HPLC法测定党参中烟酸和党参炔苷的含量＊

高欢，李阳，闫辉，李灿，吕青涛，容蓉

（山东中医药大学，济南 250355）

HPLC法测定党参中烟酸和党参炔苷的含量＊

高欢，李阳，闫辉，李灿，吕青涛，容蓉

（山东中医药大学，济南 250355）

建立HPLC法同时测定党参中烟酸及党参炔苷含量的方法。采用Syncronis AQ色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B）作流动相进行梯度洗脱，流量为1 mL/min，紫外检测波长为285 nm，柱温为30 ℃，烟酸和党参炔苷可在24 min内实现与其它成分良好分离。烟酸的质量浓度在9.6～57.6 μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好（r=0.999 2），检出限为0.94 μg/mL，测定结果的相对标准偏差为1.5%（n=6），平均加标回收率为99.5%；党参炔苷的质量浓度在9.92～59.52 μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好（r=0.999 6），检出限为0.12 μg/mL，测定结果的相对标准偏差为1.9%（n=6），平均加标回收率为101.1%。该方法操作简便、快速、准确，具有良好的重复性，可作为党参中烟酸、党参炔苷测定的有效方法。

党参；烟酸；党参炔苷；HPLC

党参（Codonopsis Radix）是临床常用中药材，《中华人民共和国药典》2015版收载的党参主要有桔梗科植物党参、素花党参或川党参3种［1］。党参有补中益气，健脾益肺之功效，主治脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴等症，是人参的替代品［2］。现代药理研究表明，党参有治疗冠心病、高血脂症，调节胃肠功能，抗溃疡，增强机体免疫力，抗缺氧，抗肿瘤，抗衰老等方面的药理作用［3-7］。根据文献报道，党参中主要有聚炔类、三萜、甾类、有机酸、苯丙素类、倍半萜、黄酮、生物碱等多种化学成分［8-9］。

烟酸为水溶性B族维生素，对于由低密度脂蛋白胆固醇增多和高密度脂蛋白胆固醇减少所导致的血脂异常有治疗效果［10］，可以减少冠心病死亡率［11］，减缓动脉粥样硬化进程，降低心血管疾病的发生率和死亡率［12］。这与党参的传统中医临床应用及现代药理研究一致，可见烟酸是党参中重要的有效成分。党参炔苷具有抗氧化、抗溃疡、激活NF-kB等药理活性［13-15］，与传统中医用药相符合。党参炔苷在不同产地党参中含量均较高，有很好的专属性和特征性，药典将党参炔苷作为党参质量标志性成分［16-17］。目前，对党参中党参炔苷的HPLC含量测定方法和烟酸的高效毛细管电泳测定方法已有文献报道［17-18］，但党参中烟酸的HPLC含量测定方法尚未建立。笔者首次建立了同时测定党参中烟酸和党参炔苷含量的HPLC方法，该方法测定党参中烟酸与文献［18］方法相比，分离度更好，基线平稳，峰形良好。虽然高效液相色谱法和高效毛细管电泳法都能在较短时间内实现党参中烟酸的分离，但由于毛细管直径小使光路太短导致用紫外吸收光谱法时灵敏度较低且电渗会因样品组成而变化进而影响分离重现性，相对而言高效液相色谱法有更好的灵敏度和重现性，更适用于定量分析。笔者对8批党参药材中两种成分的含量进行了测定，为党参的质量控制和开发利用提供了参考依据。

1　实验部分

1.1主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Waters e2695型，附带Waters 2998 PDA检测器、在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱，美国沃特世公司；

电子天平：AE240型，感量为0.01 mg，瑞士梅特勒公司；

烟酸、党参炔苷对照品：纯度均大于98%，批号分别为D-026-150728，Y-062-150801，成都瑞芬思生物科技有限公司；

乙腈：特级色谱纯，湖北昌泰兴业科技有限公司；

磷酸：色谱纯，国药集团化学试剂有限公司；

实验所用其它试剂均为分析纯；

实验用水为Milli-Q超纯水。

1.2对照品溶液的制备

分别精密称取烟酸、党参炔苷对照品适量，以纯水溶解并定容至25 mL容量瓶中，得到烟酸、党参炔苷质量浓度分别为480，496 μg/mL的对照品储备液。分别精密量取上述溶液各1 mL于10 mL量瓶中，得烟酸、党参炔苷质量浓度分别为48，49.6 μg/mL的对照品溶液。分别精密量取上述对照品储备液各2 mL，于10 mL量瓶中配制成烟酸、党参炔苷的混合对照品溶液，质量浓度分别为96，99.2 μg/mL。

