鼻咽癌组织EB病毒潜伏膜蛋白1检测及其临床意义*

周凤娇　周小军　汪芸　王书芹

鼻咽癌组织EB病毒潜伏膜蛋白1检测及其临床意义*

周凤娇1，3周小军1汪芸2王书芹2

目的通过检测鼻咽癌组织中的EB病毒潜伏膜蛋白1（EBV-LMP1）表达水平，探讨其与鼻咽癌发病的关系及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测405例鼻咽癌患者鼻咽组织EB病毒EBV-LMP1表达情况，以105例鼻咽炎患者作为对照，分析EB病毒EBV-LMP1在不同鼻咽疾病及其在不同鼻咽癌病理类型、性别及年龄的表达情况。结果鼻咽癌患者EBV-LMP1阳性率为36.05%，而鼻咽炎患者阳性率为14.29%，EBV-LMP1在不同病理类型、性别及年龄的鼻咽癌患者中的表达无明显差异。结论鼻咽组织EBV-LMP1感染与鼻咽癌有一定的相关。

鼻咽癌；EB病毒EBV-LMP1；临床

经过多年的研究发现EB病毒与鼻咽癌关系密切，EB病毒已公认为致瘤病毒，并将EB病毒血清学检查作为筛查鼻咽癌的指标。但部分鼻咽癌患者血清EB病毒并不是阳性，而且又发现其它恶性肿瘤如淋巴瘤、甲状腺癌、胃癌等患者也与EB病毒感染相关［1-3］，故本研究拟在鼻咽癌高发区检测EBV-LMP1在鼻咽癌患者鼻咽组织中的表达，探讨EB病毒与鼻咽癌的关系，报告如下。

资料与方法

1病例资料

病例来源于广州中医药大学附属中山医院，时间从2008年12月～2015年10月。鼻咽癌405例；病理分型：3例角化性癌，372例分化型非角化性癌，30例未分化型非角化性癌；男性282例，女性123例；年龄13～87岁，平均48.01±12.52岁。鼻咽炎105例；年龄15～71岁，平均40.91±13.82岁。

2EB病毒LMP1检测方法

免疫组化所用试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司，EBV-LMP1一抗产品编号：MAB-0063，二抗反应系统采用即用型快捷免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒，产品编号：KIT-5001，实验步骤大致如下：组织切片后，常规烤片脱蜡，梯度酒精水化，柠檬酸盐缓冲液高温修复，冲洗后一抗室温孵育3小时，后续步骤严格按照免疫组化染色试剂盒说明的方法进行。

3EB病毒免疫组化检测分级标准

EBV-LMP1染色在病灶活检组织中的阳性部位位于胞浆和胞膜，胞浆胞膜内显示棕黄色颗粒为阳性。分类标准：常规在“上下左右”随机选择4个视野进行观察，组织切片中上皮无染色，判断为“-”；上皮组织细胞膜染色浅黄，判断为“+”；上皮组织细胞浆/细胞膜内染色黄色，或局灶深黄色，判断为“++”；上皮组织细胞浆/细胞膜成片棕黄色，判断为“+++”。

4统计学方法

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析，本研究资料为分类资料，采用非参数统计方法。

结果

1鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况

鼻咽癌405例，强阳性5例，阳性102例，弱阳性39例，阴性259例，阳性率36.05%；鼻咽炎105例，强阳性1例，阳性11例，弱阳性3例，阴性90例，阳性率14.29%；经统计学检查，χ2=18.282，P= 0.000＜＞0.01，见表1，显示鼻咽癌患者鼻咽组织EB病毒的表达明显高于鼻咽炎患者，说明EB病毒感染鼻咽组织，与鼻咽上皮细胞癌变存在着一定的关系。

