天麻素在不同溶剂中稳定性的对比

杨雪萍，刘　卫，孙　昕，袁红英

天麻素在不同溶剂中稳定性的对比

杨雪萍，刘卫，孙昕，袁红英＊

目的考察天麻素在不同溶剂中的稳定性。方法利用HPLC法，对天麻素在稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈、水、乙腈-0.5%磷酸（3∶97）溶液中的稳定性进行分析。对在不同溶剂中天麻素及生成物的保留时间、峰面积积分值进行考察比较。结果天麻素在各溶剂中稳定性有较大差别，在水、乙腈-0.5%磷酸（3∶97）较稳定；在稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈中不稳定，分别不同程度的发生可逆反应，转化成其他物质。结论天麻素在50%乙醇、50%甲醇、50%乙腈中不稳定，用以上溶剂作为天麻素提取溶剂时，需蒸干后以水复溶解。

天麻素；溶剂提取；稳定性

DOI:10.14172/j.issn1671-4008.2016.10.021

天麻素可恢复大脑皮质兴奋与抑制过程的平衡失调［1］，具有镇静、安眠和镇痛等中枢抑制作用。被用于治疗神经衰弱及其综合征和血管神经性头痛等症（如偏头痛、枕骨大神经痛等），亦可用于脑外伤性综合征、眩晕病如梅尼埃病、药性眩晕、外伤性眩晕、突发性耳聋、前庭神经元炎、椎基底动脉供血不足等。目前常用剂型有片剂和注射剂，为临床常用药物。

天麻素可溶于水、乙醇、甲醇等溶剂［2，3］，试验中常利用甲醇、乙醇、乙腈、水等作为溶剂制备天麻素供试品。在含量测定中发现天麻素以甲醇、乙醇、乙腈等为溶剂时，在220 nm波长下［4］，高效液相色谱图中天麻素保留时间附近有未知干扰峰出现，影响天麻素的含量测定。为此对天麻素在以上溶剂中的稳定性进行考察。

1　材料与方法

1.1材料与仪器天麻素对照品（购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用110807-200205）；试验所用甲醇（天津市永大化学试剂有限公司）、乙腈（天津市科密欧化学试剂有限公司）均为色谱纯，乙醇（天津市百世化工有限公司）、磷酸（天津市化学试剂六厂）均为分析纯，水为纯水。安捷伦1200高效液相色谱仪 （四元泵、自动进样），VWD检测器，超声清洗器（TCQ-25型），电子天平（AE-240型）

1.2实验方法

1.2.1色谱条件及系统适应性［5，6］以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为流动相；检测波长为220 nm。

1.2.2供试品溶液制备取天麻素对照品适量5份，精密称定，分别加乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）、稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈、水制成每1 ml含50 μg的溶液，备用。分别精密量取10 ml稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈作为溶剂的天麻素对照品溶液，于沸水浴上蒸干，再以水为溶剂分别转移至10 ml量瓶，加水至刻度，摇匀，备用。

2　结果

2.1以稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈为溶剂的色谱峰对照考察在相同色谱条件下稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈作为溶剂的天麻素对照品分别产生保留时间不同的两种物质。因不能确定峰的归属，根据保留时间将其命名为峰a、峰b（图1）。

天麻素在以上三种溶剂中产生的物质的保留时间、峰面积积分值及峰面积积分值之和与浓度的比值均有较大差异。见表1。

图 1　稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈为溶剂的天麻素对照品色谱图

表 1　以稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈为溶剂的色谱峰a、b的保留时间及峰面积积分值

2.2以水、乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为溶剂的色谱峰对照考察以水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）作为溶剂的天麻素对照品，在相同色谱条件下，均只有一个色谱峰，但保留时间不同。见图2。

图 2　以水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为溶剂的天麻素对照品色谱图

以水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为溶剂的天麻素，在相同色谱条件下保留时间不同，但峰面积积分值与天麻素对照品浓度比值相近。见表2。

表 2　以水、乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为溶剂天麻素的保留时间及峰面积积分值

2.3将对照品溶液蒸干复溶前后色谱峰对照考察精密量取蒸干后的水复溶溶液注入高效液相色谱仪［7］，对色谱图进行观察并对含量进行测定。三份以水为溶剂复溶后的溶液，在220 nm处均只有一个色谱峰，可与天麻素对照品相对应，未见其他色谱峰出现。以水为溶剂复溶后天麻素保留时间与以水为溶剂的对照品一致，峰面积积分值亦与以水为溶剂的对照品相差不大。见表3。

2.4在水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）中稳定性的考察［8］取以水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为溶剂的天麻素对照品溶液，标记为1、2，分别测定上述两种对照品溶液放置0、4、8、12、24 h的峰面积积分值。由结果可知，以水为溶剂天麻素对照品溶液峰面积积分值平均值为8808.64，RSD=0.96%，以乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）为溶剂峰面积积分值平均值为8122.05，RSD=0.91%，表明天麻素在水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）中24 h内均稳定。见表4。

