局部亚低温联合糖皮质激素对急性睾丸扭转复位后睾丸抗氧化能力与精子活力的影响

朱江 李颖毅 张辉

【摘要】目的：探讨局部亚低温联合糖皮质激素对急性睾丸扭转复位后睾丸抗氧化能力与精子活力的影响。方法：选择2010年1月至2015年3月我院收治的的急性睾丸扭转者80例，按照随机数字法分为两组，各40例，对照组在患者入院后开始口服醋酸地塞米松片，观察组在对照组基础上联合使用局部亚低温处理，比较两组预后SOD、MDA及总抗氧化能力、干预前后两组NO含量及NOS活性，并统计两组干预后精液常规及精子DNA碎片（DFI）指数。结果：干预后，观察组SOD显著高于对照组（P<0.05），而MDA则显著低于对照组（P<0.05），总抗氧化能力以显著高于对照组（P<0.05），干预后观察组NO含量及NOS活性显著低于干预前及干预后对照组（P<0.05），干预后观察组精液中精子密度、精子活动率及精子活力均显著高于对照组（P<0.05），且精子DNA碎片显著少于对照组（P<0.05）。结论：对于急性睾丸扭转者实施局部亚低温联合糖皮质激素处理，能显著提高睾丸抗氧化能力，减轻脂质过氧化反应等缺血缺氧再灌注损伤，减少精子破坏，提高精子活力。

【关键词】局部亚低温；糖皮质激素；复位急性睾丸扭转；抗氧化能力；精子活力

Effect of local mild hypothermia joint sugar temperament hormone on the testicular antioxidant capacity and sperm motility after reset of acute testicular torsionZHU Jiang， LI Yingyi， ZHANG Hui. Department of Urology， Baoji Peoples Hospital， Baoji 721000， Shaanxi， China

【Abstract】Objectives： To investigate the effect of local mild hypothermia joint sugar temperament hormone on the testicular antioxidant capacity and sperm motility after reset of acute testicular torsion. Methods： 80 patients with acute testicular torsion from January 2010 to March 2015 in our hospital were selected and randomized into two groups， each of 40 cases. The control group orally took dexamethasone acetate tablets， and the observation group received local mild hypothermia on its basis. The SOD， MDA and total antioxidant capacity， NO content and NOS activity before and after the intervention were compared to summarize the semen and sperm DNA fragmentation （DFI） index. Results： After the intervention， SOD in the observation group was significantly higher than control group （P<0.05）； MDA was significantly lower than control group （P<0.05）； total antioxidant capacity was significantly higher control group （P<0.05）. After intervention， the NO content and NOS activity was significantly lower than pre-intervention in observation group and otherwise in control group （P<0.05）. After intervention， the semen sperm concentration， sperm motility and sperm motility in observation group was significantly higher than control group （P<0.05）， while sperm DNA fragmentation was significantly less than control group （P<0.05）. Conclusions： Local mild hypothermia joint sugar temperament hormone can significantly improve the testicular antioxidant capacity and reduce the lipid peroxidation and other hypoxia-ischemia-reperfusion injury， thusly reducing sperm damage and improving sperm motility.

【Key words】Local mild hypothermia； Sugar temperament hormone； Reset acute testicular torsion； Antioxidant capacity； Sperm motility

【中图分类号】R697+.22【文献标志码】A

睾丸扭转主要是因为精索发生扭转导致，其可发生于任何年龄阶段，其中急诊科收治的超过25%阴囊方面急诊为睾丸扭转，如未能得到及时救治，需要切除睾丸的比例甚至超过50%[1]。其好发于新生儿期及青春期者，占青春期睾丸急诊的50%以上比例，本病早期极易误诊，已经成为中青年尤其是青春期男性失去睾丸的最主要原因，进而导致男性不育症的发生。临床经验证实[2]，对于怀疑睾丸扭转者甚至对于不能排除诊断者，应及时手术治疗，以最大限度减少睾丸缺血缺氧时间，提高患者预后。尽管对于拟者已经明确尽快实施手术治疗的价值，但部分患者入院后因主观犹豫等，未能及时签署手术和麻醉同意书，以及重要的术前检查，如超声、凝血常规、心电图等亦需要一定时间，为更好的挽救患者病变睾丸，提高治疗效果，临床急需一种在本阶段内更好的减少睾丸缺血缺氧的方法[3]。

