高效液相色谱法同时测定降脂颗粒中虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量＊

刘　源，王爱明，陈晓风

(1.江苏省镇江市药品检验所，江苏镇江212000;2.江苏省镇江市中医院，江苏镇江212000)

高效液相色谱法同时测定降脂颗粒中虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量＊

刘源1，王爱明2，陈晓风1

(1.江苏省镇江市药品检验所，江苏镇江212000;2.江苏省镇江市中医院，江苏镇江212000)

目的建立测定降脂颗粒中的虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水(20∶80)，检测波长283 nm、320 nm，柱温30℃，流速1.0 mL/min。结果虎杖苷质量浓度在5.12～38.40 μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系(r=1.000)，平均回收率为100.13%，RSD为0.63%(n=6);二苯乙烯苷质量浓度在1.91～19.09 μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系(r=1.000)，平均回收率为99.14%，RSD为0.63%(n=6);橙皮苷质量浓度在9.89～74.19 μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系(r=1.000)，平均回收率为99.54%，RSD为0.31%(n=6)。结论该法灵敏、简便、准确，重现性好，线性关系良好，可作为制剂质量控制的标准。

降脂颗粒;虎杖苷;二苯乙烯苷;橙皮苷;高效液相色谱法

降脂颗粒是镇江中医院自制制剂，主要由制首乌、生山楂、虎杖、陈皮等11味中药组方，具有理气活血、消脂降浊的功效，用于血脂异常，血黏度增高所致晕眩、胸闷等症。为控制降脂颗粒的质量，本研究中采用高效液相色谱法同时测定制剂中虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量［1-5］，为制订该制剂的质量标准提供参考。现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

1.2试药

降脂颗粒(医院自制制剂，批号为140328，1504014，150625);虎杖苷对照品(批号为111575-200502)，橙皮苷对照品(批号为110721-201316，含量为95.3%)，二苯乙烯苷对照品(批号为110844-201512，含量为91.0%)，均购自中国食品药品检定研究院;乙腈、甲醇均为色谱级;其他试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-水(20∶80);柱温:30℃;进样量:10 μL;橙皮苷检测波长为283 nm，虎杖苷、二苯乙烯检测波长为320 nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于3 000。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液

取虎杖苷对照品10.24 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为虎杖苷对照品溶液。取二苯乙烯苷对照品10.49 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为二苯乙烯苷对照品溶液。取橙皮苷对照品10.38 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为橙皮苷对照品溶液。分别精取虎杖苷对照品溶液5 mL、二苯乙烯苷对照品溶液2 mL、橙皮苷对照品溶液5 mL，置20 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.2.2供试品溶液

《普通高中化学课程标准（2017年版）》提出化学学科核心素养是现代社会公民必备的科学素养，是学生终身发展的重要基础。学生通过化学课程的学习，所形成的从化学视角认识事物、解决问题的思想、观点和方法，即为植根于学生头脑中的化学学科核心素养。在高三一轮复习课堂教学中，不能仅仅是知识的重复和加深，更应该实现基于化学学科思维、学科观念以及学科方法等的培养，以提升学生的化学学科核心素养。

取样品装量差异项下供试品，研细，取约7 g，精密加稀乙醇溶液50 mL，称定质量，超声提取30 min，放冷，用稀乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液5 mL，置10mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.2.3阴性对照品溶液

取不含首乌、虎杖、陈皮的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

专属性试验:取2.2项下3种溶液进样，于283 nm波长处下测定橙皮苷，于320 nm波长处测定虎杖苷和二苯乙烯。结果表明，阴性对照品溶液对测定无干扰。色谱图见图1。

图1　高效液相色谱图

线性关系考察:分别精取虎杖苷对照品溶液1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，7.5 mL，二苯乙烯苷对照品溶液0.4，0.8，1.6，2.0，2.4，4.0 mL，橙皮苷对照品溶液1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，7.5 mL，置20 mL容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 μL进样，以峰面积作纵坐标（Y）、对照品质量浓度作横坐标(X，g/L)进行线性回归，得虎杖苷回归方程为Y=29014242.29X-13 865.58（r=1.000），二苯乙烯苷回归方程为Y= 19 903 838.16 X-8 111.81（r=1.000），橙皮苷回归方程为Y=13 149 743.38X-28 482.59（r=1.000）。结果表明，虎杖苷质量浓度在5.12～38.40 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系，二苯乙烯苷质量浓度在1.91～19.09 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系，橙皮苷质量浓度在9.89～74.19 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。

定量限和检测限考察:按信噪比为10∶1计算，虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷的定量限分别为0.92，0.35，0.57 μg/mL;按信噪比为3∶1计算，虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷的检测限为分别为0.52，0.21，0.33 μg/mL。

