葛根虎杖丸的提取工艺研究
2016-11-17王瑛兰刘元昆崔翠翠
王瑛兰 刘元昆 崔翠翠
（威海市中医院，山东 威海264200）
葛根虎杖丸的提取工艺研究
王瑛兰 刘元昆 崔翠翠
（威海市中医院，山东 威海264200）
目的：筛选葛根虎杖丸的最佳提取工艺。方法：以提取次数、时间、加水量为考察因素，以葛根素、出膏率含量为指标，采用正交设计L9（34），优选葛根虎杖丸的最佳提取工艺条件。结果：最佳提取工艺为：药材加10倍量水，煎煮提取2次，每次1.5小时。结论：优选出的提取工艺合理可行，为实际生产及其质量控制提供了依据。
葛根虎杖丸；提取工艺；出膏率；葛根素；正交设计
葛根虎杖丸为我院自制制剂，处方由葛根、虎杖、茵陈、党参、白术、丹参、砂仁、豆蔻等十二味中药组成，功能主治解酒毒，化瘀滞，健脾助运，降酶护肝。适用于酒毒瘀滞的酒精性肝病，症见倦怠乏力，胁胀不舒，脘胀便滞等酒精引起的肝功能损害（主要表现丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和γ-谷氨酰转肽酶的异常升高）。原临床用药的制备主要是粉剂入药，针对个体患者，制剂规模小，制备方法不规范、不统一。为保证生产工艺的科学性，对提取工艺条件进行正交试验设计，优选出最佳提取工艺，为临床提供更有效的药品。
本方来源于严用和的“葛花解酲汤”，在此基础上进行了大量的临床研究，确定了本方剂。其中葛根解酒之毒，虎杖、茵陈清湿热、降酶护肝，三者解毒降酶以恢复肝功能，共为君药。因此本试验将葛根素确定为考察指标，根据提取工艺将其与出膏率作为共同的考察指标。
1 仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪（DAD二极管阵列检测器，四元泵），CP 214型电子分析天平（奥豪斯仪器上海有限公司）。
葛根素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110752-200912）；甲醇（色谱纯，美国 Tedia公司）；其余试剂均为分析纯。
试验所用药材均购于山东菏泽泰山中药饮片有限公司，符合2015年版《中国药典》（一部）有关规定。所用样品均为威海市中医院制剂室生产。
2 方法与结果
2.1 试验设计
根据预试验结果，确定以出膏率、葛根素含量为考察指标。以加水量、提取时间、提取次数作为考察因素进行水平试验［1］。每个因素3个水平，见表1。
表1 因素与水平表
2.2 出膏率的测定
取处方量的1/10，共计21 g，分别取9份，按照正交试验L9（34）进行提取，滤过，合并滤液并浓缩至100 mL。再取上述9份浓缩液各25 mL，浓缩，干燥，精密称定，计算出膏率。
出膏率=（干膏质量×4/原药材质量）×100%。
2.3 葛根素的含量测定
2.3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent 1100型高效液相色谱仪（DAD二极管阵列检测器，四元泵）；流动相：甲醇-水（25∶75），检测波长 250 nm；柱温30℃；流速：1 mL/min。
2.3.2 供试品溶液制备 取正交试验提取的药液样品各1 mL，用甲醇稀释溶解至5 mL，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2.3.3 对照品溶液制备 参照2015年版《中国药典》方法［2］取葛根素对照品适量，精密称定，加 30%乙醇制成每l mL含6.026 4 mg的溶液，即得。
2.3.4 阴性对照样品溶液制备 取除葛根外其他药材处方量的1/10，共计17 g，加8倍量水煎煮2次，每次煎煮 1 h，滤过，合并滤液，作为阴性对照溶液。见图1。
图1 葛根素HPLC图
2.3.5 专属性试验［3］
2.3.5.1 标准曲线的绘制 取葛根素对照品溶液分别用30%的乙醇稀释，分别进样10 μL，以进样浓度X与峰面积Y进行线性回归处理，在0.188 3～ 6.026 4 mg/mL范围内，葛根素进样量与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为：
Y=298.14X+0.041 74，
r=0.999 9，见图2。
图2 葛根素标准曲线
2.3.5.2 精密度试验 精密吸取“2.3.3”项下葛根素对照品溶液 10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件，测定葛根素峰面积值，重复进样测定6次，计算得对照品峰面积值RSD为0.63%，表明测定方法的精密度良好。
2.3.5.3 稳定性试验 按“2.3.1”项下色谱条件，分别在 0，1，3，5，7，9，12，24 h，精密吸取照“2.3.2”项下制备的供试品溶液 10 μL，测定供试品溶液中葛根素峰面积值，计算供试品葛根素峰面积值的RSD为0.92%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.3.5.4 重复性试验 取本品适量，研细，按“2.3.2”项下制成6份供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件测定，RSD为1.42%，表明方法重现性良好。
