2种化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体阳性的临床探讨

林　博，金京南，张延江，张静冉

(北京中医药大学附属第二临床医院/东方医院检验科，北京 100078)



·论著·

2种化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体阳性的临床探讨

林博，金京南，张延江，张静冉

(北京中医药大学附属第二临床医院/东方医院检验科，北京 100078)

目的采用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)对2种化学发光方法分别检测梅毒螺旋体特异性抗体阳性标本并进行复检确认，确定2种方法(≥95%)真阳性结果的S/CO值。方法2014年10月至2016年1月该院门诊及住院术前、输血前梅毒螺旋体特异性抗体阳性标本，雅培检测阳性(S/CO值1.02～39.29)145例，罗氏检测阳性(S/CO值1.4～33.07)24例，共169例。169例梅毒螺旋体特异性抗体阳性标本同时使用2种化学发光方法检测，并应用TPPA方法进行复检确认，将标本S/CO值排序分段统计阳性预测值，确定(≥95%)真阳性结果的S/CO值。结果169例阳性标本经TPPA复检表明，雅培阳性符合率为78.7%，罗氏为81.3%。雅培S/CO≥8时，罗氏S/CO≥14时，阳性预测值均为100%。结论雅培检测结果S/CO≥8，罗氏S/CO≥14时，可作为(≥95%)真阳性结果的S/CO值。

梅毒螺旋体；抗体；梅毒螺旋体明胶凝集试验；化学发光法；阳性预测值

梅毒是由苍白密螺旋体感染引起的性传播疾病，通过人类黏膜或有破损的皮肤直接接触患者感染性病灶而传播，其临床表现多样，病程发展缓慢，可导致系统性的病变。据文献报道2000～2013年我国梅毒流行呈上升趋势，13年间年均增长达13．37%[1]。梅毒还可以通过输血传播，目前已在国内外作为常规术前输血前的检查项目[2]。实验室以梅毒血清学检测最为常见，分为非特异性梅毒抗体检测和特异性梅毒抗体检测。近年来，随着免疫标记技术的发展，化学发光法呈现灵敏度高、线性范围宽等优点，且全自动化仪器具有高通量、随机进样、操作简单等优势[3]。但随着其灵敏度的提高，假阳性率也随之增加。现通过梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)方法对化学发光方法检测阳性的结果进行复检确认，确定(≥95%)真阳性结果的S/CO值，为阳性结果判定提供参考。

1　资料与方法

1.1一般资料2014年10月至2016年1月该院门诊及住院术前、输血前梅毒螺旋体特异性抗体阳性标本(雅培S/CO值1.02～39.29，罗氏S/CO值1.4～33.07)为研究对象，共169例。男83例，女86例，年龄3～94岁。所有标本采集均为空腹条件下抽取静脉血4 mL，313 r/min离心15 min，当日检测分装，-20 ℃冻存。

1.2仪器与试剂采用美国雅培公司的I2000SR全自动化学发光微粒子免疫分析仪，试剂为其配套Syphilis TP及相关校准品、质控品，原理为微粒子化学发光(CMIA)；德国罗氏诊断公司的Cobas e601全自动化学发光免疫分析仪，试剂为其配套Syphilis TP及相关校准品、质控品，原理为电化学发光(ECLIA)；判断标准均为S/CO≥1.0为阳性，<1.0为阴性。TPPA试剂盒(赛乐迪亚)由日本富士瑞必欧株式会社提供；判断标准按试剂说明书肉眼判读结果,反应孔4 中细胞沉积在孔中央呈光滑纽扣状为阴性,反应孔4出现凝集呈不规则沉积为阳性。振荡器、离心机、移液器等实验器材备用。

1.3方法收集雅培微粒子化学发光试剂检测梅毒螺旋体特异性抗体阳性标本(S/CO值1.02～39.29)145例，罗氏电化学发光试剂检测梅毒螺旋体特异性抗体阳性标本(S/CO值1.4～33.07)24例，169例梅毒螺旋体特异性抗体阳性标本同时采用2种化学发光方法检测，再使用TPPA方法复检确认。严格按照说明书操作，将标本S/CO值排序分段统计阳性预测值，以确定(≥95%)真阳性的S/CO值。

2　结　　果

2.12种方法检测结果与TPPA检测结果的符合率169例标本经TPPA确认阳性122例，阴性47例。雅培与TPPA的符合率为80.47%；罗氏与TPPA的符合率为83.49%。雅培阳性结果中,TPPA检测阴性33例，占21.3%；罗氏阳性结果中,TPPA检测阴性28例，占18.67%。 见表1。

表1　　2种方法检测结果与TPPA检测结果的符合率(n)

表2　　2种方法检测结果S/CO值分段与TPPA结果比较(n)

表3　　S/CO值分段统计2种方法检测结果的阳性预测值(%)

2.22种方法检测结果与TPPA检测结果比较169例阳性结果经TPPA确认后，雅培检测S/CO值1～3的19例，TPPA及罗氏检测结果为阴性；罗氏检测S/CO值1～6.4的14例，TPPA及雅培检测结果为阴性。TPPA检测阴性标本中雅培检测结果S/CO值最大7.98，罗氏检测结果S/CO值最大12.05。将2种方法检测结果的S/CO值分段统计阳性预测值，S/CO值1～3雅培阳性预测值为42.85%，罗氏为0%；S/CO值3.01～5雅培阳性预测值为68.18%，罗氏为27.27%；S/CO值5.01～8雅培阳性符合率为92.59%，罗氏为70%；当雅培结果S/CO≥8时，罗氏结果S/CO≥14时，阳性预测值均为100%。见表2、3。

