非小细胞肺癌EGFR基因突变126例分析及评价

李怡霖　倪　兵　高　艳　张　银

661099　云南省 红河州第三人民医院 肿瘤分子与细胞生物学实验中心



非小细胞肺癌EGFR基因突变126例分析及评价

李怡霖倪兵高艳张银

661099云南省 红河州第三人民医院 肿瘤分子与细胞生物学实验中心

目的设计对照实验，应用统计学方法分析及评价非小细胞肺癌EGFR基因突变的发生率及基因突变类型。方法以我院2013年3月至2015年8月接受治疗的126例确诊非小细胞肺癌患者为研究对象，根据PCR扩增及基因测序原理分析及评价非小细胞肺癌EGFR基因突变的发生率及基因突变类型。结果：42例(33.33%)肺癌患者EGFR基因发生突变，其中26例(64.90%)患者外显子19发生突变，13例(30.95%)患者外显子21发生突变，仅3例(7.14%)患者外显子20发生突变，其中外显子19均为碱基缺失型突变，外显子20及21均为碱基替换型突变。结论EGFR基因在非小细胞肺癌的预防、诊断、治疗过程中具有十分重要的临床价值。

非小细胞肺癌；EGFR基因；基因突变

云南省个旧市地区是全国重要的锡矿基地，其肺癌的发生率在全球处于较高水平。临床数据表明，非小细胞肺癌的发病率占肺癌总数的80%以上，且晚期非小细胞肺癌目前临床治疗效率并不显著，患者5年死亡率高达80%以上[1]。随着医疗水平的逐步提高，靶向药物、特异性药物成为新药研发领域的热门药物，临床数据表明，针对EGFR的靶向药物在治疗非小细胞肺癌方面具有较好的临床治疗效率[2]。根据这一结果相关学者认为EGFR基因与非小细胞肺癌的发生、发展具有十分重要的关系，通过分析及评价非小细胞肺癌患者EGFR基因与正常人EGFR基因发生突变的差异可以为非小细胞肺癌的预防、诊断、治疗等提供重要的临床依据，以下是本次研究的全部内容。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以我院2015年10月至2016年10月接受治疗的126例确诊(诊断标准：WHO肺癌分类及诊断标准[3])非小细胞肺癌患者为研究对象。126例受试患者年龄介于27～76岁，平均年龄为58岁，年龄≥60岁患者66例，60岁以下患者60例；男性患者85例，女性患者41例；病理分期结果表明I期、II期、III期、IV期非小细胞肺癌患者分别为16例、25例、66例、19例，其中67例患者发生淋巴结或远处转移，应用10%福尔马林固定手术过程中患者癌症组织，或分离晚期患者血浆。

1.2 方法

1.2.1 基因提取 将10%福尔马林固定的肺癌组织切片离心管内加入适量二甲苯进行脱蜡处理，用乙醇将脱脂后的标本清洗干净后晾干。将晾干的标本置于干净离心管内加入适量配制号的解离液及200 L磷酸盐缓冲液和无水乙醇，震荡后离心。将离心管内离心后吸附DNA转移到干净离心管，加入30～100 LBuffer DTE，静置5min后8000r/min速度离心1min，将提取DNA保存备用。

1.2.2 基因检测 应用EGFR基因突变29种检测试剂盒对上述提取的DNA进行基因检测，以上述提取的DNA作为模板，以PCR扩增仪对EGFR基因19～21外显子进行基因扩增，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计指标 分别以年龄、性别作为分组因素，统计性别、年龄与非小细胞肺癌患者EGFR基因突变及突变基因类型的关系。

1.4 统计学方法：应用统计学软件SPSS22.0对受试者EGFR基因突变概率进行统计学分析，以外显子19～21号基因作为统计依据，计数资料以百分比(%)的形式表示，以t检验或检验表示组间差异，以P<0.05记为统计结果具有显著统计学差异。

2 结果

2.1 年龄、性别因素与非小细胞肺癌患者EGFR基因突变的关系：统计结果表明，126例非小细胞肺癌患者共计42例发生EGFR基因突变，其中60岁以上患者31例，女性患者39例，即非小细胞肺癌与EGFR基因突变概率相关性显著，其中年龄、性别因素是影响EGFR基因突变的主要因素，年龄的增大会增加非小细胞肺癌患者EGFR基因突变概率，女性患者EGFR基因突变概率显著高于男性，该统计结果具有显著统计学意义。见表1

表1 年龄、性别因素与非小细胞肺癌患者EGFR基因突变相关性(n/%)

2.2 EGFR基因突变类型与非小细胞肺癌相关性分析：实验统计结果表明外显子19～21号基因突变与非小细胞肺癌的诊断、治疗具有显著临床相关性，其中19、21号外显子突变类型相关性更加显著，即外显子19、21与非小细胞肺癌相关性十分显著，在非小细胞肺癌预防、诊断、治疗中具有显著临床价值。见表2

表2 EGFR基因突变类型与非小细胞肺癌相关性(n/%)

3 结论

EGFR基因是一种细胞膜表面的糖蛋白受体，与细胞表皮生长显著相关，该基因具有酪氨酸激酶活性，主要以信号转导的形式进入细胞核，影响细胞的增殖、分化、凋亡等生命过程，因此该基因与非小细胞肺癌患者原癌基因的激活具有密切相关性[4]。随着环境的恶化，生活压力的增大，肺癌的发病率初步提高，非小细胞肺癌发病率占全部肺癌发病率总数的80%以上，且该疾病死亡率极高，5年内存活率不足15%。相关文献报道显示，EGFR基因突变与非小细胞肺癌的发生、发展密切相关，探讨EGFR基因与非小细胞肺癌的相关性有助于非小细胞肺癌的预防、诊断、治疗[5]。本文以统计学方法，应用PCR扩增仪及EGFR基因突变29种检测试剂盒对EGFR基因突变与非小细胞肺癌的相关性进行统计学探讨。

实验结果表明，EGFR基因突变概率占非小细胞肺癌发病总概率的1/3，其中年龄、性别因素与EGFR基因突变概率密切相关，年龄60岁以上非小细胞肺癌患者EGFR基因突变概率显著增大，女性非小细胞肺癌患者EGFR基因突变概率显著高于男性，且外显子19和21是EGFR基因主要突变部位。综上所述，EGFR基因突变与非小细胞肺癌具有显著相关性，通过检测外显子19、21可以达到对非小细胞肺癌高效的预防、诊断，并显著提高非小细胞肺癌治疗效率，为该病临床治疗提高监控依据，具有很好的临床价值。

[1] 林小梅,莫娟梅,邹敏,等.EGFR突变的非小细胞肺癌患者EML4-ALK融合基因的检测及其临床特征分析[J].中国病理生理杂志,2012,28(6):1135-1139.

[2]陈顺平,苏海燕,吴文乔,等.非小细胞肺癌EGFR基因突变与扩增及蛋白表达的相关性分析[J].临床与实验病理学杂志,2015,31(6):657-665.

[3]赵瑾,田俏梅,黄玉梅,等.湖南地区238例非小细胞肺癌EGFR基因突变状态分析[J].肿瘤药学,2014,4(3):187-192.

[4]周晓秋,王东关,孙希印,等.非小细胞肺癌EGFR基因和蛋白检测的比较分析[J].临床与实验病理学杂志,2012,28(10):1124-1126.

[5]罗炜,王慧.非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变检测的系统评价[J].现代预防医学,2014,41(20):3751-3755.

10.3969/j.issn.2095-9559.2016.06.023

2095—9559(2016)06—2631—02

2016-02-29