含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡生长性能、骨骼矿化和钙磷利用的影响

陈冠华，张金龙，王建国，丁小娟，瞿红侠，韩进诚*，王志祥，闫永峰，陈建成，陈村年，贺明星，刘俊美

（1.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；2.商丘师范学院生命科学学院动物科学系，河南商丘476000；3.河南省正本清源科技发展股份有限公司，河南商丘476000）

水产养殖

含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡生长性能、骨骼矿化和钙磷利用的影响

陈冠华1，2，张金龙1，2，王建国1，2，丁小娟1，瞿红侠2，韩进诚2*，王志祥1，闫永峰2，陈建成3，陈村年3，贺明星3，刘俊美3

（1.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；2.商丘师范学院生命科学学院动物科学系，河南商丘476000；3.河南省正本清源科技发展股份有限公司，河南商丘476000）

为研究植酸酶对21～42日龄罗斯308肉鸡生长性能、骨骼矿化和钙磷利用的影响，本试验将120只前期（1～21日龄）采食相同日粮的21日龄罗斯308肉鸡随机分为3组，每组4个重复。设计3种日粮，在基础日粮［0.90%Ca、0.20%非植酸磷（NPP）、25 μg/kg 25-羟基维生素D3］中添加3个不同水平植酸酶（0、1000、10000 U/kg）。结果显示：日粮中添加植酸酶可改善21～42日龄肉鸡胫骨和股骨强度，增加胫骨、股骨和跖骨磷含量，提高跖骨灰分和钙含量，增加血浆磷含量，改善总磷利用率，但未改善肉鸡生产性能；基础日粮中添加1000 U/kg和10000 U/kg植酸酶对肉鸡生长影响差异不显著。结果表明：在本试验条件下，含25-羟基维生素D3日粮中添加1000 U/kg植酸酶可改善21～42日龄肉鸡的胫骨、股骨、跖骨的矿化，提高日粮磷利用率及血浆磷水平。

植酸酶；生长性能；骨骼矿化；磷；肉鸡

25-羟基维生素D3（25-OH-D3）是维生素D3的同功体，其活性约为维生素D3的1.24～2.13倍（瞿红侠等，2015；石文标，2013）。研究显示，25-OH-D3能改善家禽的生长性能（Chou等，2009；Fritts和Waldroup，2005），促进骨骼矿化（Fritts和Waldroup，2003），提高植酸磷的消化率（Edwards，2002；Roberson等，2005）。植酸酶可以有效降解肉鸡日粮中植酸磷，提高植酸磷消化率。Zeller等（2015）研究表明，向低磷日粮中添加12500 U/kg植酸酶，十二指肠和空肠对植酸磷降解、总磷吸收分别由55%、20%提高到91%、52%。研究发现，日粮中25-OH-D3和植酸酶同时添加在减少非植酸磷添加、促进植酸磷降解方面能起到协同作用（Ren等，2015）。本试验旨在研究含25-OH-D3的日粮中植酸酶水平对21～42日龄肉鸡生长性能，胫骨、股骨、跖骨矿化及钙、总磷利用的影响。

1　材料与方法

1.1试验动物与试验设计将120只21日龄健康、体重均匀的罗斯308肉鸡公雏随机分为3组，每组4个重复，每个重复10只肉鸡。试验时间为21～42日龄。在育成笼饲养（200cm×50cm×35cm）。粉状饲料饲喂，自由采食、饮水。

1.2试验日粮试验设计3种日粮，在基础日粮［Ca 0.90%、非植酸磷（NPP）0.20%、25 μg/kg 25-OH-D3］中分别添加0、1000、10000 U/kg植酸酶。试验日粮组成及营养水平见表1。

表1　日粮组成及营养水平

25-OH-D3，购自山东海能生物工程有限公司（纯度为1.25%）。微生物植酸酶，购自广东溢多利生物科技股份有限公司，活性为5000 U/g。

1.3样品收集与分析

1.3.1生长性能测定肉鸡分别在21日龄和42日龄空腹12 h后称重。每天记录死亡和发病鸡数，死亡鸡只称重扣除采食量。统计试验期采食量，计算饲料转化率。

1.3.2代谢试验测定29日龄时，每重复取1只鸡（每处理4只）放入代谢笼，用全收粪法于31～34日龄进行代谢试验。代谢试验鸡只于30日龄20：00停料，31日龄8：00加料，代谢试验开始；33日龄20：00停料，收集剩料，称重；34日龄早晨收粪完毕后，代谢试验结束。收集的粪便立即放入冰箱冷冻，不加硫酸或甲醛。4 d的粪便收集到一起称重。粪样解冻，按比例取粪样，混合均匀，65℃烘干24 h。测定指标包括水分、钙、总磷。EDTA滴定法测定钙（Ca）含量，钼黄比色法测定总磷（tP）含量。