地塞米松是一种长效类糖皮质激素，具有抑制炎症反应、降低毛细血管通透性、抑制免疫反应及减轻脂质过氧化反应等作用。以往将其用于急性睾丸扭转患者围术期，具有一定保护作用[4]。但毕竟其为全身用药，无法有效透过血睾屏障。本研究联合局部低温处理，以往研究已经证实，低温能有效降低基础代谢率，减轻机体缺血缺氧再灌注损伤，将其应用于睾丸扭转大鼠，可有效保护睾丸组织，减少生精小管上皮细胞损伤。本院近年对于急性睾丸扭转者实施局部亚低温联合糖气质激素处理，并分析复位后对睾丸抗氧化能力与精子活力的影响。现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2010年1月至2015年3月我院收治的的急性睾丸扭转者80例，所有患者均经术前临床症状，影像学检查拟诊，并经术中所见确诊，纳入标准为年龄18～40岁中青年患者，既往体检无特殊遗传病史、无精神病史，排除合并严重凝血功能障碍，合并严重心、肺、肝、肾功能障碍，合并免疫系统疾病，合并全身结核感染，合并恶性肿瘤及近3个月内使用糖皮质激素者。按照随机数字法分为两组，各40例，其中观察组：年龄18～40岁，平均（26.5±1.4）岁，发病至手术时间1～12h，平均（4.1±1.3）h，发病部位：左侧者16例，右侧者21例，双侧者3例；对照组：年龄18～40岁，平均（25.9±1.3）岁，发病至手术时间1～12h，平均（4.0±1.3）h，发病部位：左侧者15例，右侧者21例，双侧者4例，两组年龄、发病至手术时间及发病部位等差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2方法

对于确诊或高度疑诊者，均尽早在腰硬联合麻醉下实施手术治疗，其中对照组在患者入院后开始口服醋酸地塞米松片（国药集团容生制药有限公司，国药准字H41020096），每次4mg，早晚各1次，连续服用至术后7d。观察组在对照组基础上联合使用局部亚低温处理，将局部稳定控制为30～32℃，实施局部亚低温的时间为患者入院后行术前准备过程及术后1d内，整个过程中避免使用麻醉后镇痛泵，并密切观察患出局部变化情况，了解患处温度、感觉、活动情况及血运情况等变化。

1.3观察指标

所有患者入组前均签署知情同意书，并申报医院伦理委员会批准，比较两组预后SOD、MDA及总抗氧化能力，干预前后两组NO含量及NOS活性，并统计两组干预后精液常规及精子DNA碎片（DFI）指数。

1.4测定方法

抽取患处股静脉血，通过WST法测定血SOD活性，通过TBA法测定血MDA含量，采用FRAP法测定机体股静脉血总抗氧化能力，NO检测使用Griess法，NOS活性测定采用终点比色法进行，以上所有操作均严格按照试剂盒说明书由具有5年以上工作经验的实验室技师进行，精液常规测定标本留取为患者出院时，通过手淫的方法进行收集，其中DFI使用精子DNA碎片检测试剂盒（三明市和众生物技术有限公司 YZB/闽明0030-2013），通过SCD法严格在40倍光镜下进行检测，通过判断大晕环、中晕环及小晕环与无晕环比例判度精子损伤程度，计算精子DNA碎片。

1.5统计学处理

应用SPSS13.0进行，计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间均数的比较使用t检验，组间率的比较采用χ2检验，P<0.05差异有统计学意义。

2结果

2.1两组干预后SOD、MDA及总抗氧化能力比较

干预后，观察组SOD显著高于对照组（P<0.05），而MDA则显著低于对照组（P<0.05），总抗氧化能力以显著高于对照组（P<0.05）。见表1。

2.2干预前后两组NO含量及NOS活性比较

干预前两组NO含量及NOS活性差异无统计学意义（P>0.05），干预后观察组NO含量及NOS活性显著低于干预前及干预后对照组（P<0.05）。见表2。

2.3两组干预后精液常规及精子DNA碎片（DFI）指数比较

干预后观察组精液中精子密度、精子活动率及精子活力均显著高于对照组（P<0.05），且精子DNA碎片显著少于对照组（P<0.05）。见表3。

3讨论

睾丸扭转作为泌尿外科阴囊最常见的急症，其发生扭转后的睾丸将出现严重的缺血缺氧反应，及时对扭转精索进行复位并尽量减少睾丸缺氧性损伤是提高患者预后，减少睾丸切除率及术后继发不育率的关键手段[5]。近年研究已经证实手术睾丸生精功能的损伤与患病时睾丸缺血缺氧时间有关，主要是因长时间的缺血缺氧手术复位后再灌注导致睾丸内活性氧自由基产生过多所致[6]。其中术后睾酮的分泌、睾丸的血液灌注以及精子的成熟均与氧自由基超载有关[7]。

睾丸扭转即使复位，因机体发生的氧化应激反应以及缺血再灌注损伤等均可引起睾丸抗氧化能力的降低和生精功能的损伤。超氧化物歧化酶（SOD）是目前研究最多的一种体内超氧阴离子清除剂，其能迅速有效的清除体内过氧离子及羟基等自由基，对于睾丸扭转复位后因缺血再灌注损伤，导致组织内出现大量的氧或羟自由基，引起SOD的显著下降[8]。丙二醛（MDA）是一种较为常见的组织、细胞受到氧或羟自由基攻击后产物，对于缺血再灌注损伤中，其能间接反映组织损伤程度[9]。针对大鼠睾丸扭转模型的研究证实[10]，低温对于睾丸扭转后的精原细胞具有显著的保护作用，其认为如果睾丸扭转导致缺血时间超过0.5h，通过亚低温处理4h，能保留超过90%曲细精管内的生精上皮进而促使精原细胞成活，如果缺血缺氧时间超过6h，使用低温处理仍能保留约80%的生精上皮，尤其是睾丸内生殖细胞，通过低温处理后显著提高了其对缺血缺氧的耐受力，减少生殖细胞的凋亡。本组发现干预后，观察组SOD显著高于对照组，而MDA则显著低于对照组，同时整体总抗氧化能力显著高于对照组。究其原因可能与低温减少组织、细胞的新陈代谢，提高了对缺血缺氧的耐受性，减少了脂质过氧化反应对组织细胞的损伤有关。