2.3.5.5 加样回收率试验 精密称定本品6份，每份约1 g，分别精密加入葛根素对照品溶液（浓度为0.188 3 mg/mL）10 mL，精密称定质量，照“2.3.2”项下制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表3。样品中葛根素平均回收率为98.00%，RSD为1.13%（n=6），表明葛根素加样回收良好。
2.4 结果与分析
依据出膏率和葛根素的含量的权重比（1∶1）计算综合评分，有关试验数据及其计算分析结果见表4～5。
表3 葛根素加样回收率
表4 葛根虎杖丸正交试验设计与结果
表5 结果的方差分析
综合评分 = （葛根素含量/最大葛根素含量）×50+ （出膏率/最大出膏率）×50。
最佳工艺的确定：由方差分析表可以看出，本实验中，因素 A（加水量）、C（提取时间）对出膏率、葛根素的影响比较显著，且A＞C，因素B（提取次数）的影响不显著。通过极差大小分析，可以得出结论，影响水提取效果的顺序为A＞C＞B，以加水量影响为最大。综合直观分析及生产实际，确定水提取最佳工艺为 A3B2C3，即加10倍量水，提取2次，每次1.5小时。
2.5 验证试验
根据上述确定的工艺参数，分别测定葛根素含量、出膏率，计算结果见表6。
表6 三批样品的测定结果
3 讨论
3.1 本次试验前期对该处方中葛根素含量、出膏率进行醇提考察［4-5］，结合生产成本、临床应用等实际需要，选择水作为该制剂提取溶剂。本次试验中，以提取次数、加水量和提取时间为考察因素，以出膏率、葛根素的含量作为指标，采用正交试验L9（34）设计法，优选葛根素的提取工艺，结果其最佳工艺为加10倍量水，煎煮提取2次，每次1.5小时。加水量是影响煎出液质量的主要因素。验证试验说明优选的工艺条件稳定可行。
3.2 本次试验后，又对葛根虎杖丸的相对密度、粉碎细度、湿丸干燥温度、湿丸干燥时间长短等方面进行了相关方面的考察，结果表明采用本生产工艺进行生产，工艺简单、科学、合理，可以有效地提高生产效率，降低生产成本，并且生产出来的产品完全符合葛根虎杖丸质量标准（草案）的要求，说明本工艺切实可行。
［1］刘起华，文谨，王菲，等.葛参丸提取和干燥工艺研究［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（10）：19-21.
［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015年版）一部 ［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：333.
［3］赖杰仁.HPLC测定葛根温胆颗粒中葛根素的含量［J］.中国执业药师，2015，12（7）：17-18.
［4］ 张庭，吴丽华，肖丹，等.不同提取方法对葛根中葛根素提取率的影响［J］.云南中医中药杂志，2013，34（5）：62-63.
［5］ 张彤，徐莲英，陶建生，等.多指标综合评分法优选葛根提取工艺［J］.中草药，2004，35（1）：38-40.
Optimization of Extraction Process of Gegen Huzhang Granules
Wang Yinglan，Liu Yuankun，Cui Cuicui（Weihai TCM Hospital，Shandong Weihai 264200，China）
Objective：To optimize the extraction process of gegen huzhang granules.Methods：Serving the extracting rate and puerarin content as indexes，while the times and time duration for extraction as well as water volume as factors，the extraction process was optimized by orthogonal experiment L9（34）.Results：The optimal extraction process was as follows：the drug materials were added with 10 volumes of water and extracted for 2 times，1.5 h for each.Conclusion：The optimized extraction process is reasonable and feasible，which provides a basis for the actual production and quality control.
Gegen Huzhang Granules；Extraction Process；Extraction Rate；Puerarin；Orthogonal Experiment
10.3969/j.issn.1672-5433.2016.10.007
2016-05-18）
王瑛兰，女，主管药师。研究方向：中药新药与中药炮制原理研究。通讯作者E-mail：wyinglan336@126.com