1.3.3血液生化指标测定42日龄时，每重复取接近该重复平均体重的1只鸡进行屠宰试验。用1 mg/mL肝素钠溶液润湿注射器，心脏采血5 mL，3000 g离心10 min，血浆冷冻保存（-20℃）。用岛津CL-8000全自动生化分析仪测定血浆钙、无机磷（Pi）。

1.3.4骨骼指标测定屠宰试验中，剥离胫骨、股骨和跖骨。将骨骼放入样品袋，密封、冷冻保存（-20℃）。将左胫骨、左股骨及左跖骨在沸水中煮3～5 min，去除残余肌肉、腓骨，剥离干净后，无水酒精浸泡36 h，无水乙醚浸泡36 h，除去水分和脂肪。烘箱中105℃烘干24 h，测定骨骼重量。用游标卡尺测定左胫骨、左股骨及左跖骨长度和直径（骨骼长度1/2处）。将骨骼压碎，放入坩埚，在茂福炉中600℃灰化36 h，测定灰分重量。加入盐酸溶解，EDTA滴定法测定钙（Ca）含量；钼黄比色法测定磷（P）含量。用数显万能试验机测定右胫骨、右股骨及右跖骨折断力（即胫骨强度），参数设置：跨度40 mm；单位负荷50 kg；位移速度10 mm/min。

1.4统计分析以每重复为试验单元，用SAS 9.0数据统计软件对试验数据进行GLM分析，用Tukey法进行多重比较，P＜0.05为差异显著。

2　试验结果

2.1含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡生长性能和钙磷利用的影响由表2可知，在低磷日粮中添加1000、10000 U/kg植酸酶，对21～42日龄肉鸡的体增重（P=0.9127）、采食量（P=0.2373）、饲料转化率（P=0.6648）均无显著影响；日粮总磷利用率（P=0.0198）、血浆无机磷浓度（P=0.0254）显著提高。

表2　含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡生长性能及钙磷利用的影响

2.2含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡胫骨矿化的影响由表3可知，在低磷日粮添加1000、10000 U/kg植酸酶，均能提高胫骨强度、胫骨磷含量，但对胫骨重量、长度、直径、灰分重、灰分百分含量和钙含量均无显著影响。

表3　含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡胫骨指标的影响

2.3含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡股骨矿化的影响由表4可知，在低磷日粮中添加1000、10000 U/kg植酸酶，可以提高股骨强度（P=0.0040）和股骨磷含量（P= 0.0443）。但对股骨重量、长度、直径、灰分重、灰分百分含量和钙含量均无显著影响。

表4　含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡股骨指标的影响

2.4含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡跖骨矿化的影响由表5可知，在低磷日粮中添加1000、10000 U/kg植酸酶，可以降低跖骨直径（P=0.0380），提高跖骨灰分百分含量（P=0.0027）、钙含量（P=0.0340）、磷含量（P= 0.0151）。但对跖骨强度、重量、长度、灰分重无显著影响。

3　讨论

3.1含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡生长性能和钙磷利用的影响本试验在基础日粮中添加植酸酶，未显著改善21～42日龄肉鸡的体增重、采食量、饲料转化率。此结果和前人的研究结果一致（Tizziani，2016；Chung等，2013）。Yan等（2001）研究发现，日粮中分别添加0.19%、0.16%的NPP已满足22～42日龄肉鸡达到最佳体增重、饲料转化率的需要。Han等（2009）研究表明，日粮中NPP添加水平为0.20%时，与22～42日龄肉鸡正对照组的体增重、饲料转化率无显著差异。然而，也有研究表明，向低磷日粮中添加植酸酶能改善肉鸡的体增重、采食量（Ren等2015；Taheri等，2015）。植酸酶未显著改善生长性能的原因可能是基础日粮中NPP水平、日龄等因素。Han等（2009）研究表明，日粮NPP水平调整到0.13%时，添加1000 U/kg植酸酶显著提高22～42日龄肉鸡的体增重和采食量。Yan等（2001）、Waldroup等（2000）研究表明，向低磷日粮中添加800 U/kg植酸酶能显著提高1～21日龄肉鸡的体增重、饲料转化率，但对22～42日龄肉鸡的生长性能无显著影响。Li等（2015）向低磷日粮中添加1000 U/kg植酸酶，对1～9日龄肉鸡的体增重、采食量、饲料转化率均无显著影响，但显著改善1～21日龄肉鸡的生长性能。

表5　含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡跖骨指标的影响

试验显示，向低磷日粮添加1000、10000 U/kg植酸酶，总磷利用率分别提高24.1%、28.1%。Applegate等（2003）研究表明，日粮中添加25-OHD3虽然不能增加内源性植酸酶的活性，但能显著提高对磷的利用。Han等（2009）研究表明，向22～42日龄肉鸡低磷日粮中添加1000 U/kg植酸酶，对钙的利用率无显著影响，总磷的利用率则由49.5%升高到81.8%。Angel等（2006）研究表明，肉鸡对3种日粮（低磷日粮、低磷日粮+植酸酶、低磷日粮+植酸酶+25-OH-D3）的总磷的利用率分别为47.75%、53.40%、56.13%。

