济南地区946例抗核抗体检测结果的临床分析

索淑会，崔海荣，闵　彦，孙志玉，胡成进

济南地区946例抗核抗体检测结果的临床分析

索淑会，崔海荣，闵彦，孙志玉，胡成进＊

目的探讨济南地区临床就诊患者自身抗体的阳性分布情况及在自身免疫病中的临床意义。方法采集济南军区总医院检测自身抗体标本946例。采用间接免疫荧光法（IIF）对抗核抗体（ANA）进行初筛试验，再采用免疫线性印迹法（LIA）检测抗核抗体谱（ANAs）进行确证试验。结果女性自身抗体的阳性率比男性高；ANA核型以核颗粒型、核均质型、胞质颗粒型及着丝点型较多；ANAs结果中以抗Ro-52抗体、抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、ACA、AMA-M2较多。结论女性自身免疫病发病率较高。ANA与ANAs的联合检测可为自身免疫病的诊疗提供更全面的依据。

间接荧光抗体技术；抗核抗体；自身免疫病

DOI:10.14172/j.issn1671-4008.2016.10.006

近年来，自身免疫病（autoimmune diease，AID）的发生率呈明显上升趋势，其总体发生率占世界人口的3%～5%。早期诊断和及时治疗能有效地控制病情的发展，保护器官功能，改善患者的生活质量［1］。自身抗体是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，血液中存在高效价的自身抗体是自身免疫病的重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体（谱）。自身抗体检测在自身免疫病的诊断、治疗、病情监测及早期预防过程中发挥越来越重要的作用。目前国内外检测自身抗体的常用方法有以下三种：（1）间接免疫荧光法（IIF）检测抗核抗体（ANA）；（2）线性免疫印迹法（LIA）检测抗核抗体谱（ANAs）；（3）酶联免疫法（ELISA）定量检测特异性抗体。其中，IIF法用于自身免疫病的初筛。LIA检测ANAs，有助于进一步检测特异性抗体。ELISA可以定量检测特异性抗体的含量，以便于监测病情的变化［2］。由于遗传基因、饮食结构、环境因素等方面的不同，造成ANA在不同的人群中阳性率有所差异［3］。为了深入了解济南地区自身抗体的分布情况和特点，笔者收集2015年1月—2016年5月门诊和住院自身抗体检测结果，针对ANA及ANAs的结果进行回顾性分析，以了解自身抗体在临床就诊者的分布及其相关临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2015年1月—2016年5月济南军区总医院门诊和住院检测自身抗体的患者946例；男368例，年龄1～99岁；女578例，年龄1～99岁。在946例ANA检测中，有423例患者同时做ANAs；男170例，女253例。均使用BD公司生产的含有分离胶+促凝剂真空采血管，采集患者5 ml全血，分离血清。

1.2方法（1）IIF检测。基质片购自德国欧蒙医学实验诊断公司。全自动间接免疫荧光和酶联免疫分析系统QuantaLyser购自美国INOVA公司。Quanta Lyser将标本自动稀释加样（同时设阴、阳对照）、孵育、清洗、加入荧光标记二抗、孵育、清洗。最后人工加甘油封片在欧蒙荧光显微镜下判读结果。ANA≥1∶100为阳性。（2）LIA检测ANAs。免疫印迹条（以下简称：膜条）试剂盒及全自动免疫印迹分析仪EuroBlotMasterⅡ购自德国欧蒙医学实验诊断公司。免疫印迹条包被的特异性抗原包括：nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、着丝点蛋白 B（CENP B）、增殖细胞核抗原（PCNA）、双链DNA （dsDNA）、核小体 （Nukleosomen）、组蛋白（Histone）、核糖体P蛋白（Rib.P-Prot.）、线粒体-M2（AMA-M2）。免疫印迹分析仪将稀释血清（稀释度：1∶100）与膜条温育30 min；洗涤3次（5 min/次）；加入1.5 ml酶标记的抗人IgG，温育30 min；洗涤3次（5 min/次）；加入底物15 min；蒸馏水清洗膜条终止反应。采用配套软件EUROBlotCamera进行结果扫描分析。结果判读标准：0～5为阴性（-）；6～10为可疑；11～25为弱阳性；26～50为阳性 （+）；51～256为强阳性（+++）。