1.3供试品溶液的制备

精密称取党参药材粉末1 g（过450 μm孔径筛），置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇80 mL，密塞，称量，超声提取30 min（45℃，200 W，40 kHz），放冷，再次称量，用甲醇补足减少的质量，摇匀，滤过。精密量取滤液50 mL，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，加甲醇稀释定容至标线，摇匀。用0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。

1.4色谱条件

色谱柱：Syncronis AQ柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～6 min，0%～3% A；6～15 min，3%～25% A；15～24 min，25%～28% A）；流量：1 mL/min；柱温：30℃；检测波长：285 nm；进样体积：20 μL。

1.5色谱图

在1.4色谱条件下，对混合对照品溶液及供试品（批号为20150301）溶液进行测定，色谱图见图1、图2。

图2　供试品液相色谱图

2　结果与讨论

2.1提取条件的优化

以烟酸、党参炔苷的含量为指标，进行了党参的提取条件考察，分别考察了30，45，60℃下的提取效率，结果显示在45℃下提取效率高。考察了30，60 min的提取效率，差别不明显，为节约时间提取时间选择30 min。最终选择用100%甲醇在45℃下超声提取30 min。

2.2检测波长的考察

采用PDA检测器在210～400 nm进行全波长扫描，采集光谱图。结果发现在285 nm时烟酸和党参炔苷的色谱峰面积都相对较高，色谱峰形和分离度良好，基线平稳，因此选择285 nm作为检测波长。

2.3流动相的选择

为实现多组分的良好分离，实验考察了等度洗脱和梯度洗脱，并分别比较了甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.2%甲酸水溶液、乙腈-0.2%乙酸水溶液5种流动相系统，最终以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱（0～6 min，0%～3% A；6～15 min，3%～25% A；15～24 min，25%～28% A），样品的分离度高、基线平稳，各指标峰峰形良好，重复性良好。

2.4色谱柱的选择

烟酸极性较大，为实现较好分离，对Syncronis AQ色谱柱和ZORBAX SB C18色谱柱进行了考察。当采用水性柱Syncronis AQ色谱柱时，能够使用含水比例更高的流动相进行梯度洗脱，色谱图基线平稳、分离度高、峰形良好。

2.5线性方程和检出限

分别精密吸取烟酸和党参炔苷混合对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL，置于10 mL容量瓶中，用超纯水稀释定容，制成含烟酸分别为9.6，19.2，28.8，38.4，48，57.6 μg/mL，含党参炔苷分别为9.92，19.84，29.6，39.68，49.6，59.52 μg/mL的系列混合对照品工作溶液。以质量浓度X（μg/mL）为横坐标，以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，并进行线性回归，得线性方程及线性范围，结果见表1。由表1可知，烟酸和党参炔苷的线性范围较宽、线性拟合较好，均能满足分析要求，可以准确定量。分别精密量取烟酸和党参炔苷对照品溶液，逐步稀释，按1.4色谱条件进行测定，至信噪比S/N≥3，此时进样浓度即为对照品的检出限，结果见表1。由表1可知，检出限能够满足分析要求。

表1　线性方程、线性范围及检出限

2.6稳定性试验

取同一供试品溶液（产地：甘肃，批号为20150301），分别于0，2，4，8，12，24 h进样，在1.4色谱条件下进样测定，记录烟酸和党参炔苷的色谱峰峰面积，测定结果见表2。由表2可知，烟酸和党参炔苷测定结果的相对标准偏差分别为1.9%，1.0%，说明该样品溶液在24 h内稳定。

表2　稳定性试验结果

2.7重现性试验

精密称取同一批号党参粉末（产地：甘肃；批号：20150301，过450 μm筛）共6份，每份1 g，按1.3方法制备供试品溶液，在1.4色谱条件下进样测定，记录烟酸和党参炔苷的平均质量分数，结果见表3。

表3　重现性试验结果

由表3可知，药材中烟酸和党参炔苷平均质量分数分别为0.181 4，0.347 3 mg/g，测定结果的相对标准偏差分别为1.4%，2.3%，说明该方法重现性良好。

