阿尔茨海默病患者维医异常体液质与ApoE基因多态性关系的研究

富雪婷，王　尧,2，热娜古丽·艾则孜，辛小红，巴哈尔·哈德尔

(1新疆医科大学研究生院，乌鲁木齐　830011；2新疆伊犁州中医医院，新疆　伊宁　835000；新疆医科大学1附属中医医院，鲁木齐　830000,4中医学院，乌鲁木齐　830011)



·维医维药·

阿尔茨海默病患者维医异常体液质与ApoE基因多态性关系的研究

富雪婷1，王尧1,2，热娜古丽·艾则孜3，辛小红4，巴哈尔·哈德尔4

(1新疆医科大学研究生院，乌鲁木齐830011；2新疆伊犁州中医医院，新疆伊宁835000；新疆医科大学1附属中医医院，鲁木齐830000,4中医学院，乌鲁木齐830011)

目的探讨阿尔茨海默病患者维吾尔医异常体液质与ApoE基因型的关系，为预防阿尔茨海默病提供新思路。方法从新疆乌鲁木齐市18所老年公寓中，筛选出202例阿尔茨海默病患者为病例组，按照维吾尔医异常体液质分为异常黑胆质、异常黏液质、异常胆液质、异常血液质，并以同期新疆乌鲁木齐市老年公寓经门诊体检的30例健康老人设为正常组，进行ApoE基因多态性的检测。结果病例组及正常组ε3/3等位基因分布比例最高，且正常组ε3/3分布比例(73.4%)高于病例组(54.5%)；ε3/4、ε4等位基因分布差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论ε4等位基因是阿尔茨海默病的危险因素，异常黑胆质型的阿尔茨海默病患者ApoEε4等位基因频率高于其他3型。

阿尔茨海默病；维吾尔医学；异常体液质；ApoE基因多态性

维吾尔医学(以下简称维医)古籍中虽没有“痴呆”的病名，但是对“善忘”、“遗忘”的病因病机、症状体征防治等均有详细的记载[1]。关于名称有“阿麻开提”(呆病)、“尼斯扬”(善忘)等描述，其主要表现为记忆力减退或丧失、健忘、言行如同小孩，多见于高龄老人[2-7]。维医的体液学说,包括胆液质(saprahilit)、血液质(kanhilit)、黏液质(belghemhilit)和黑胆质(savdahilit)[8]，异常体液学说是维医疾病机制和诊治疾病的主要特色之一，在维医治疗过程中起到不可替代的指导作用[9-10]。

老年性痴呆又称阿尔茨海默病(Alzhmier’s disease,AD)，是一种渐进性神经退化性疾病,以进行性记忆认知障碍、人格改变为主要特征[11]。AD发病的具体机制较为复杂，有关研究显示AD的发病与APP、PS-1、ApoE、A2M、MTHFR基因有关[12-13]。但大量研究表明，ApoEε4等位基因可能是散发型AD发生的危险因素，而未发现其他基因突变与AD有关，故借助新疆地域特色，本课题组探讨AD的维医异常体液质分布规律与ApoE基因多态性的关系，为今后维医结合西医对AD治疗及预防奠定一定的理论基础。

1　资料与方法

1.1研究对象及分组选取于2014年3月-2015年5月新疆乌鲁木齐市18所老年公寓AD患者202例(病例组)为研究对象，其中男性104例，女性98例，年龄在65～98岁，平均(76.20±7.99)岁。另将同期新疆乌鲁木齐市30例体检者列为正常组，其中男性13例，女性17例，年龄65～96岁，平均(79.60±8.20) 岁。AD西医诊断标准:主要参照美国精神病学会(APA)修订的《精神障碍诊断与统计手册》第4版(DSM-IV-R)老年性痴呆诊断标准[14]。维医诊断标准:根据《维吾尔医学诊断学》[10]制定,维医异常体液质分型标准参照《维吾尔医体液论及其现代研究》[15]制定，将符合西医及维医诊断标准的AD患者纳入。排除标准：年龄<65岁、血管性痴呆、混合性痴呆以及其他的痴呆患者，伴有昏迷、失语、听力障碍及其他不能配合的患者，有脑外伤、中毒、精神疾病等对智能影响比较明显的患者或非自愿参与研究的患者。