表 3　以水为溶剂复溶后天麻素的保留时间及峰面积积分值

编号　0 h　4 h　8 h　12 h　24 h 1　8786.63　8925.32　8717.19　8752.34　8861.71 2　8162.33　8004.75　8177.36　8171.64　8094.17

3　讨论

根据图1、表1，在稀乙醇溶液中，色谱峰a、b的峰面积积分值相当；在50%甲醇溶液中，色谱峰a的峰面积积分值小于色谱峰b；在50%乙腈溶液中，色谱峰a的峰面积积分值大于色谱峰b。根据在以上三种不同溶剂中天麻素色谱峰a、b的保留时间，天麻素在不同溶剂中的存在形式有较大差异。在以上三种不同溶剂中的天麻素的色谱峰，峰a的保留时间有较大差异、峰b的保留时间相近。根据以上三种不同溶剂中天麻素的色谱峰a、b的峰面积积分值及色谱峰a、b峰面积积分值之和与天麻素对照品浓度的比值，天麻素在不同溶剂中存在的形式差异较大。根据图2、表2，天麻素在水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）中，在220 nm处只有一个吸收峰存在，没有在此处有吸收的其他物质生成。天麻素在相同的色谱条件下，以不同的溶剂溶解保留时间有较大差异。峰面积积分值差别不大。根据表3，天麻素的稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈溶液，蒸干后以水为溶剂复溶，其天麻素保留时间及峰面积积分值均无大的变化，220 nm检测，未产生除天麻素以外的色谱峰。根据表4，天麻素在水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）中，24 h内r值均小于1，稳定性良好。

天麻素在稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈三种不同溶剂中的存在形式发生变化，且各不相同。分析原因可能是天麻素与以上三种溶剂发生不同程度的反应生成了不同的物质［9］。在对上述溶液蒸干，以水为溶剂复溶后，进行高相液相检测，检测波长为220 nm时，均只有一个与天麻素对照品相对应的色谱峰，未见有其他色谱峰出现，提示天麻素在稀乙醇、50%甲醇、50%乙腈中发生的反应是可逆的。在水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）中，天麻素虽然保留时间不同，但未反应生成其他物质，根据稳定性考察结果，天麻素在水和乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）中，24 h内稳定性良好。天麻素测定过程中为减少杂质干扰，可能需要选择甲醇、乙醇等溶剂提取制备供试品溶液。可将供试品溶液蒸干以水或乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）复溶的方法，避免天麻素与甲醇、乙醇等溶剂的可逆反应对含量造成的影响。

［1］刘卫，王中师，宋书伟，等.钩藤总碱与天麻素联用对自发性高血压大鼠血压和血压变异性的影响［J］.中华高血压杂志，2012，20（6）：570-574.

［2］国家药典委员会.中国药典2015年版：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2015.

［3］刘玉红，易进海，陈燕，等.RH-HPLC法测定天麻药材中游离天麻素和总天麻素的含量［J］.药物分析杂志，2010，30（1）：30-32.

［4］吕允凤.微透析和高效液相色谱法测定大鼠脑内天麻素及天麻苷元含量［J］.实用药物与临床，2014，17（3）：326-329.

［5］国家药典委员会.中国药典2015年版：四部［M］.北京：中国医药科技出版社，2015.

［6］陈超，郭建明.高效液相色谱法测定注射用天麻素的含量和有关物质［J］.海峡药学，2011，23（12）：81-83.

［7］李晓琦，张光霁，申力，等.高效液相色谱法研究天麻素的理化性质及溶液稳定性［J］.中华中医药杂志，2014，29（3）：851-854.

［8］张丽，周政政，杨德智，等.HPLC法对天麻素纯度标准物质的定值与不确定度研究［J］.中国药师，2014，10（21）：92-94.

［9］李述智.高效液相色谱法测定天麻素注射液含量及有关物质［J］.广州化工，2014，42（15）：158-161.

［2016-04-12收稿，2016-05-10修回］［本文编辑：刘一洋］

Research on stability of Gastrodin in different solvents

YANG Xue-ping①，LIU Wei，SUN Xin，et al.①Department of Pharmacy，the Pepole's Hospital of Fushan District，Yantai，Shandong 265500，China

ObjectiveTo investigate the stability of gastrodin in different solvents.MethodsHPLC method was used to analyse the stability of gastrodin's in 50%ethanol，50%methanol，50%methyl cyanides，water and methyl cyanides-0.5%phosphoric acid.Then the retention time and peak area of gastrodin in different solvents were compared.ResultsThere were great differences in stability of gastrodin in different solvents.In water and methyl cyanides-0.5%phosphoric acid no new substance was formed.But some transformed to other new substances in 50%ethanol，50%methanol，50%methyl cyanides.ConclusionGastrodin is of instability in 50%ethanol，50%methanol，50%methyl cyanides.If using those as solvent，it should be evaporated and dissolved by water.

Gastrodin；Extraction solvent；Stability

R917

A

265500山东烟台，烟台市福山区人民医院（杨雪萍）；271000山东泰安，解放军88医院药剂科（刘卫，孙昕，袁红英）

袁红英，Email：tayuanhongying@163.com