1.3统计学分析采用SPSS for Windows 13.0软件进行统计学分析。资料的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1946例患者的自身抗体总阳性率在946例患者中，IIF检测ANA阳性患者为203例，阳性率为21.5% （203/946）。其中男性ANA阳性患者42例，阳性率11.4%（42/368），女性患者ANA阳性161例，阳性率为27.9%（161/578），两组差异有统计学意义（χ2=36.06，P＜0.005）。在946例患者中有593例患者同时检测ANAs，ANAs阳性患者81例，阳性率为13.7%（81/593）。男性患者170例，ANAs阳性12例，阳性率7.06%（12/170），女性患者423例，ANAs阳性69例，阳性率16.31%（69/423），两组差异有统计学意义（χ2=6.938，P＜0.01）。

2.2ANA检测阳性标本核型分析细胞核颗粒型91例、细胞核均质型45例、胞质颗粒型33例、混合核型51例、着丝点型17例、核膜型4例、核点型4例、核仁型5例、少见核型2例。结果见图1。

2.3特异性抗核抗体阳性率分布15种特异性抗体在就诊人群中阳性率有差异，其中抗Ro-52抗体、抗SS-A抗体、抗SS-B抗体阳性率最高，阳性率分别为11.58%、8.98%、4.49%。抗Jo-1抗体最低。结果见图2。

图 1　抗核抗体核型分布情况

图 2　抗核抗体谱中特异性自身抗体阳性率分布

3　讨论

自身抗体对自身免疫病的诊断及鉴别诊断，病情评估与监测以及疾病预警都起到重要作用［4］。该研究对济南地区946例自身抗体的检测结果进行回顾性分析，ANA阳性率为21.5%。罗雯斌等对浙江省舟山海岛地区11578例自身抗体的检测结果进行回顾性分析，ANA阳性率为16.3%［5］。而周仁芳等对2004年—2008年到北京协和医院就诊患者102651例的ANA进行回顾性分析时，ANA阳性率为49%［6］。该研究得到的ANA阳性率高于罗雯斌等的研究，低于周仁芳等的研究。笔者认为结果的差异可能有三点原因：（1）周仁芳等研究的就诊人群中自身免疫病患者比例较高，而且是大样本分析。（2）与效价判断的主观因素有关。目前国内对ANA阳性判读还未统一标准和标准化报告程序，是造成各地ANA阳性率产生差异的重要因素。（3）与遗传基因、饮食结构、环境因素有关。罗雯斌等人的研究是南方人群，且在海岛生活的比例较大，这种遗传、饮食以及环境因素可能对自身免疫病发病率产生一定的影响。

该研究分析表明，女性ANA阳性率明显高于男性阳性率（27.9%/11.4%）。该研究结果与周仁芳及罗雯斌的研究具有一致性。值得注意的是，老年女性体内可能会产生生理性自身抗体，这种自身抗体不会引起自身免疫病，会导致老年女性ANA阳性，但是ANAs阴性［7］。女性ANA阳性率较高的原因可能与女性遗传和激素水平有关。研究表明，女性的雌激素水平与自身免疫病的发生具有重要联系。青春期女性及更年期女性是自身免疫病的高发人群。青春期女性的雌激素由低变高，而更年期的女性雌激素水平由高变低［8］。笔者认为，雌激素对自身免疫病的发生具有一定影响，但应该还有别的因素与雌激素一起，造成了自身免疫病在女性的高发病率。这种其他因素的找寻，可以最大程度使女性规避自身免疫病的发病风险。

