10种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内毒力及田间防治效果研究

范 昆,付 丽,张 勇,赵金平,曲健禄

(山东省果树研究所,山东 泰安 271000)



10种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内毒力及田间防治效果研究

范 昆,付 丽,张 勇,赵金平,曲健禄*

(山东省果树研究所,山东 泰安 271000)

采用十字交叉法和喷雾法测定了10种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内毒力和田间防效。多菌灵和氟硅唑对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制作用较强,其EC50分别为0.0429 μg/mL和0.0507 μg/mL；其次为苯醚甲环唑和丙环唑,其EC50分别为0.1144 μg/mL和0.1959 μg/mL。采收前田间、贮藏期调查发现,430 g/L戊唑醇悬浮剂3000～4000倍液、250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000倍、400 g/L氟硅唑乳油4000倍、10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500倍、50%多菌灵可湿性粉剂600倍液对苹果轮纹病均具有良好的防治效果，且对苹果树安全。

苹果；杀菌剂;苹果轮纹病;毒力测定;田间药效

全球有80多个国家和地区栽培苹果,苹果已经成为世界上食用最广泛的水果品种之一[1]。近20年来,我国苹果产业发展迅速,无论是种植面积还是总产量,我国都已名列世界第一,然而单位面积产量低于世界平均水平[2]。苹果轮纹病危害是造成我国苹果单产水平不高的重要原因之一[3]。苹果轮纹病(Botryosphaeriadothidea)又名粗皮病、轮纹烂果病,是苹果生产上最常见的一种病害[2],不仅可以危害枝干,引起枝干溃疡,影响结果年限,导致树势衰弱、产量下降,造成严重经济损失,还能造成大量烂果,田间病果率高达70%～80%,且贮藏期可持续发病[4]。近年来苹果轮纹病发病率呈上升趋势,影响果品的产量和质量,造成严重的经济损失。

目前,生产上防治苹果轮纹病仍以化学防治为主,果农防治观念落后,重治轻防,盲目用药、滥用农药的现象比较普遍,造成农残超标、果园生态环境恶化,严重影响了苹果的产量和品质,对出口创汇也造成很大的不良影响,其产值大大降低。为此,本研究选取多种低毒、低残留的杀菌剂于2013、2014年对苹果轮纹病菌进行了室内毒力测定和田间药效试验,以期筛选出防治苹果轮纹病的理想药剂,有效防治该病害,为苹果优质高产提供科学依据。

1　材料与方法

1.1供试菌株

从山东省肥城市安庄村富士果园采集病果,参照Fang[5]的组织分离法,从病果皮部病斑病健交界处切下3 mm×3 mm×1 mm的小块,放入70%酒精消毒30 s,然后将其转入1%升汞消毒1 min,用无菌水清洗3遍后,置于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上。在26 ℃条件下培养5 d后挑取菌落边缘的菌丝进行病原菌的初步纯化,将纯化后的菌株接种在PDA试管斜面中，于4 ℃冰箱中保存、备用。对纯化后的菌丝培养5 d后镜检菌丝、孢子的形态,并进行病原菌鉴定[6-7]。

1.2供试药剂

供试原药:98%戊唑醇原药,江苏常隆化工有限公司;96.4%丙环唑原药,江苏扬农化工集团;92%氟硅唑原药、95.8%苯醚甲环唑原药、97%多菌灵原药,青岛瀚生生物科技股份有限公司;96%异菌脲原药、95%二氰蒽醌原药,江苏禾益化工有限公司;97.5%吡唑醚菌酯原药,巴斯夫欧洲公司;95%甲基硫菌灵原药、97%咪鲜胺原药,山东潍坊润丰化工股份有限公司。

