肝素结合样表皮生长因子和C-erbB-2检测对于卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断及程度的临床意义

杨天平

(江苏省张家港市中医医院检验科　215600)



·论著·

肝素结合样表皮生长因子和C-erbB-2检测对于卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断及程度的临床意义

杨天平

(江苏省张家港市中医医院检验科215600)

目的探讨肝素结合样表皮生长因子(HB-EGF)和 C-erbB-2检测在卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断及判断病情程度的临床价值。方法收集该院2014年8月至2015年7月因卵巢肿瘤行手术治疗的患者80例，其中良性卵巢瘤各20例，上皮性卵巢癌40例，Ⅰ期13例，Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期13例。另选取30例志愿者的正常子宫内膜卵巢组织。采用流式细胞术检测HB-EGF、C-erbB-2的表达情况；使用免疫组织化学法检测子宫内膜癌和正常子宫内膜的C-erbB-2表达。结果HB-EGF和C-erbB-2在卵巢癌组织中阳性细胞率显著高于良性卵巢瘤，差异有统计学意义(P<0.05)；C-erbB-2在正常子宫内膜低表达，在子宫内膜癌的含量比正常子宫表达增高，差异有统计学意义(P<0.05)；子宫内膜癌的病理分期不同，C-erbB-2表达也不同，Ⅰ、Ⅱ期明显低于Ⅲ、Ⅳ期，差异有统计学意义(P<0.05)。结论C-erbB-2蛋白高表达与子宫内膜癌的发生、发展相关，检测C-erbB-2有助于临床评估子宫内膜癌的生物学行为和预后。

肝素结合样表皮生长因子；C-erbB-2；卵巢癌；肿瘤

卵巢癌病死率较高，居女性生殖器3大恶性肿瘤之首位，其中85%～90%的卵巢癌为上皮来源[1]。早期卵巢癌，即Ⅰ～Ⅱ期手术联合化疗等综合治疗效果较为满意，其5年生存率较高，可高达90%左右[2]。卵巢位于盆腔深部，大多数患者由于未及时就诊而至晚期[3]。现探讨肝素结合样表皮生长因子(HB-EGF)和C-erbB-2检测对卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断及判断病情程度的临床意义，报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选择该院2014年8月至2015年7月因卵巢肿瘤行手术治疗的患者80例(观察组)，年龄32～60岁，平均年龄(42.1±3.1)岁。纳入标准：(1)早期可无症状：妇科检查时偶然发现。(2)下腹不适感：最早为下腹或盆腔下坠感。(3)腹部肿物：当囊肿长大呈球形，腹部可扪及肿物。(4)压迫症状：肿瘤巨大时可出现压迫症状，出现尿频或尿潴留，大便不畅，压迫横膈引起呼吸困难、心慌；影响下肢静脉血流，引起腹壁及两下肢浮肿。(5)疼痛：肿瘤出现蒂扭转时可致腹部剧烈疼痛。(6)妇科检查：多为子宫1侧、呈囊性、表面光滑、可活动、与子宫不粘连，蒂长时可扪及。阴道后穹窿常有胀满感，有时可触及肿瘤下界。(7)超声波检查：显示卵巢肿瘤内有液性回声[4]。良性卵巢瘤、交界性卵巢瘤各20例；上皮性卵巢癌40例，Ⅰ期10例，Ⅱ期11例，Ⅲ～Ⅳ期9例。另选取30例正常子宫内膜卵巢组织的志愿者作为对照组，年龄33～59岁，平均年龄(41.8±4.3)岁。2组研究对象的年龄、体质量等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法检测HB-EGF和C-erbB-2在卵巢组织中的表达：采用流式细胞术检测卵巢肿瘤组织中HB-EGF与C-erbB-2的平均荧光强度与阳性细胞率。鼠抗人C-erbB-2单克隆抗体(美国BD公司生产)；鼠抗人HB-EGF单克隆抗体(美国Santa Cruz公司生产)；FACScan流式细胞测试仪(美国BD公司生产)。PBS溶液中剪碎、研磨、过滤，在术中取卵巢肿瘤组织，1 500 r/min，5 min，弃上清液，将PBS溶液调整为单细胞悬液，其中细胞数为5×105mL，再取100 mL鼠抗人HB-EGF-抗1 μL悬液，水浴加热，震荡，37 ℃，50 min；通过PBS漂洗、离心，弃上清液，再加入FITC标记羊抗鼠2抗1 μL，避光反应30 min，再经PBS漂洗、离心，弃上清液，进行抗原表达测定时检测10 000个肿瘤细胞。C-erbB-2抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)与免疫组织化学SP试剂盒，具体操作步骤按试剂盒说明书。阳性对照：已知阳性乳腺导管浸润癌切片，阴性对照：PBS缓冲液。

1.3观察指标HB-EGF和C-erbB-2在良性卵巢瘤、交界性卵巢瘤、上皮性卵巢癌中的阳性细胞率及平均荧光强度比较；C-erbB-2蛋白在正常子宫内膜与子宫内膜癌中的表达情况比较；C-erbB-2表达与子宫内膜癌病理分期的关系。

2　结　　果

2.13组研究对象HB-EGF和C-erbB-2检测阳性细胞率结果比较HB-EGF和C-erbB-2在卵巢癌组织中阳性细胞率显著高于良性卵巢瘤，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　　3组研究对象HB-EGF和C-erbB-2检测阳性细胞率结果比较

2.2C-erbB-2蛋白在正常子宫内膜与子宫内膜癌的表达结果比较C-erbB-2在正常子宫内膜低表达，在子宫内膜癌的含量比正常子宫表达增高，差异有统计学意义(χ2=24.75，P<0.05)。见表2。