一氧化氮（NO）在组织缺血再灌注损伤中的作用是双重的，一氧化氮合酶则是成和NO所必须的催化剂，两者水平之间具有正相关性。低浓度的NO具有血管张力调节作用，可显著舒张血管，增加局部血流量，当浓度过高时则有明显的细胞毒性作用[11]。对于缺血再灌注损伤中，局部过高的NO水平将大量与活性氧O2-相结合，产生ONOO-，后者则是对睾丸的生精功能有明显的破坏作用，其不但会降低精子活力，而且还会攻击生精上皮细胞DNA，导致生精上皮细胞细胞核的降解而发生凋亡，影响术后生育功能[12]。本组发现干预后观察组NO含量及NOS活性显著低于干预前及干预后对照组，考虑观察组通过低温处理，在低温环境下，睾丸细胞的新陈代谢显著减慢，氧耗量减少[13]，同时ATP能量消耗亦减少，进而氧、羟自由基产生减少，进而减少了脂质过氧化反应导致的机体损伤[14]。精子密度与精子活动率为评价男性生育能力的最重要因素[15]，本研究发现，干预后观察组精液中精子密度、精子活动率及精子活力均显著高于对照组，同时精子DNA碎片显著少于对照组。提示联合低温治疗后，能更好的保护生精管上皮细胞免受脂质过氧化损伤，不至于明显影响精子数量及其活动率。

综上所述，对于急性睾丸扭转者实施局部亚低温联合糖皮质激素处理，能显著提高睾丸抗氧化能力，减轻脂质过氧化反应等缺血缺氧再灌注损伤，减少精子破坏，提高精子活力。

参考文献

[1]寿梦娜，揭芳，张金萍，等.苦碟子注射液对青春前期大鼠睾丸扭转复位健侧睾丸的远期影响.中国现代应用药学，2014，31（2）：141-144.

[2]Yilmaz O， Yesildal C， Malkoc E，et al.Testicular torsion in a patient with Cohen syndrome.Turk J Urol，2015，41（1）：51-52.

[3]林孝坤，吴大洲，姚贤明.红花对大鼠单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸生精功能的保护作用.中华中医药学刊，2014，32（11）：2593-2594.

[4]Almodhen F，Loutochin O， Jednak R，et al.Protective role of hypothermia on ischemia of prepubertal rodent testicle.Urology，2011，77（3）：762-768.

[5]林孝坤，秦乐，谢添纯，等.药物对青春期前大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸生精功能的影响.医学研究杂志，2013，42（1）：104-106.

[6]周益福，倪春超，郑婷婷，等.生脉注射液对不同周龄大鼠睾丸扭转复位后睾丸损伤影响的研究.中华男科学杂志，2011，17（2）：185-188.

[7]周先明，李庆文，陈志军，等.睾丸扭转13例早期诊治分析.蚌埠医学院学报，2011，36（2）：145-149.

[8]李惠长，翁吴斌，刘昌明，等.低温联合地塞米松对大鼠睾丸扭转复位后ICAM1表达的影响及生精功能的保护作用.中华男科学杂志，2014，20（7）：618-623.

[9]Power RE， Scanlon R， Kay EW，et al.Long-term protective effects of hypothermia on reperfusion injury post-testicular torsion.Scand J Urol Nephrol，2003，37（6）：456-460.

[10]王为，黄浩，黎丽茜，等.二硫化碳对大鼠睾丸组织氧化损伤及P53调控细胞凋亡的影响.华中科技大学学报（医学版），2015，44（4）：377-382.

[11]Gune

瘙 塂 M， Umul M， Altok M.The authors reply： Predictive role of hematologic parameters in testicular torsion.Korean J Urol，2015，56（8）：603.

[12]曹朴，贾瑞鹏.睾丸扭转与缺血再灌注.中华医学杂志，2011，91（6）：426-428.

[13]Haj M， Shasha SM， Loberant N，et al.Effect of external scrotal cooling on the viability of the testis with torsion in rats.Eur Surg Res，2007，39（3）：160-169.

[14]Kanter M， Aktas C， Erboga M.Heat stress decreases testicular germ cell proliferation and increases apoptosis in short term： an immunohistochemical and ultrastructural study.Toxicol Ind Health，2013，29（2）：99-113.

[15]李勉洲，贾月峰，曹廷帅，等.精索静脉曲张病人精子DNA损伤与精浆蛋白的表达.青岛大学医学院学报，2015，51（3）：274-280.