多种肿瘤标志物联合前列腺特异性抗原检测在前列腺癌诊断中的价值

翟玉普 闫成全

【摘要】目的：探讨多种肿瘤标志物联合前列腺特异性抗原检测在前列腺癌诊断中的临床价值。方法：选取我院2013年4月到2014年9月的400例血清标本。采用酶联免疫吸附测定法检测所有患者的血清前列腺特异性抗原水平，检测抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因2的水平。对各个肿瘤标志物在前列腺癌患者的血清特异性、敏感性、阳性表达率进行计算。随机选取抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因的阳性表达血清，采用蛋白质印迹方法验证。采用Luminex液相芯片法联合前列腺特异性抗原检测和抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因进行检测所有的血清标本。结果：400例测试者的血清前列腺特异性抗原检测水平：256例<4μg/L，91例4～10μg/L，53例>10μg/L。4种肿瘤标志物在150例前列腺癌患者血清中表达阳性，抗原家族成员1b为69例（46.0%）、滑膜肉瘤x断裂点基因2 52例（34.7%）、α甲基酰基辅酶A消旋酶41例（27.3%）、蛋白激酶A锚定蛋白4 65例（43.3%）。4种标志物联合前列腺特异性抗原检测的曲线下面积为0.878；单一前列腺特异性抗原检测的敏感性为61.0%、特异性分别为45.1%，联合检测的敏感性为81.0%、特异性分别为83.1%。结论：相对于较为单一的前列腺特异性抗原检测，抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因2联合前列腺特异性抗原检测，可以显著增强前列腺癌诊断的特异性和敏感性，联合检测的诊断价值非常高，具有临床价值意义，可以大力推广。

【关键词】肿瘤标志物；前列腺特异性抗原；前列腺癌

Multiple tumor markers and prostate specific antigen detection in the diagnosis of prostate cancerZHAI Yupu1， YAN Chengquan2△. 1. Surgery Department， Fengnan District Traditional Chinese Medicine Hospital， Tangshan 063000， Hebei， China； 2. Urology Department， Tangshan Gongren Hospital， Tangshan 063000， Hebei， China

【Abstract】Objectives： To discuss the clinical value of joint prostate specific antigen detection and multiple tumor markers in the diagnosis of prostate cancer. Methods：400 cases of serum specimens in our hospital from April 2013 to September 2014 were chosen， and enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the serum prostate specific antigen levels， levels of four kinds of tumor markers i.e. antigen 1b， protein kinase A anchor protein 4， alpha methyl acyl coenzyme A racemase and synovial sarcoma breaking point x gene level 2. The specificity， sensitivity and positive expression rate of each tumor marker in the serum of patients with prostate cancer was calculated and the positive expressed serum was randomly chosen to validate through protein imprinting method. Luminex liquid chip method combined column gland specific antigen detection and members of the family of antigen 1 b， protein kinase A anchor protein 4， alpha methyl acyl coenzyme A racemase， synovial sarcoma breaking point x gene testing was adopted to test all serum samples. Results：In terms of serum prostate specific antigen levels： 256 cases < 4 mug/L， 91 cases between 4-10 mu g/L and 53 cases > 10 mu g/L. Four kinds of tumor markers had positively expression in serum of 150 patients， members of the family of antigen 1 b in 69 cases （46.0%）， synovial sarcoma breaking point x gene 2 in 52 cases （34.7%）， alpha methyl acyl coenzyme A racemase in 41 cases （27.3%） and protein kinase A anchor protein 4 in 65 cases （43.3%）. Area under the curve of four markers joint prostate specific antigen detection was 0.878. The sensitivity and specificity of single prostate specific antigen detection was 61.0% and 45.1%， while that of joint detection was 81.0% and 83.1% respectively. Conclusions： Relative to the prostate specific antigen detection， joint detection can significantly enhance the specificity and sensitivity of the diagnosis of prostate cancer， which should be promoted.

【Key words】Multiple tumor markers； Prostate specific antigen； Prostate cancer

【中图分类号】R737.25【文献标志码】A

在现代临床研究治疗中，只是在前列腺癌患者血清中表达的肿瘤相关抗原就是前列腺癌相关抗原，前列腺癌相关抗原一般不在健康人群或者是良性前列腺疾病患者的血清中进行表达[1]。权威资料显示，美国学者采用美国人群血清得以筛选出食管鳞状细胞癌抗原、X抗原家族成员1b、晶状体上皮源性生长因子、α甲基酰基辅酶A消旋酶、蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子、滑膜肉瘤x断裂点基因2等前列腺癌相关抗原在前列腺癌患者的血清中具有高表达，采用实验证明和单一的前列腺特异性抗原检测相比较，前列腺特异性抗原检测联合以上食管鳞状细胞癌抗原、X抗原家族成员1b、晶状体上皮源性生长因子、α甲基酰基辅酶A消旋酶、蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子、滑膜肉瘤x断裂点基因2等等前列腺癌相关抗原可以显著增强美国人群前列腺癌检测的特异性和敏感性[2-4]。我院依据国外的研究资料[5]结合前期的研究，在上述的6种前列腺癌相关抗原以及蛋白激酶A锚定蛋白4、高迁移率族蛋白B1、癌胚抗原等人群的血清表达的基础之上，更加一步的筛选出抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因2等4种肿瘤标志物来作为前列腺癌相关抗原的新组合，探讨抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因2和前列腺特异性抗原检测前列腺癌诊断特异性和敏感性等方面的临床价值。

