/mL的溶液，以备TLC检定用。

2.1.2供试品溶液的制备取三个赤芍样品粉末0.5 g，加乙醇10 mL，超声处理后过滤蒸干溶剂后，加乙醇2 mL，溶解，备用。

2.1.3TLC检查吸取“2.1.1”、“2.1.2”项溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254板上，点样10 μL于GF254板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，于254 nm下检视。

2.2芍药苷含量测定

2.2.1对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成0.464 42 mg/mL的溶液，备用。

2.2.2供试品溶液的制备分别精密称取三种来源的赤芍样品粉末约0.5 g，各两份，见表1，精密加甲醇25 mL，浸泡4 h后超生处理，放冷，补齐失重，摇匀后过滤，取续滤液，备用。

表1　样品称量数据

2.2.3色谱条件与系统适用性试验色谱条件Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（250×9.4 mm，5 μm）；以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（50∶50）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长230 nm。

2.2.4系统适用性试验精密吸取取对照品溶液10 μL，连续进样5针，计算RSD；测定溶液时，理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000。

2.2.5含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

3　结果

3.1TLC检视结果

从TLC结果可知，野生、市售及药用植物园栽培赤芍均含有芍药苷，Rf=2.8；此外，野生赤芍有4个显著斑点、市售赤芍有5个。显著斑点及药用植物园栽培赤芍中有5个显著斑点，成分种类数目相差不大。

图1　TLC检视结果

表3　样品含量测定结果

3.2系统适用性试验

对照品溶液连续进样5针，理论塔板数均＞3 000，结果见表2。

3.3含量测定结果

含量测定实验，标准品溶液、供试品溶液分别进样2针，结果见表3。

表2　样品系统适用性试验结果

在同一测定条件下，野生、市售及药用植物园栽培赤芍所含芍药苷分别为1.8%、4.4%、6.5%，均符合相关法定标准要求，且药用植物园栽培赤芍品种的含量最高。

4　结语

该实验通过TLC法检查3种来源赤芍是否含有指标成分芍药苷，并通过HPC法进行定量检测，以初步判定药用植物园栽培赤芍的品质优劣，为化学成分的进一步检定极其药理活性的研究奠定基础。2015年版《中国药典》正文“赤芍”项下主要以芍药苷为对照品对其进行含量测定，限度是不低于1.8%，从该实验结果可知，此标准规定的下限略显偏低，本课题组也会在以后的研究中向横向扩展研究，以期建立更科学的赤芍质量标准。

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Analysis of Quality of Chinese Herbaceous Peony of Different Sources

ZHANG Hong-lian1,SUN Ji-kai1,ZHANG Mei-juan2,DONG Wei1,SHA Wei2,ZHU Wei-wei2
1.Qiqihar Medical College，Qiqihar,Heilongjiang Province,161000 China；2.Qiqihar University，Qiqihar,Heilongjiang Province, 161000 China

Objective To measure the peoniflorin content of marker substances as a scientific basis of evaluating the cultivated red paeonia quality degree by experiment and viewing the content number in the in the wild,commercially available and cultivated red paeonia in the medicinal botanical garden.Methods The 10 μL contrast solution and test solution samples were put on the GF254 plate by the thin-layer chromatography,and viewed under 254 nm with chloroform-ethyl acetate-methanol-formic acid(40:5:10:0.2)as the agent,HPLC method and Waters E2695 chromatographic system were adopted,chromatography was performed on Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 column(250×9.4 mm,5 μm),with methanol-0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution(50:50)as the mobile phase at a flow rate of 1.0 ml·min-1. The absorbance was monitored at 230 nm.The injection volume was 10 μL.Results Under the view of 254 nm,the obvious fluorescent spot numbers on TLC plate in the wild,commercially available and the cultivated red paeonia in the medicinal botanical garden were respectively 6,11 and 10,and the retention time of paeoniflorin was 5.078 min,and the content of paeoniflorin in the wild,commercially available and cultivated red paeonia was respectively 6.6%,7.4%and 7.0%.Conclusion The TLC view and HPLC results show that there are obvious differences in the chemical component type in the wild,commercially available and cultivated red paeonia in the medicinal botanical garden,and the content of paeoniflorin in the Chinese herbaceous peony of different sources is similar and the difference is not obvious.

Paeonia；Paeoniflorin；Thin layer chromatography；Quality analysis

R914.1

A

1672-5654（2016）11（a）-0042-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.31.042

齐齐哈尔市科技局农业攻关项目《野生赤芍种子繁育及发育机理研究》，项目编号：NYGG-201404。

张宏莲(1984.10-)，女，江苏沛县人，硕士，中级，研究方向：天然药物化学成分分析。

孙辑凯，男，硕士研究生，高级实验师，研究方向：中药资源学，E-mail：zhanghonglian_2006@163.com。

（2016-08-02）