医院与社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究

万小涛，钟方财，叶帮芬，张有辉，袁　翊

(四川省内江市第一人民医院检验科　641000)



·临床研究·

医院与社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究

万小涛，钟方财，叶帮芬，张有辉，袁翊

(四川省内江市第一人民医院检验科641000)

目的探讨医院与社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产生耐药的分子流行病学特征。方法采用培养法分离出MRSA，PCR法检测mecA基因并分型。结果189株MRSA标本甲氧西林决定因子(mecA)基因检测有178株为阳性，进行mecA基因分型，SCCmecⅡ型24株，SCCmecⅢ型101株，SCCmecⅣ型51株，其他2株未能分型，分型结果存在差异。结论MRSA以SCCmecⅢ型为主，MRSA的产生与抗菌药物的使用具有相关性。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；甲氧西林决定因子A；医院感染；社区感染

金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰染色阳性，是临床感染的主要病原菌，并逐渐向社区扩展。采用传统细菌鉴定及分型方法不能对其进行基因分型，尤其是对病原体溯源分析时，无法找出病原体变异的主要原因。本研究对分离出的耐甲氧西林金黄色葡萄球(MRSA)株进行基因分型，探讨使用抗菌药物与MRSA产生的相关性，为临床用药提供相关依据。

1　资料与方法

1.1一般资料2013～2015年该院住院和门诊患者标本，经培养为MRSA的菌株，采集患者病历资料分析抗菌药物的使用情况。

1.2仪器与试剂低温高速离心机，恒温仪，ABI7500实时荧光定量扩增仪。甲氧西林决定因子(mecA)基因检测试剂使用泰普生物有限公司试剂，SCCmec基因分型试剂由上海生工生物公司合成。

1.3方法

1.3.1金黄色葡萄球菌分离后mecA基因检测使用特异性引物直接扩增金黄色葡萄球菌及mecA基因。

1.3.2葡萄球菌染色体盒(SCCmec)基因分型根据研究报道[1]，选择4对PCR引物，PCR反应条件：94 ℃预变性4 min，94 ℃变性40 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，30个循环。见表1、2。

1.3.3社区感染MRSA诊断标准参照美国疾病预防控制中心诊断标准， 患者在门诊或入院48 h之内分离MRSA菌株;1年内无住院或与医疗机构接触史;无留置各种导管及其他穿透皮肤的医用装置。其他统计为医院感染MRSA。

表1　　SCCmec分型扩增引物序列表

表2　　特异性基因片段与各型SCCmec关系

1.4统计学处理采用SPSS20.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，组间比较使用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

mecA基因检测有178株阳性，11株为阴性，院内感染115株，社区感染61株，其中院内感染Ⅱ型和Ⅲ型共91株，社区感染为34株，院内感染Ⅳ型为15株，社区感染为36株，差异有统计学意义(P<0.01)。SCCmec基因分型有2株未能分型成功。见表3、4。

表3　　178株mecA基因阳性SCCmec基因分型结果(n)

表4　　SCCmec基因分型结果在各临床科室的分布情况(n)

3　讨　　论

MRSA感染一般发生于严重基础疾病、年老体弱者，且长期运用抗菌药物类的住院治疗患者。本研究结果表明，院内感染是MRSA最主要传播方式，如果因为监测和控制不当，可造成区域性的暴发流行，病死率非常高。

mecA基因作为MRSA的特征性耐药基因，存于SCCmec，SCCmec为一种可移动盒式染色体，分子结构主要包括mec基因复合体、CCr基因复合体及J区[2]。Ⅳ型除含有mecA耐药基因外，未含有其他耐药基因，而Ⅱ、Ⅲ型还含有CCr耐药基因,可对红霉素、壮观霉素等耐药。本研究未对SCCmecⅠ型和Ⅴ型进行分型，有2株未分型成功，不排除是Ⅰ型或Ⅴ型的可能，与有关研究基本一致[3]。本研究医院感染的MRSA主要以SCCmecⅡ、Ⅲ型为主，而社区感染的MRSA则以SCCmecⅣ型为主(占59%)[4]，由于Ⅱ、Ⅲ型耐药谱更广，医院感染的MRSA更难以选择。本研究结果显示，各科室SCCmecⅡ型共占13.6%,SCCmecⅢ型共占57.4%,SCCmecⅣ型占30.0%,与相关报道基本一致[5-6]。但Ⅱ、Ⅲ型的比例略有上升。门诊菌株与总检测菌株比较，SCCmecⅣ型占13.6%，而SCCmecⅡ、Ⅲ型占13.1%，门诊分型结果显示Ⅱ、Ⅲ型的比例也有上升，其原因可能与使用抗菌药物增多有一定的相关性。由于Ⅱ、Ⅲ型还含有CCr耐药基因，能对更多的抗菌药物产生耐药性[7]。医院感染的MRSA，SCCmecⅡ、Ⅲ型为79%，这要求临床早期用药时应更多地了解患者病史。由于MRSA的产生与患者本身状况密切相关，如基础疾病、年老体弱等原因致住院时间较长，采用更多的抗菌药物，所以认为抗菌药物的长期运用是引起MRSA的主要原因，而SCCmec分型，是区分医院感染和社区感染的一个重要指标。医院感染以耐药谱更广的SCCmecⅠ、Ⅱ、Ⅲ型为主，社区感染则以SCCmecⅣ、Ⅴ型为主，但目前社区感染的SCCmecⅡ、Ⅲ型有增加的趋势，其产生的耐药种类也更多，甚至耐万古霉素金黄色葡萄球菌[8-9]。

综上所述，MRSA的预防需要医务人员和患者做到严格的消毒措施，可起明显的防范作用；医务人员加强对新入院及MRSA易感者的检查，预防暴发流行，有早期治疗的作用；同时探讨MRSA的耐药机制，寻找新药的开发奠定科学基础。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.053

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1673-4130(2016)19-2775-02

2016-02-21

2016-06-16)