1对象和方法

1.1研究对象

选取我院2013年4月到2014年9月的400例血清标本。本次实验研究已经经过我院伦理委员会批准，所有人都已经签署知情同意书，通过肛门指诊、影像学检查（经直肠超声、CT、MRI）、血清学检查（前列腺特异性抗原，PSA）和组织病理学检查等方法，对400例血清标本进行诊断，根据分为三组，即前列腺癌组、前列腺增生组、健康组。其中，在我院接受治疗的150例前列腺癌患者，年龄为45～83岁，平均年龄为（69±2.3）岁，本组患者都经过前列腺穿刺活检得以确诊，并且没有进行手术治疗。前列腺增生患者108例，年龄为55～87岁，平均年龄为（70±2.4）岁，本组患者都经过临床诊断得以确诊，并且没有进行手术治疗。健康男性患者142例，年龄为24～51岁，平均年龄为（39±1.6）岁，本组患者都经过临床诊断，没有前列腺相关疾病且都没有肿瘤。所有患者年龄和病程以及病理无明显差异，不具备统计学意义（P>0.05），因此具有可比性。

1.2检测仪器和试剂

抗原家族成员1b（FS-Kb-0312）、蛋白激酶A锚定蛋白4（Anti-AKAP6）、α甲基酰基辅酶A消旋酶（Ab-00754）、滑膜肉瘤x断裂点基因2的试剂都购买自美国三塔古驰公司，前列腺特异性抗原检测试剂盒（美国Anogen公司，Human prostate specific antigen， PSA ELISA Kit，96T/48T），少部分的Luminex液相芯片微球（中国无锡伊琳生物技术公司，Luminex 200），还有一部分的Luminex液相芯片微球以及Luminex液相芯片试剂盒（美国三塔古驰公司，Luminex 100）[6，7]。

酶联免疫吸附测定法检测抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因2和前列腺特异性抗原检测400例血清标本中的表达水平。以96孔板采用1：1000浓度包被抗体。进行洗版后加入酶标板稳定液200μg，放置37℃温度下60min。将孔内的液体丢弃，每个孔内注入1：5稀释的血清样本，放置37℃温度下90min。洗板后加入羊抗兔lgG抗体，放置37℃温度下60min。洗板后加入终止液和显色液，最后于酶标仪器上进行读数，以健康人群95%的数据来确定抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因2的正常值的范围，血清特异性、敏感性、阳性表达率进行计算[8]。

随机选取抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因的阳性表达血清，采用蛋白质印迹方法验证[9]。对阳性血清标本采用1：5的浓度进行稀释，采用电泳进行分离和转膜，羊抗兔lgG抗体进行单克隆抗体孵育，对带辣根的过氧化物酶的羊抗兔lgG抗体进行再次孵育，采用阴性表达血清来作为参照[10，11]。采用Luminex液相芯片法联合列腺特异性抗原检测和抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因2进行检测所有的血清标本[11]。并对三组癌胚抗原（CEA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）水平进行检测和比较。

1.3统计学分析

本次研究的400例血清标本的所有数据以及研究所得资料均采用SPSS18.0数据处理软件进行处理分析，其中计量数据资料采用t进行检验，记录方式为（±s），计数数据资料采用卡方进行检验，若P<0.05，数据具有统计学意义。

2结果

2.1400例测试者的血清前列腺特异性抗原检测水平分析

经过检测，256例<4μg/L，91例处于4～10μg/L，53例>10μg/L。4种肿瘤标志物在150例前列腺癌患者血清中表达阳性，抗原家族成员1b为69例（46.0%）、滑膜肉瘤x断裂点基因2 52例（34.7%）、α甲基酰基辅酶A消旋酶41例（27.3%）、蛋白激酶A锚定蛋白4 65例（43.3%）。4种标志物联合前列腺特异性抗原检测的曲线下面积为0.878；单一前列腺特异性抗原检测的敏感性为61.0%、特异性分别为45.1%，联合检测的敏感性为81.0%、特异性分别为83.1%。

2.2三组患者血清肿瘤标志物水平的比较

经过方差分析，前列腺癌组、前列腺增生组、健康组三组之间血清肿瘤标志物水平差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3讨论

前列腺癌作为男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤，严重影响患者生活质量，在全球癌症发病率中居第5位，根据WHO流行病学数据显示，前列腺癌在男性恶性肿瘤中占男性全部癌症发病例数的14%，在世界范围内分布具有显著性差异，其发病率高地区约为低发病地区的20倍。我国是前列腺癌的发病率和死亡率较低的国家之一，但前列腺癌在我国男性癌症发病率呈逐渐上升趋势，近十年来，我国年均增加12%左右患者，这种趋势持续10年下去会超过膀胱癌发病率，成为严重影响我国男性泌尿系统的重要疾病，应引起充分重视，提高治疗疗效。虽然我国现在前列腺癌发病率和西方欧美国家比起来尚具有一定差距，但应在有效范围内引起足够重视，尽量做到二级预防水平，即早发现、早诊断、早治疗。临床研究治疗中，被大范围接受的前列腺癌常规的检测项目就是前列腺特异性抗原检测[12]。对男性人群进行前列腺特异性抗原检测的目的是为了可以早发现患者是否为前列腺癌，增强前列腺癌的诊断率，达到降低病死率的作用[13]。前列腺相关抗原是当下研究前列腺的重点项目[14]。和传统的酶联免疫吸附测定方法对比，Luminex检测技术敏感性高、稳定性强、具有重复性，并且检测的血清也比较少[15]。

总的来说，相对于较为单一的前列腺特异性抗原检测，抗原家族成员1b、蛋白激酶A锚定蛋白4、α甲基酰基辅酶A消旋酶、滑膜肉瘤x断裂点基因联合前列腺特异性抗原检测，可以显著增强前列腺癌诊断的特异性和敏感性，联合检测的诊断价值非常高，且同时检测血清CEA、NSE、CYFRA21-1 具有较高的敏感性和特异性，具有临床价值意义，可以大力推广。

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