表2　　C-erbB-2蛋白在正常子宫内膜与子宫内膜癌的表达结果比较[n(%)]

2.3C-erbB-2表达与子宫内膜癌病理分期的关系子宫内膜癌的病理分期不同，C-erbB-2表达也不同，Ⅰ、Ⅱ期明显低于Ⅲ、Ⅳ期，差异有统计学意义(χ2=8.34，χ2=5.09，P<0.05)。见表3。

表3　　C-erbB-2表达与子宫内膜癌病理分期的关系[n(%)]

3　讨　　论

近年来子宫内膜癌的发病率不断增加，其发病率占女性生殖系统恶性肿瘤的20%～30%，是妇科常见的恶性肿瘤，且发病年龄呈现低龄化的趋势，严重威胁女性健康[4-5]。然而子宫内膜癌的确切发生原因与机制尚不清楚，目前认为其发生与雌激素长期刺激并缺乏孕激素拮抗有关。

本研究结果表明，HB-EGF和C-erbB-2在卵巢癌组织中阳性细胞率显著高于良性卵巢瘤，差异有统计学意义(P<0.05)；C-erbB-2在正常子宫内膜低表达，在子宫内膜癌的含量比正常子宫表达增高，差异有统计学意义(P<0.05)；子宫内膜癌的病理分期不同，C-erbB-2表达也不同，Ⅰ、Ⅱ期明显低于Ⅲ、Ⅳ期，差异有统计学意义(P<0.05)。HB-EGF是由巨噬细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞等分泌产生，分布在人类和动物的多种组织中，如皮肤、骨骼、肌、肺、中枢神经系统等，且具有广泛的生物学作用[6-7]。HB-EGF生物活性与EGF类似，促细胞分裂较强，高于EGF[8]。跨膜蛋白分子(proHB-EGF)是HB-EGF的前体，通过一系列的生物化学反应降解后产生游离HB-EGF(sHB-EGF)[9]。邻近细胞的增殖及抑制邻近细胞的凋亡可通过proHB-EGF促进。有研究表明HB-EGF与生殖内分泌有极其密切的关系[10]。通常表达在子宫内膜、早孕绒毛及蜕膜等组织中，对子宫内膜生长与分化均具有促进作用，因此在维持胎盘功能与介导胚泡黏附与着床方面起着非常重要的作用。C-erbB-2癌基因又称HER-2/neu基因，是一种促癌基因，其编码有跨膜受体糖蛋白(P185)，分别由185个氨基酸残基组成，且具有表皮生长因子受体和受体氨基酸激酶的活性和功能[11]。在正常情况下，C-erbB-2基因参与细胞生长与分化的调节，处于非激活状态，当受到某些致癌因素的作用后,其激活形式主要以基因扩增方式进行。有研究表明,C-erbB-2基因扩增与蛋白表达之间具有很强的相关性,因此如果想反映基因扩增情况，可通过检测C-erbB-2的表达产物P185[12]。在人类正常上皮组织中C-erbB-2有少量表达，其表达能力与这些组织的再生修复有关，导致癌基因激活的原因为C-erbB-2癌基因过表达和扩增，并参与细胞的生长调控，因此癌细胞的生长增殖和细胞癌变受到促进。本研究结果显示，C-erbB-2在子宫内膜癌的发生与发展可能由于细胞凋亡，是由C-erbB-2分子内区的C末端介导，通过抑制凋亡、促进细胞C-erbB-2在激活后而存活，进一步促进肿瘤形成。

综上所述，HB-EGF和C-erbB-2检测可作为卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断的辅助指标，子宫内膜癌的发生与C-erbB-2蛋白的高表达密切相关，临床可通过检测C-erbB-2评估子宫内膜癌的生物学行为和预后，推荐HER-2/neu蛋白作为临床共价疫苗投入临床研究。

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Study of HB EGF,C-erbB-2 test in differential diagnosis of ovarian benign and malignant tumor and determine the meaning of a complex condition

YANGTianping

(DepartmentofLaboratory,ZhangjiagangHospitalofTraditionalChineseMedicine,Zhangjiagang,JiangSu215600,China)

ObjectiveTo study HB-EGF,C-erbB-2 test in differential diagnosis of ovarian benign and malignant tumor and determine the meaning of a complex condition.MethodsTotally 80 cases of patients with ovarian tumors were collected from August 2014 to July 2015,including 20 cases benign ovarian tumor,and 40 cases epithelial ovarian cancer,13 cases of Ⅰ period,Ⅱ period in 14 cases,Ⅲ～Ⅳ period 13 cases.At the same time,normal endometrium ovarian tissue from 30 cases volunteers were collected.HB EGF,C-erbB-2 expression in ovarian tissue were detected by using flow cytometry.The immune histochemical method was used to detect C-erbB-2 expression from 40 examples carcinoma,30 cases of normal endometrium intrauterine membrane.ResultsThe rate of positive cells of HB-EGF,C-erbB-2 was significantly higher than that of benign ovarian tumor(P<0.05);C-erbB-2 for lower expression in normal endometrium,endometrial carcinoma in content was higher than the normal uterus express,the difference was statistically significant(P<0.05);Endometrial cancer of different pathological staging,C-erbB-2 expression was different also,including C-erbB-2 expression in endometrial carcinoma of stage Ⅰ,Ⅱ significantly below Ⅲ,Ⅳ period,the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionThe high expression of C-erbB-2 protein is associated with the occurrence and development of endometrial carcinoma,C-erbB-2 testing could help to clinically evaluate the biological behavior and prognosis of endometrial carcinoma.

HB-EGF；C-erbB-2;ovarian cancer;tumor

杨天平，女，副主任技师，主要从事临床微生物及免疫学研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.021

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1673-4130(2016)19-2713-03

2016-03-21

2016-05-16)