3　讨　　论

梅毒实验室检查是诊断梅毒的重要依据之一。梅毒螺旋体侵袭机体后，主要产生2类抗体,一类为梅毒螺旋体特异性抗体[4],另一类是抗梅毒螺旋体破坏患者组织后释放的某些物质抗体,称为反应素,可用于梅毒疗效观察、随访和复发的诊断[5]。由于其检测采用的抗原为非特异性抗原,可与其他病原菌刺激机体产生的抗体相结合，呈生物学假阳性反应[6]。目前，临床上广泛应用的梅毒筛查试验以检测梅毒螺旋体特异性抗体居多，但有文献报道吸光度在0～0.15之间尤其是0.10～0.15之间的弱阳性血清会被漏检，有一定的局限性[7]。化学发光法是近年来随着梅毒螺旋体基因工程抗原的研制成功而建立的检测梅毒螺旋体特异性抗体的方法，有研究报道化学发光法的敏感性可达98.7%～100.0%[8-9]。但敏感性提高的同时也造成假阳性结果，尤其是梅毒低发流行地区，假阳性发生率会更高。

本研究采用特异性较高的TPPA方法对敏感性较高的化学发光方法检测阳性的结果进行复检确认，确定预示(≥95%)真阳性S/CO值。本组结果表明，S/CO值较低时，2种化学发光方法检测结果有较大差异，同一份样本检测结果一阴一阳时，TPPA结果均为阴性，提示S/CO值较低时假阳性率较高。可能原因为2种方法采用的重组抗原种类及数量有关，且敏感性较高。本组结果显示，同一例标本使用2种方法检测结果均为阳性，但TPPA检测结果均为阴性。原因可能有2点：(1)化学发光法特异性的局限性造成假阳性，如机体的生理状态发生改变(老年人、孕妇等)或由某些疾病(传染性疾病、自身免疫疾病、恶性肿瘤等)造成的生物性假阳性[10]。(2)TPPA方法敏感性不高，需加做其他特异性确证试验，如荧光密螺旋体抗体吸附试验(FTA-ABS)或免疫印迹试验(WB)，以提高梅毒抗体检测的特异性和敏感性。本研究使用2种化学发光方法对169例梅毒螺旋体抗体初筛阳性结果同时进行检测，再经TPPA复检确认，雅培检测结果最大S/CO值7.98，罗氏检测结果最大S/CO值12.05，TPPA结果仍有阴性。当雅培检测结果S/CO≥8时，罗氏检测结果S/CO≥13时，TPPA结果均为阳性，阳性预测值为100.0%，提示本组梅毒螺旋体特异性抗体≥95%为真阳性的判断值。

根据本实验结果对梅毒螺旋体特异性抗体实验室检测的流程及策略进行了完善，初次检测采用敏感性较高的化学发光方法进行筛查，如检测结果大于该判断值，可直接报告阳性结果，但仍有假阳性可能，需在报告单中将实验方法的影响因素、局限性等相关信息进行注释，以便临床医师对筛查结果更加客观、准确地判断。如筛查阳性结果小于该判断值，需通过TPPA进行复检确认，如与复检结果一致，可将2种检测方法在报告单中联合报告，并注明实验方法的影响因素、局限性等相关信息。如与复检结果不一致，可加做其他特异性试验，如FTA-ABS、WB及梅毒非特异性试验加以佐证。单独检测梅毒螺旋体特异性抗体并不能区分梅毒现在与既往的感染情况，所以梅毒的筛查与诊断，实验室血清学检测虽关键，但不同实验诊断方法又各有特点及局限性，还需从多方面(病史、临床表现等)综合从而加以判断。

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Evaluation of two kinds of chemiluminescence detection of Treponema pallidum antibody-positive samples

LINBo，JINJingnan，ZHANGYanjiang，ZHANGJingran

(DepartmentofClinicalLaboratory，DongfangHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100078,China)

ObjectiveTo analyze the true-positive results (≥95%) S/CO value of Treponema pallidum specific antibody (anti-TP) positive samples caused by 2 different chemiluminescence detection assay in comparison with Treponema Pallidum Particle Assay (TPPA).MethodsWe collected the Treponema pallidum specific antibody positive samples of outpatient and hospitalization from October 2014 to January 2016 in Peking union medical college hospital as the research objects.There were 145 positive cases of Abbott laboratories (S/CO value of 1.02 to 39.29),24 positive cases of Roche (S/CO value of 1.4 to 33.07).The 169 cases of Treponema pallidum specific antibody positive samples were detected with two methods of chemiluminescence detection at the same time,TPPA was performed as repetition and confirmed test.Gathering and sorting the statistics of the positive predictive value segmented ordered by specimen S/CO value,to determine 95% or higher S/CO value of true positive results.ResultsAfter retested and confirmed by TPPA of the 169 positive cases,the Abbott positive coincidence rate was 78.7%,the Roche positive coincidence rate was 81.3%.When the S/CO value of Abbott ≥ 8 and the S/CO value of Roche≥14,the positive predictive value was 100%.ConclusionWhen the S/CO value of Abbott ≥ 8 and the S/CO value of Roche≥14,the S/CO value can be used as the true positive results(≥95%).Abbott laboratories results S/CO value ≥8,Roche test results S/CO value ≥13,it is a 95% or higher S/CO limit of true positive results.

treponema pallidum；antibody；TPPA；CLIA；positive predictive value

林博，女，主管检验师，主要从事临床免疫检验研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.006

A

1673-4130(2016)19-2675-03

2016-02-16

2016-04-11)