2.8加标回收试验

称取同一批号党参粉末（产地：甘肃，批号为20150301，过450 μm筛）共6份，每份0.5 g，精密称定，分别精密加入适量烟酸和党参炔苷对照品溶液，按1.3方法制备供试品溶液，在1.4色谱条件下测定，结果见表4。由表4可知，烟酸和党参炔苷的平均回收率分别为99.5%和101.1%，测定结果的相对标准偏差分别为1.5%和1.9%（n=6），表明该方法具有较高的准确度和良好的精密度。

表4　党参中烟酸和党参炔苷的加标回收试验结果

2.9样品测定

精密称取8批不同产地和批次的党参药材，按1.3制备供试品溶液，按照1.4色谱条件测定烟酸和党参炔苷的色谱峰面积，计算样品中二者的含量，结果见表5。由表5可知，不同产地和批号的党参中烟酸、党参炔苷含量差异较大，甘肃产党参的烟酸、党参炔苷含量较高。

3　结语

采用100%甲醇超声提取，建立了HPLC法测定党参中烟酸、党参炔苷含量的分析方法。优化了色谱条件，在选择的最佳测试条件下，该方法的线性范围、检出限、精密度、稳定性及重复性均能满足检测要求。该法能快速、准确地测定党参中烟酸、党参炔苷的含量，对于党参的质量控制及开发利用具有重要价值。

表5　党参药材中烟酸和党参炔苷含量测定结果（n=3）

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015版［M］.北京：化学工业出版社，2005∶ 199.

［2］ 贺庆，朱恩圆，王峥涛，等.党参中党参炔苷HPLC分析［J］.中国中药杂志，2005，40（1）∶ 56-58.

［3］ 韩朴生，姜名瑛，徐秋萍，等.党参提取物对大鼠实验性溃疡和胃黏膜防御因子的影响［J］.中药药理与临床，1990，6（1）∶ 19.

［4］ 张壮，韦颖，刘楠，等.党参皂苷对抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用［J］.中国临床康复，2006，10（27）∶ 28.

［5］ 李瑞燕，高建平.党参粗多糖抗S180腹水瘤小鼠肿瘤的初步研究［J］.长治医学院学报，2011，25（2）∶ 94-96.

［6］ 许爱霞，张振明，葛斌，等.党参多糖抗衰老作用机制的实验研究［J］.中国现代应用药学杂志，2006，23（8）∶ 729.

［7］ 冯佩佩，李忠祥，原忠.党参属药用植物化学成分和药理研究进展［J］.沈阳药科大学学报，2012，29（1）∶ 56-57.

［8］ 刘恩荔，秦雪梅.党参研究进展［J］.山西医科大学学报，2002，33（6）∶ 567-569.

［9］ Jingyu He，Na Ma，Shu Zhu，et al. The genus Codonopsis（Campanulaceae）∶ a review of phytoch-emistry，bioactivity and quality control ［J］. J Nat Med，2015，69∶ 1-21.

［10］ 关静，霍艳艳，董春娇.烟酸类药物的研究进展［J］.沈阳医学院学报，2011，13（2）∶ 110-112.

［11］ Carlson L A. Nicotinic acid∶ the broad-spectrum lipid drug. A 50th anniversary review［J］. J Intern Med，2005，258∶ 94-114.

［12］ Taylor A J，Sullenberger L E，Lee H J，et al. Arterial biology for the investigation of the treatment effects of reducing cholesterol（ARBITER） 2∶ A double-blind，placebo-controlled study of extended-release niacin on atherosclerosis progression in secondary prevention patients treated with statins ［J］. Circulation，2004，110∶ 3 512-3 517.

［13］ 宋丹，王峥涛，李隆云，等.党参炔苷对胃溃疡模型大鼠胃黏膜损伤保护作用的研究［J］.中国中医急症，2008，17（7）∶ 963-964.

［14］ Dumlu M U，Gurkan E，Tuzlaci E. Chemical composition and antioxidant activity of Campanula alliariifolia［J］. Nat Prod Res，2008，22（6）∶ 477-482.

［15］ Hong S，Yong Y，Kang K，et al. NF-kB Activation by compounds found in platycodon grandiflorum extract［J］. J Microbiol Biotechnol，2009，19（6）∶ 556-559.

［16］ 段琦梅，梁宗锁，杨东风，等.党参质量评价体系的建立及不同产地党参质量差异性分析［J］.中草药，2012，43（5）∶ 995-999.