供试制剂:430 g/L戊唑醇悬浮剂,兴农股份有限公司;250 g/L吡唑醚菌酯乳油,巴斯夫欧洲公司;400 g/L氟硅唑乳油,美国杜邦公司;10%苯醚甲环唑水分散粒剂,瑞士先正达作物保护有限公司;50%多菌灵可湿性粉剂,江苏省新沂农药有限公司;70%甲基硫菌灵可湿性粉剂,江苏省新沂农药有限公司;40%二氰蒽醌悬浮剂,陕西韦尔奇作物保护有限公司;250 g/L丙环唑乳油、25%咪鲜胺乳油,江苏辉丰农化股份有限公司;50%异菌脲可湿性粉剂,美国富美实公司。

1.3试验方法

1.3.1含药培养基的配制先将戊唑醇、苯醚甲环唑、异菌脲、吡唑醚菌酯、二氰蒽醌、咪鲜胺原药溶于丙酮中, 用甲醇溶解丙环唑, 用环己酮溶解氟硅唑, 用质量分数1%的盐酸溶解多菌灵、甲基硫菌灵,配成10000 μg/mL的母液,以0.2%的体积分数加入乳化剂Tween-80,于冰箱(4 ℃)中贮藏备用。在测定时,根据培养基的用量,用移液枪吸取一定量的药剂母液，将其加入溶化并冷却至50 ℃左右的培养基中,充分摇匀,配制成含系列浓度药剂的培养基。每个处理重复4次,以不加药剂为对照。

1.3.2苹果轮纹病菌对供试药剂的敏感性测定在PDA平板上培养(26 ℃,黑暗)5 d的菌落边缘打出直径7 mm的菌饼,分别移接到含有戊唑醇、苯醚甲环唑、氟硅唑、异菌脲、吡唑醚菌酯、二氰蒽醌、丙环唑、咪鲜胺、多菌灵、甲基硫菌灵6个梯度浓度(戊唑醇3.0、1.5、0.75、0.375、0.187、0.094 μg/mL;苯醚甲环唑0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0156 μg/mL;氟硅唑1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125 μg/mL;异菌脲10.0、5.0、2.5、1.25、0.625、0.3125 μg/mL;吡唑醚菌酯2.0、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625 μg/mL;二氰蒽醌320.0、160.0、80.0、40.0、20.0、10.0 μg/mL;咪鲜胺4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 μg/mL;多菌灵0.5、0.25、0.125、0.0625、0.032、0.016 μg/mL;丙环唑2.0、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625 μg/mL;甲基硫菌灵0.5、0.25、0.125、0.0625、0.032、0.016 μg/mL)的PDA平板上,置26 ℃暗培养4 d,测定菌落径向线性生长量,确定药剂对菌落生长的抑制率，其计算公式为：抑制生长率(%) = [(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌饼直径)]×100。每个处理(各菌株每个浓度水平)重复4次。通过菌丝生长抑制概率值和药剂浓度对数值之间的线性回归分析,求出各药剂对菌株的有效抑制中浓度(EC50)值[ 8 ]。

用Microsoft Excel 2003、DPS数据处理工作平台对试验数据进行统计分析。

1.3.3田间药效试验试验地设在山东省曲阜市吴村镇。供试苹果品种为短枝金帅,树龄22年,株距×行距=3 m×5 m。试验的果树全程不套袋,保持自然生长状态。苹果轮纹病田间防治试验分别于2013年、2014年的4～8月份进行,于苹果花后7～10 d开始施药,每10～15 d施药1次,共施药8次。连同空白对照，本试验共设17个处理,即:430 g/L戊唑醇悬浮剂3000、4000倍液;250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000、2000倍;400 g/L氟硅唑乳油4000、6000倍;10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500、2500倍;40%二氰蒽醌悬浮剂600倍;250 g/L丙环唑乳油500、800倍;25%咪鲜胺乳油800、1200倍;70%甲基硫菌灵可湿性粉剂700倍;50%多菌灵可湿性粉剂600倍;50%异菌脲可湿性粉剂1500倍。每个处理重复4次，每2株树为1个小区, 随机区组排列。用台湾产WL-ASBC型机动喷雾器对全树均匀喷雾施药,施药量以叶片、果面均匀着药,稍有药滴下淌为度。