研究结果显示，抗核抗体的核型以核颗粒型最高、其次是核均质型、胞质颗粒型及细胞核着丝点型。15项特异性自身抗体检测中，抗Ro-52抗体、抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、ACA、抗线粒体抗体-M2（AMA-M2）多见。核颗粒型分为核粗颗粒型和核细颗粒型。核细颗粒型的荧光模型常见于抗SS-A抗体、抗SS-B抗体，该抗体主要见于原发性干燥综合征（pSS），也可见于系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、原发性硬化性胆管炎（PBC）及多发性肌炎（PM）等患者中。核粗颗粒的荧光模型常见于抗Sm抗体、抗nRNP抗体。抗Sm抗体对SLE的诊断有较高的诊断特异性，抗nRNP抗体特别是U1-nRNP抗体对结缔组织病的诊断及鉴别诊断具有重要的临床意义。核均质型的荧光模型常见于抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体（AHA）或者抗核小体（ANuA）等。抗dsDNA主要见于SLE患者；AHA可以在多种结缔组织病中出现，特别在药物性狼疮（DIL）患者中阳性率较高；ANuA主要见于SLE患者，并且与狼疮肾有一定的相关性。细胞核着丝点型的荧光模型见于抗着丝点抗体（ACA）。该抗体是系统性硬化症（SSc）的亚型CREST综合征的特异性抗体。ACA还见于PBC、SLE、RA、SS、关节痛等自身免疫病。胞质颗粒型的荧光模型见于抗线粒体抗体（AMA）。AMA存在若干亚型（M1-M9）。其中，M2对PBC的诊断及鉴别诊断有很高的特异性。AMA也可以出现在某些感染性疾病、结缔组织病、药物诱导性疾病及急性肝功能损伤等患者中［2，9］。研究对ANA核型检出的频次与相应自身免疫病的高发病率呈正相关，ANAs与ANA结果具有高度一致性。本组研究与周仁芳等的研究具有一致性。周仁芳对协和医院自身免疫病患者荧光模式进行回顾性分析得出结论：单一荧光模式以颗粒型和均质型为主，混合荧光模式以颗粒/均质型为主。AID组中的SLE、SS、RA、PM/DM（多肌炎/皮肌炎）患者单一荧光模式以颗粒型为主，PBC患者以核膜型、着丝点型为主。不同的自身免疫病可能有相同的核型，同一种自身免疫病也可能有不同的核型。高滴度的抗核抗体对自身免疫病的诊断具有重要意义［6］。抗核抗体的结果要结合临床症状来分析。一般而言，高滴度的抗核抗体伴随着自身免疫病；也有极少数个体，具有高滴度的抗核抗体，但却没有任何临床症状，这样的患者不一定是自身免疫病的患者；也有一部分自身免疫病的患者，具有临床症状，但是ANA是阴性的。周仁芳等在另一项研究中进行了ANA筛查试验与ANAs确证试验的相关性研究。结果表明，500例检测自身抗体的试验中，485例患者ANA与ANAs结果具有一致性，有15例仅有ANAs特异性抗体阳性，而ANA阴性。这15例中，有8例是临床确诊的自身免疫病患者。所以，临床检测中先以ANA进行筛查，再进行ANAs特异性抗体的确证试验。但是，对于临床疑似自身免疫病的患者，无论ANA初筛试验阳性与否，均需进行各种针对特异性抗体的确证试验；各种特异性抗体的确认试验不能完全替代ANA的筛查试验［10］。

综上，该研究对济南地区946例自身抗体检测结果进行了回顾性分析，发现，女性自身抗体的阳性率比男性高；ANA核型以核颗粒型、核均质型、胞质颗粒型及着丝点型较多；ANAs结果中以抗Ro-52、抗SS-A、抗SS-B抗体、抗ACA、AMA-M2较多。研究结果与全国其他地区的回顾性研究有类似处，也有不同。抗核抗体在女性中发病率高，需要研究其中致病因素，以提示女性规避这些风险因素。ANA与ANAs的联合检测可为自身免疫病提供更全面的证据。ANA以及ANAs结果的解释，需要结合就诊人群的临床症状进行全面分析，以得出正确的结论。

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［2016-04-23收稿，2016-05-20修回］［本文编辑：吴蓉］

Retrospective analysis of autoantibodies detection results in 946 specimens from Jinan Area

SUO Shu-hui，CUI Hai-rong，MIN Yan，et al.Department of Laboratory Medicine，the General Hospital of Ji'nan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

ObjectiveTo explore the positive distribution of autoantibodies in the patients of Jinan Region，and investigate their clinical signficance in antoimmune disease.MethodsNine hundred and forty-six patients'（visited to author's hospital）serum samples were detected by indirect immunofluorcscence（IIF）for screening assay of ANAs，further using line immunoassay（LIA）for confirmed assay of specific ANAs.ResultsThe positive rate of female patients was significantly higher than the male patients.The major pure fluorescence patterns were speckled pattern，homogenous pattern，cytoplasmic dynein and centromere pattern.The most frequently occurred antibody were anti-Ro52，anti-SS-A，anti-SS-B，CENP-B and AMA-M2.ConclusionWomen face higher risk of developing autoimmune diseases（AID）.The combination of ANA and ANAs is useful for the diagnosis and treatment of AID.

Indirect immunofluorescence antibody technique；Antinuclear antibodies；Autoimmune disease

R446.6

A

250031山东济南，济南军区总医院实验诊断科（索淑会，崔海荣，闵彦，孙志玉，胡成进）

胡成进，Email：hcj90@263.com