［17］ 邹元锋，刘莎，陈兴福，等. RP-HPLC同时测定党参中党参炔苷与苍术内酯Ⅲ［J］.药物分析杂志，2011，31（5）∶ 923-926.

［18］ 邢凤琴，朱恩圆，詹慧清，等.党参中四种有机酸成分的高效毛细管电泳分析［J］. 同济大学学报（医学版）， 2001，22（5）∶ 15-17.

2015年便携分析仪器市场规模为81亿美元

根据一家调查公司最新发布的一项关于便携式分析仪器的市场研究报告显示，2015年该市场的规模为81亿美元，2020年将达到95.5亿美元；2015～2020年间的年均复合增长率为3.3%。

对于食品和环境问题更加关注，低成本、易于操作的便携式分析仪器的实用性不断增强，医疗保健支出费用的日渐增加，这些是驱动便携式分析仪器市场发展的主要因素。

便携式分析仪器市场按照产品、技术和最终用户进行了细分。细分产品市场包括TOC分析仪、溶解氧、滴定仪、折射仪、pH计、光度计、气体分析仪、电导率/电阻率、比色计、热分析仪等。由于pH计广泛应用于化工、医药、生物技术、食品饮料、水测试、石油化工和造纸等行业，其预计将占有最大市场份额，并将以最高的年复合增长率增长。

按照技术进行划分，便携式分析仪器市场可以分为光谱分析、元素分析、热分析和电化学分析等。光谱分析可以进一步子分为X射线荧光（XRF）、近红外光谱（NIR）、拉曼光谱、傅里叶变换红外光谱（FTIR）、激光诱导击穿光谱（LIBS）、离子迁移光谱和光谱成像等。相比其它红外光谱，预计FTIR将是增长最快的，因为它具有更高的精度和分辨率、更短的扫描时间以及更广泛的扫描范围。

便携式分析仪器的最终用户包括本食品饮料工业、制药、生物技术、环境检测、学术和政府机构等。2015年食品饮料行业主宰了便携式分析仪器市场，原因是越来越多的便携式分析仪器应用于食品安全检测领域。

便携式分析仪器的区域性市场分为北美、欧洲、亚太及其他地区。北美地区市场又可进一步细分为美国和加拿大市场。2015年北美占据了这一市场的最大份额，而亚太地区则以最高速度增长。随着亚太地区不断增加对粮食、环境、药品安全的关注，这一地区对便携式分析仪器的需求预计将增长，这将使一些便携分析仪器供应商扩大其在这一地区的市场存在，同样，这将促进该地区便携式分析仪器市场的发展。

（仪器信息网）

Determination of Nicotinic Acid and Lobetyolin in Codonopsis Pilosula by HPLC

Gao Huan， Li Yang， Yan Hui， Li Can， Lyu Qingtao， Rong Rong
（Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Jinan 250355， China）

A HPLC method was established for the determination of nicotinic acid and lobetyolin in Codonopsis pilosula. A Syncronis AQ column （250 mm×4.6 mm，5 μm） was used with acetonitrile （A）-0.2% phosphoric acid solution （B） as the mobile phase at the flow rate of 1 mL/min，the detection wavelength was set at 285 nm and the column temperature was kept at 30℃. The results showed that nicotinic acid and lobetyolin could be separated within 24 min. The mass concentration of nicotinic acid had good linearity with chromatographic peak area in the range of 9.6-57.6 μg/mL（r=0.999 2）， and the detection limit was 0.94 μg/mL，the relative standard deviation of determination results was 1.5%（n=6），the average recovery was 99.5%. The mass concentration of lobetyolin had good linearity with chromatographic peak area in the range of 9.92-59.52 μg/mL （r=0.999 6）， and the detection limit was 0.12 μg/mL，the relative standard deviation of determination results was 1.9%（n=6），the average recovery was 101.1%. The method is convenient，rapid，accurate，which can be applied to the determination of nicotinic acid and lobetyolin in Codonopsis pilosula.

Codonopsis pilosula； nicotinic acid； lobetyolin； HPLC

O657.7

A

1008-6145（2016）03-0016-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.03.004

*科技部“重大新药创制”科技重大专项（2014ZX09509001-001）；山东省高校中医药抗病毒协同创新中心（XTCX2014C01-02）

联系人：容蓉；E-mail∶ rong_sdutcm@hotmail.com

2016-03-25