2不同病理类型鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBVLMP1表达情况

角化性癌3例，阳性者1例，阴性者2例；分化型非角化性癌372例，强阳性者3例，阳性者95例，弱阳性者36例，阴性者238例，阳性率为36.02%；未分化型非角化性癌30例，强阳性者2例，阳性者7例，弱阳性者2例，阴性者19例，阳性率36.67%。（因角化性鼻咽癌组病例较少，故不予统计分析）。分化型非角化性癌组与未分化型非角化性癌两组差异比较无统计学意义，χ2=0.005，P= 0.944＞0.05，见表2，说明不同病理类型的鼻咽癌患者，其鼻咽病灶组织EB病毒表达无明显差异。

3不同年龄鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况

年龄≤20岁共3例，阳性1例，弱阳性1例，阴性1例，阳性率66.67%；20＜年龄≤40岁共99例，阳性29例，弱阳性11例，阴性59例，阳性率40.40%；40＜年龄≤60岁共229例，强阳性4例，阳性60例，弱阳性20例，阴性145例，阳性率36.68%；年龄＞60岁共74例，强阳性1例，阳性12例，弱阳性7例，阴性54例，阳性率27.03%。χ2= 4.729，P=0.193＞0.05，见表3，说明不同年龄鼻咽癌患者，其鼻咽组织EB病毒表达无明显差异。

4不同性别鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况

男性282例，强阳性4例，阳性69例，弱阳性26例，阴性183例，阳性率为35.11%；女性123例，强阳性1例，阳性33例，弱阳性13例，阴性76例，阳性率为38.21%。χ2=0.358，P=0.550＞0.05，见表4，说明不同性别鼻咽癌患者鼻咽组织中EB病毒表达情况无明显差异。

表1　鼻咽癌及鼻咽炎患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况

表2　不同病理类型鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况

表3　不同年龄鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况（岁）

表4　不同性别鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况

讨论

鼻咽癌在世界各地发病率差异很大，高发区为中国的广东、广西、湖南、福建、江西五省；另外，东南亚、北非及格陵兰岛发病率也较高。EB病毒在世界各地人群中却有普遍感染，90%以上人群在成年前都感染过EB病毒。EB病毒的人群普遍高感染与鼻咽癌仅局部地区高发不一致。因此EB病毒与鼻咽癌的关系一直是鼻咽癌研究的重要内容。

在EB病毒致癌性研究中，EBV-LMP1致鼻咽癌是研究最为透彻的和数量较多者，故本研究通过检测其在鼻咽癌高发区鼻咽癌患者鼻咽病灶组织中的表达，探讨EB病毒与鼻咽癌的关系。显示鼻咽癌患者鼻咽组织EBV-LMP1的表达明显高于鼻咽炎患者，说明EB病毒感染鼻咽组织，与鼻咽上皮细胞癌变存在着一定的关系。这与蔡兰等［4］采用荧光定量PCR法检测鼻咽活检组织EB病毒所得研究结果一致。这也是目前在鼻咽癌高发区进行EB病毒普查及早期筛查鼻咽癌的基础。在本研究中鼻咽癌组织EB病毒阳性率为36.05%，这与大部分研究中鼻咽癌患者血清中EB病毒相关抗体的阳性率（较高）存在着一定的差异。造成差异的原因很多，2009年在江苏的研究表明［5］LMP1在鼻咽癌组织中的阳性表达率就达到了72.50%；这可能与江苏鼻咽癌病理类型及病例数（40例）过少有关，而血清学EB病毒检查，本身由于检查的EBV抗体不一样，其阳性率同样就存在差异，如采用ELISA方法检测血清中EB病毒衣壳抗原VCA-IgA［6］其阳性率达91.0%，另外目前研究发现其它肿瘤如恶性淋巴瘤、胃癌、肝癌等也与EB病毒有关，非鼻咽组织来源同样也可产生血清中EB病毒相关抗体的阳性，故造成组织学检查与血清学检查的差异。