1.3.4药效调查及统计分析田间果实发病情况:在第8次(末次)施药后10 d(果实近成熟期)调查树上、树下(落地)的总果数和轮纹病果数,统计烂果率。

贮藏期果实发病情况:在田间果实发病情况调查当日,每树分上、中、下三层,从东、西、南、北、中五个方位随机共采25个果,装入保鲜袋中。每小区50个果混装在一起,每处理共采200个果。在常温下室内存放,于贮藏15、30 d后各调查1次,剔除轮纹病果,统计累计烂果率,计算防治效果[9]。

有关计算公式如下：病果率(%)=[(树上轮纹病果数+落地轮纹病果数)/(树上总果数+落地总果数)]×100；累积病果率(%)=(贮藏期两次调查时剔除的轮纹病果数之和/每小区采果总数)×100；防治效果(%)=[(对照区轮纹病果率-处理区轮纹病果率)/对照区轮纹病果率]×100。

2　结果与分析

2.110种杀菌剂对苹果轮纹病菌的抑制作用

室内毒力测定结果(见表1)表明:供试的10种杀菌剂对苹果轮纹病菌均有一定的毒力,且随着药剂浓度的增加相对抑制率也增加,但不同药剂之间毒力差异较大,对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制作用差异较大。其中多菌灵和氟硅唑对轮纹病菌的抑制作用居前2位，其EC50分别为0.0429 μg/mL和0.0507 μg/mL；其次为苯醚甲环唑和丙环唑,EC50分别为0.1144 μg/mL和0.1959 μg/mL;吡唑醚菌酯、戊唑醇、甲基硫菌灵、咪鲜胺等药剂对轮纹病菌也具有较强的抑制作用,EC50值在0.20～0.30 μg/mL之间;二氰蒽醌的EC50值高于其他9种药剂,其对苹果轮纹病菌的毒力最弱。

表1　10种杀菌剂对苹果轮纹病菌的抑制作用

2.210种杀菌剂对苹果轮纹病的田间防治效果

田间药效试验结果(表2)表明:供试药剂在田间对苹果轮纹病均表现出一定的防效,但不同药剂之间,同种药剂的不同质量浓度之间均表现出一定差异。采收前田间防治效果调查发现,430 g/L戊唑醇悬浮剂3000、4000倍，250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000、2000倍，400 g/L氟硅唑乳油4000、6000倍，10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500、2500倍，250 g/L丙环唑乳油500、800倍，25%咪鲜胺乳油800倍，70%甲基硫菌灵可湿性粉剂700倍，50%多菌灵可湿性粉剂600倍液在田间均表现出较好的防治效果,其中,250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000倍、400 g/L氟硅唑乳油4000倍、10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500倍、50%多菌灵可湿性粉剂600倍液的防治效果均达93.0%以上,与其他供试药剂的防效相比差异显著。苹果在常温下存放30 d后调查发现,430 g/L戊唑醇悬浮剂3000倍、430 g/L戊唑醇悬浮剂 4000倍、250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000倍、400 g/L氟硅唑乳油4000倍、10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500倍、50%多菌灵可湿性粉剂600倍液对苹果轮纹病仍保持较好的防治效果,防效在80.0%以上,显著优于其他药剂的防治效果。

表2　不同杀菌剂对苹果轮纹病的田间防治效果

3　结论与讨论

山东省是全国重要的苹果主产区,当地气候及主要土壤类型适于生产优质苹果；该省同时也是病害发生发展的重点区域，其中苹果轮纹病是当地苹果生产中的主要病害之一。施用化学杀菌剂是目前防治苹果轮纹病的有效措施之一,常用药剂有多菌灵、甲基硫菌灵等内吸性药剂，以及代森锰锌、福美双等保护剂[7]。由于生产上使用的农药品种较为单一,苹果轮纹病菌已经产生了抗药性[10-11]。