1.2实验方法在清晨空腹安静状态下，抽取研究对象外周静脉血5 mL,EDTA-Na2 抗凝，采用天根公司提供的血液基因组DNA提取系统(0.1～20 mL)(非离心柱型)试剂盒，实验步骤按照说明书进行，应用2%琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA纯度，再用核酸定量仪测定DNA浓度，进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增，其反应循环设置为：94℃ 3 min，94℃ 30 s,55℃ 30 s,72℃ 1 min,循环30次，72℃ 5 min；引物由华大基因公司提供(引物序列：上游引物:5′-AGGTCCAGGTTTCATTCTGC-3′，下游引物:5′-ATGCGAGAC-CTGGGACTGAGA-3′)，最后对目的基因直接测序，从而获得ApoE基因的不同基因型(表1)。基因型频率=基因型频数/总例数。等位基因频率采用平衡法：ε2=ε2/2+1/2(ε2/3+ε2/4)；ε3=ε3/3+1/2(ε2/3+ε3/4)；ε4=ε4/4+1/2(ε3/4+ε2/4)。

表1　ApoE基因型的确定方法

1.3统计学处理采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析，计数资料的组间比较用χ2检验。基因频率用基因计数法计算，病例组与正常组的ApoE基因频率及等位基因频率之间的比较用χ2检验，维医异常体液质各个分型与ApoE基因多态性之间比较用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1病例组维医异常体液质分型分布按“维吾尔医体液论及其现代研究”进行异常体液质分型，维医异常体液质分布频率为：异常黑胆质>异常黏液质>异常胆液质>异常血液质(表2)。

表2　202例AD患者维医异常体液质分型构成比分布

2.2病例组及正常组的基因频率及等位基因频率的分布在病例组与正常组中均以ε3/3比例最高，其次是ε3/4、ε2/3,正常组中ε3/3频率分布构成比(73.4%)较病例组(54.5%)高；病例组ε3/4频率分布构成比(29.2%)明显高于正常组(3.3%)，且差异有统计学意义(P<0.01)，病例组ε2/3频率分布构成比(10.9%)低于正常组(13.3%)，差异无统计学意义(P>0.05)；两组比较中ε2/2、ε4/4、ε2/4分布很少，且差异均无统计学意义(P均>0.05)；两组ε4等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05)，ε2、ε3等位基因频率分布差异均无统计学意义(P均>0.05)；由此说明ε3/3及ε3等位基因是人体中常见基因型，而含有ε4等位基因患有AD可能性大，但证据尚不足，需进一步证明ε4等位基因与AD发病有关(表3)。

表3　病例组及正常组ApoE基因型及等位基因频率的分布/例(%)

2.3维医各个异常体液质分型与含有ε4等位基因的相关性含有ε4等位基因的AD发病的相对危险度OR=5.495，进一步证明ε4等位基因是AD发病的一个危险因素，因此只需研究维医异常体液质各个分型与ε4等位基因的相关性即可。异常黑胆质与含有ε4等位基因比较差异有统计学意义(P<0.05)；而异常胆液质、异常血液质及异常黏液质与含有ε4等位基因比较差异均无统计学意义(P>0.05)(表4)。

表4维医各个异常体液质分型与含有ε4等位基因的相关性/例

组别异常黑胆质异常胆液质异常血液质异常黏液质含有ε4等位基因27235不含ε4等位基因82252236χ2值6.5912.4790.7611.288P值0.010.1150.5810.256

3　讨论

维医古籍把AD描述为“阿麻开提”(呆病)及“尼斯扬”(善忘)等[3]，主要表现是思维力减退或丧失，原因是由于异常黑胆质过积引起，或者异常黏液质过剩积淤脑部所致[4],其中异常黑胆质主要由于干寒性或干性过剩所致，异常黏液质主要是由于湿性过剩所致，干性过剩者表现为近期记忆障碍；湿性过剩者表现为远期记忆障碍。《医学之目的》[6]认为本病多由干寒性过剩、湿寒性过剩、干性过剩、热性过剩以及胆液质和血液质过剩引发，或布哈拉提(腐败之气)犯前脑而诱发，其主要表现为干寒性过剩者见失眠、口鼻干燥、易忘旧事；湿寒性过剩者见嗜睡、口鼻流液、舌质淡、苔白腻、易忘旧事、能记当事，但遗忘速度较快；干性过剩者见视力和听力正常，易忘旧事，不记当事；热性过剩者见遇事急躁，烦躁不安；胆液质和血液质过剩引发或布哈拉提(败气)犯前脑者，多见智力混乱、胡思乱想、视觉错乱等。说明异常体液质4种分型都与AD有着密切的关系。