通过分析不同病理类型鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况，显示分化型非角化性癌组与未分化型非角化性癌两组差异比较无统计学意义，但却不能说EB病毒与鼻咽癌病理分型无关，因本研究所选的病例在广东中山市，为世界鼻咽癌最高发区之一，其地鼻咽癌病例多为非角化性癌，而角化性癌少见［7］，故本研究只能说明非角化癌中的分化型及未分化型两亚型EB病毒感染无明显差异。

通过分析不同年龄及不同性别鼻咽癌患者鼻咽病灶组织EBV-LMP1表达情况，显示不同年龄及不同性别鼻咽癌患者，其鼻咽病灶组织EB病毒EBV-LMP1表达并无明显差异。而一般研究［7，8］认为40～60岁为鼻咽癌发病高峰期，男性患鼻咽癌要多于女性，似乎可认为EB病毒感染是鼻咽癌的病因之一，而导致40～60为鼻咽癌高发年龄及男性易患鼻咽癌应该另有原因。

1张建国，郭芳芳，赵瑞皎，等.原发性中枢神经系统淋巴瘤的临床病理特征及其与EB病毒的关系［J］.中华实验外科杂志，2013，30（6）：1300-1302.

2李清怀，李筱雨，孙建平，等.甲状腺癌发生与EB病毒感染的关系［J］.中华实验外科杂志，2014，31（3）：627-629.

3郭云娣，白光辉.EB病毒相关胃癌临床病理特征分析［J］.山东医药，2011，51（44）：104-105.

4蔡兰，罗凯，刘颖，等.荧光定量PCR检测活检组织EB病毒感染的临床意义［J］.中国优生与遗传杂志，2003，11（5）：29-30.

5王娟，徐洁洁，乔明哲，等.EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌中的表达及临床意义［J］.江苏医药，2009，35（5）：508 -509.

6周鹰，朱洪.血清EB病毒抗体检测对鼻咽癌的临床诊断价值［J］.第四军医大学学报，2009，30（12）：1102.

7陈应智，储兵，曾玉梅，等.广东省中山市1647例鼻咽活检标本的临床病理学特征分析［J］.山东医药，2015，55（18）：87.

8徐建慧，陈新野，王思阳，等.珠海市住院鼻咽癌患者626例临床首发症状调查分析［J］.中华肿瘤防治杂志，2012，19（24）：1845-1847.

（收稿：2016-04-01修回：2016-05-16）

Nasopharyngeal carcinoma tissue EB virus-LMP1 detection and its clinical significance

ZHOU Fengjiao，ZHOU Xiaojun，WANG Yun，WAN Shuqin
Department of otorhinolaryngology，Zhongshan Hospital Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine，Zhongshan，Guangzhou，528400，China

Objective Through detecting the expression of EB virus-LMP1 in nasopharyngeal carcinoma tissue，to explore its relationship with nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance.Methods Using immunohistochemical method to detect nasopharyngeal tissue EB virus-LMP1 expression in 405 cases of patients with nasopharyngeal carcinoma（NPC），compared with 105 patients with nasopharyngitis，to analyze the expression of EB virus-LMP1 in the different nasopharyngeal disease and different pathological type，gender，age in patients with nasopharyngeal carcinoma.Results The positive rate of EB virus-LMP1 in patients with nasopharyngeal carcinoma（NPC）was 36.05%，while it was 14.29%in nasopharyngitis patients.The expression of EB virus-LMP1 in different pathological type，gender and age of nasopharyngeal carcinoma patients（NPC）showed no significant difference. Conclusion There is a certain correlation between EB virus-LMP1 infection in nasopharyngeal tissues and nasopharyngeal carcinoma（NPC）.

nasopharyngeal carcinoma；EB virus-LMP1；clinical

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.04.002

*国家自然科学基金（81373698）

1广州中医药大学附属中山医院耳鼻咽喉科（广东中山，528400）

2广州中医药大学附属中山医院病理科

3广州中医药大学

周小军，主任医师.Email：zd1232@126.com