本试验研究结果表明：从苹果花后7～10 d开始喷药,戊唑醇、吡唑醚菌酯、氟硅唑、苯醚甲环唑、二氰蒽醌、丙环唑、咪鲜胺、甲基硫菌灵、多菌灵、异菌脲的不同剂型及适宜的浓度均能较好地防治田间和贮藏期的苹果轮纹病，且各药剂在试验浓度范围内对苹果树安全,未见对果树生长发育和果实外观品质有不良影响。因此供试的10种杀菌剂可以应用于苹果轮纹病的防治。

另外，在防治苹果树病害的过程中, 建议将不同作用机制的杀菌剂合理混用或轮换使用,以延缓病原菌抗药性的产生,延长杀菌剂在果树病害管理体系中的使用寿命。

[1] 孙鑫垚.陕西省苹果轮纹病病原菌鉴定与多样性研究[D].杨凌:西北农林科技大学,2010.

[2] 国立耘,李金云,李保华,等.中国苹果枝干轮纹病发生和防治情况[J].植物保护,2009,35(4):120-123.

[3] 李保华,王彩霞,董向丽.我国苹果主要病害研究进展与病害防治中的问题[J].植物保护,2013,39(5):46-54.

[4] 范昆,李晓军,张勇,等.山东省苹果轮纹病菌对三种三唑类杀菌剂的敏感性检测[J].植物保护,2013,39(1):133-136.

[5] 方中达.植病研究方法[M].北京:中国农业出版社,1998.

[6] 陆家云.植物病原真菌学[M].北京:中国农业出版社,2001.

[7] 魏景超.真菌鉴定手册[M].上海:上海科学技术出版社,1979.

[8] 范昆,张雪丹,余闲美,等.无花果炭疽病菌的生物学特性及8种杀菌剂对其抑制作用[J].植物病理学报,2013,43(1):75-81.

[9] 农业部农药检定所.农药田间药效试验准则(一、二)[M].北京:中国标准出版社,2004.

[10] 李晓军,范昆,曲健禄,等.苹果轮纹病菌对多菌灵的敏感性测定[J].果树学报,2009,26(4):516-519.

[11] Yourman L F, Jeffers S N. Resistance to benzimidazole and dicarboximide fungicides in greenhouse isolates ofBotrytiscinerea[J]. Plant Disease, 1999, 83: 569-575.

(责任编辑:黄荣华)

Indoor Toxicities and Field Control Effects of 10 Fungicides toBotryosphaeriadothidea

FAN Kun, FU Li, ZHANG Yong, ZHAO Jin-ping, QU Jian-lu*

(Shandong Institute of Pomology, Taian 271000, China)

The indoor toxicities and field control effects of 10 fungicides againstBotryosphaeriadothideawere determined by crossing method and foliar spray method. Carbendazim and flusilazole had higher inhibitory activities to the mycelial growth ofBotryosphaeriadothidea, and their EC50was 0.0429 μg/mL and 0.0507 μg/mL, respectively. The EC50of difenoconazole and propiconazole was 0.1144 μg/mL and 0.1959 μg/mL, separately. The investigations in field and during storage found that the 3000～4000-fold solution of 430 g/L tebuconazole SC, the 1000-fold solution of 250 g/L pyraclostrobin EC, the 4000-fold solution of 400 g/L flusilazole EC, the 1500-fold solution of 10% difenoconazole WG, and the 600-fold solution of 50% carbendazim WP all had a better control effect againstBotryosphaeriadothidea, and they were safe to apple trees.

Apple; Fungicide;Botryosphaeriadothidea; Toxicity test; Field control effect

2016-05-13

山东省自然科学基金项目(ZR2013CQ040);泰安市科技攻关项目(201540699);国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目(CARS-28);山东省农业科学院青年科研基金项目(2016YQN32);山东省果树研究所所长基金项目。

范昆,女,助理研究员,从事果树病虫害综合防治及有害生物抗药性研究。*通讯作者:曲健禄。

S482.2

A

1001-8581(2016)10-0032-04