本试验表明，向低磷日粮中添加1000、10000 U/kg植酸酶对血浆钙浓度无显著影响，然而血浆无机磷浓度分别提高35.0%、63.6%。此结果和Zeller等（2015）、Taheri等（2015）、Han等（2009）、Shirely等（2003）报道一致。其原因可能是低磷日粮中添加植酸酶促进植酸磷降解、增加肠道对磷的吸收，进而使血浆磷浓度显著升高。本试验显示，低磷日粮中添加植酸酶能使血浆中Ca、P平衡状况得到改善，血浆Ca/P比值由基础日粮的2.59∶1调节为1.65∶1。这和Cowieson等（2011）报道一致，表明植酸酶能维持血浆Ca/P的稳态。

3.2含25-羟基维生素D3日粮中植酸酶对21～42日龄肉鸡胫骨矿化的影响本试验中，肉鸡胫骨强度、磷含量随着日粮中植酸酶的添加呈现升高的趋势。此结果和韩进诚等（2011）的研究结果一致。结果表明，日粮中添加植酸酶可通过增加胫骨磷含量来促进骨骼矿化，进而增加胫骨强度。Angel等（2006）报道，向低磷日粮中添加25-羟基维生素D3和植酸酶对胫骨重量、胫骨灰分重及胫骨灰分百分含量均无显著影响。蒋宗勇等（2009）研究发现，在不添加磷酸氢钙的基础日粮中添加600 U/kg植酸酶，能显著提高胫骨的重量、钙磷含量及灰分百分含量。Taheri等（2015）研究表明，向含0.23%NPP的日粮中添加0、1000、2000 U/kg植酸酶，22～42日龄肉鸡胫骨灰分百分含量分别为39.1%、41.9%、40.1%。Manobhavan等（2016）研究表明，向低磷日粮中添加植酸酶可提高胫骨的灰分百分含量、长度。Tizziani等（2016）以肉鸡胫骨灰分重量、灰分百分含量、钙和磷含量为评价指标时，0.17%、0.23%、0.29%的有效磷水平日粮中添加500 U/kg与正对照组（0.35%有效磷）差异不显著。以上表明，低磷日粮中添加植酸酶可改善21～42日龄肉鸡的胫骨矿化。

3.3含25-羟基维生素D3中植酸酶对21～42日龄肉鸡股骨矿化的影响本研究结果表明，低磷日粮中添加植酸酶可改善股骨的强度和磷含量。这和Chung等（2013）、ˊSwiatkiewicz等（2006）、Angel等（2005）研究结果一致，即植酸酶可促进股骨矿化。本试验中，低磷日粮添加1000 U/kg植酸酶，显著提高股骨强度、磷含量；然而，低磷日粮中植酸酶水平提高至10000 U/kg时，与添加1000 U/kg植酸酶对股骨矿化无显著影响。

3.4含25-羟基维生素D3中植酸酶对21～42日龄肉鸡跖骨矿化的影响本试验研究表明，低磷日粮添加1000、10000 U/kg植酸酶，显著提高跖骨灰分百分含量、钙含量和磷含量。这和Kiarie等（2015）、Coto等（2007）和Cowieson等（2006）研究结果一致，这表明，低磷日粮中添加植酸酶可改善骨骼的矿化（除直径外）。

4　结论

4.1含Ca 0.90%、NPP 0.20%、25 μg/kg 25-羟基维生素D3的基础日粮中添加1000、10000 U/kg植酸酶对21～42日龄肉鸡的生长性能无显著影响，但可提高21～42日龄肉鸡日粮总磷的利用率、血浆磷的浓度。

4.2基础日粮中添加1000 U/kg植酸酶能显著改善21～42日龄肉鸡胫骨和股骨强度，增加胫骨、股骨和跖骨磷含量，提高跖骨灰分含量。

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This experiment was conducted to evaluate the effect of phytase on growth performance，bone mineralization，and calcium（Ca）and phosphorus（P）utilization in 21～42-day-old broiler chickens.One hundred and twenty broilers at 21 days of age were allotted to 3 treatments with 4 replicates.Phytase was supplemented at 0，1000 and 10000 U/kg in basal diet［0.90%Ca，0.20%non-phytic acid phosphorus（NPP），25 μg/kg 25-OH-D3］.The results showed that phytase supplementation improved tibia.The results showed that phytase supplementation improved tibia and femur breaking-strength，increased tibia，femur and metatarsus P content，and metatarsus ash，Ca content，and enhanced plasma inorganic phosphorus（Pi）concentration and P utilization in broilers.However，phytase didn’t significantly affecte growth performance.In conclusion，the addition of 1000 U/kg phytase could improve the tibia，femur and metatarsus mineralization and phosphorus utilize in broilers aged from 21 to 42 days.

phytase；growth performance；bone mineralization；phosphorus；broiler chicken

S816.7

A

1004-3314（2016）09-0026-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20160907

国家自然科学基金项目（31101732）；河南省教育厅项目（16A230003）