精密度试验:取同一份对照品溶液，按拟订的色谱条件连续进样6次。结果虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷的RSD分别为0.78%，1.23%，1.41%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h时进样测定并计算。结果虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量的RSD分别为1.11%，1.06%，1.35%(n= 6)，表明12 h内供试品溶液稳定性良好。

重复性试验:取同一批号样品6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷平均含量为0.48，0.22，0.75 mg/g，RSD分别为0.91%，0.73%，1.47%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:分别称取已知含量的样品适量，精密加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1　加样回收试验结果(n=6)

2.4样品含量测定

取2.2项下供试品溶液和混合对照品溶液，进样10 μL，以峰面积按外标法计算含量。结果虎杖苷的含量分别为0.475，0.483，0.472 mg/g，平均为0.48 mg/g;二苯乙烯苷的含量分别为0.214，0.221，0.223 mg/g，平均为0.22 mg/g;橙皮苷的含量分别为0.749，0.743，0.752 mg/g，平均为0.75 mg/g。

3　讨论

首乌、虎杖、橙皮为方中主药，其中二苯乙烯苷具有广泛的心血管活性、免疫调节、保肝作用［6］;虎杖苷具有抗菌消炎、抗氧化的作用［7］;橙皮苷具有抑制炎症反应，促进脂肪代谢等多种生物活性［8］。故选取这3种成分进行测定，能反映制剂的质量。

检测波长的选择时，配制虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷对照品溶液，作紫外扫描，结果虎杖苷、二苯乙烯苷在320 nm波长处有最大吸收，橙皮苷在283 nm波长处有最大吸收，故同时选择283 nm及320 nm作为检测波长，采用DAD液相色谱仪，对处方中首乌、虎杖、陈皮进行含量测定。

方法学考察结果表明，采用高效液相色谱法对处方中首乌、虎杖、陈皮进行含量测定，操作简便、快速，重现性好，可作为该制剂的定量检测方法。鉴于该制剂有11味药材，为提高、完善质量标准，确保产品质量稳定可控，今后还可开展4味药材以上的薄层色谱鉴别的方法学研究。作者简介:刘源，硕士研究生，副主任药师，研究方向为药学，(电子信箱)liuyuan999990@sina.com。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：62.

［2］董霞，孙莹.虎杖饮片及其配方颗粒中虎杖苷和大黄素的含量比较［J］.中国药师，2015，18(6)：1 060-1 062.

［3］黄尹，李国锋.不同产地虎杖中各成分含量的比较［J］.中医药信息，2015，32(5):68-71.

［4］李洪泽，齐骁勇，韩风雨，等.HPLC法测定六味首乌颗粒中二苯乙烯苷的含量［J］.现代药物应用，2015，9(2)：219-221.

［5］管大平，钱世兵，纪开明.橘红片中橙皮苷含量测定方法研究［J］.黑龙江医药，2012，25(5)：665-666.

［6］苏焕群，陈再智.何首乌药理研究进展［J］.中药材，1993，16（2）：34-37.

［7］郭梅红，黄小丹，范颖，等.孔晓龙虎杖降脂颗粒对高脂血症大鼠降脂作用的研究［J］.中国临床新医学，2015，8（10）：901-906.

［8］霍本辉，陈敬华，朱涛.橙皮苷通过下调HMGB1抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞MCP-1表达的实验研究［J］.西部医学，2015，27(12)：1 785-1 791.

Simultaneous Content Determination of Polydatin，Styrene Glycosidesand and Hesperidin in Jiangzhi Granules by HPLC

Liu Yuan1，Wang Aimin2，Chen Xiaofeng1
（1.Zhengjiang Institute for Drug Control，Zhengjiang，Jiangsu，China212003；2.Zhenjiang TCM Hospital，Zhenjiang，Jiangsu，China212000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of giant knotweed polydatin，styrene glycosides（TSG）and hesperidin in Jiangzhi Granules.MethodsKromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column was used with acetonitrile-water（20∶80）as mobile phase；the detecting wavelength：283 nm and 320 nm.The column temperature was 30℃，the flow rate was 1.0 mL/min. ResultsPolydatin，TSG and hesperidin in the concentration ranges of 5.12-38.40 μg/mL（r=1.000），1.91～19.09 μg/mL（r= 1.000），and 9.89-74.19 μg/mL（r=1.000），respectively，exhibited a good linear relationship with the peak area.The average recovery rates of the above 3 compounds were 100.13%，RSD=0.63%（n=6）；99.14%，RSD=0.63%（n=6）；99.54%，RSD=0.31%（n=6）. ConclusionThis method is sensitive，simple and accurate with good reproducibility and fine linear relationship，and can be used for the quality control of said preparation.

Jiangzhi Granules；polydatin；TSG；hesperidin；HPLC

R284.1;R286.0

A

1006-4931（2016）13-0074-03

2016-03-06）

＊江苏省医疗机构制剂标准提高科研专项课题，发文字号:苏食药监药注函〔2014〕64号。