维医认为不同类型异常体液质可以导致不同疾病，故不同异常体液质人群患病几率也是不同的。无论是黏液质、胆液质、血液质还是黑胆质,在强热作用下“燃烧”，失去其正常生理功能最终都会形成异常黑胆质，也就是说不同体液性疾病最终发展为异常黑胆质。据调查表明，在多数复杂性疾病中，老年人的黑胆质体液型的异常明显高于中年人和青年人[16]。本实验研究表明维医异常体液质各个分型的分布情况，异常黑胆质(53.9%)>异常黏液质(20.3%)>异常胆液质(13.3%)>异常血液质(12.4%),说明患AD的老年人群中，异常黑胆质占大部分，证明异常黑胆质与AD的发生有着密切的关系。

目前对于AD发病的病因病机尚不明确，有研究显示AD发病与ApoE基因型有着密切联系[17]。人类ApoE基因主要有ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4等位基因，分别编码ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4蛋白,产生6 种表型:纯合子ε2/2、ε3/3、ε4/4，杂合子ε2/3、ε2/4、ε3/4[18]。ApoEε4等位基因已确认是散发型和迟发型AD最显著的风险基因，并且AD患者中ApoEε4等位基因携带者占65%～80%[17,19]。在AD的研究中，着重研究ApoEε4 等位基因[20]。在晚发的AD家族中，不伴有ApoEε4的发生AD的危险性为20%，含ApoEε4杂合子的这种危险性增加到45%，而有ApoEε4纯合子增加到90%[21-23]，再次证明ApoEε4等位基因是AD的危险因素。本研究结果显示病例组ε4、ε3/4基因频率与正常组相比有差异性，尤以病例组明显，而ε3/3及ε3等位基因是人体常见型，可以通过确定基因型来辅助AD的诊断。本研究结果显示，异常黑胆质与含有ε4等位基因差异有统计学意义(P<0.05)，证明异常黑胆质患者中含有ε4等位基因可作为AD发生的危险因素。而异常黏液质与含有ε4等位基因差异无统计学意义(P>0.05)，考虑是由于异常黏液质样本量不足所致，今后需加大样本量进一步论证异常黏液质、ε4等位基因与AD的关系。

本研究再次论证ε4等位基因与AD的密切关系，同时提出异常黑胆质中含有ε4等位基因的人群更易患AD，为阿尔茨海默病患者的早期预防提供指导方向，为健康人群今后可能的病变提供早期干预预防基础。

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(本文编辑杨晨晨)

Study on the relationship between the syndrome types of Alzheimer′s disease in Uyghur medicine and ApoE gene polymorphism

FU Xueting1，WANG Yao1,2，Renaguli Aizezi3，XIN Xiaohong4，Bahar Hader4

(1Graduate School of Xinjiang Medical University,Urumqi 830011,Cina；2Xinjiang Yili Chinese Medicine Hospital，Xinjiang Yining 835000,China；3Fourth Affiliated Traditional Chinese Hospital，Urumqi 830000，China;4College of Traditional Chinese Medicine,Xinjiang Medical University，Urumqi 830011,China)

ObjectiveThe relationship between the syndrome types of Alzheimer′s disease in Uyghur medicine and ApoE gene polymorphism were investigated to provide new ideas for the treatment and prevention of alzheimer′s disease in the future.Methods202 cases of alzheimer′s patients came from 18 elderly apartments in Urumqi city,Xinjiang Uygur Autonomous Region as case group.According to Uyghur medicine,they were differentiated as abnormal savda,abnormal phlegm,bile abnormal mass,abnormal blood quality.At the same time,30 healthy elderly people lived in the apartments for aged in Urumqi,Xinjiang Uygur Autonomous Region were diagnosed as normal group.The ApoE gene polymorphism was tested.ResultsThe proportion of ε3/3 was the highest in case group and normal group,and the distribution ratio of ε3/3 in the normal group was 73.4%,which is higher than that in the normal group (54.5%).The distribution of ε3/4 and ε4 allele was statistically significant (P<0.05).ConclusionThe ε4 allele is a risk factor of Alzheimer′s disease.The allele frequency of ApoEε4 in Alzheimer′s disease patients with abnormal black bile is higher than that of other three types.

Alzheimer′s disease; Uyghur medicine; ApoE gene polymorphism

国家自然科学基金(81260563)

富雪婷(1991-)，女，在读硕士，研究方向：中医学与维吾尔医学对老年性痴呆辨证分型研究。

巴哈尔·哈德尔，女(维吾尔族)，教授，副主任医师，硕士生导师，研究方向：中医学与维吾尔医学对老年性痴呆辨证分型研究，E-mail：1301885416@qq．com。

R749.16

A

1009-5551(2016)11-1471-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.11.031

2016-05-27]