逍遥散防治阿尔茨海默病的作用及配伍机制

王虎平　吴红彦

(甘肃中医药大学，甘肃　兰州　730000)



逍遥散防治阿尔茨海默病的作用及配伍机制

王虎平1吴红彦1

(甘肃中医药大学，甘肃兰州730000)

目的探讨逍遥散对D-半乳糖致阿尔茨海默病(AD)小鼠模型记忆能力及血清超氧化物歧化酶(SOD)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性与丙二醛(MDA)水平的影响。方法60只KM种SPF级小鼠随机分为空白组、模型组、逍遥散全方组、疏肝健脾组、疏肝养血组、健脾养血组，每组10只。腹腔注射D-半乳糖复制拟AD小鼠模型并以逍遥散全方及各配伍药组进行干预，给药第41天 进行学习能力训练，第42天进行记忆功能测试，然后股动脉取血测定血清SOD、ChAT、AchE活性及MDA水平。结果逍遥散全方及各配伍药组皆可延长小鼠记忆潜伏时间，减少错误次数，提高血清SOD、ChAT活性,降低AchE活性与MDA水平,但记忆功能及血清SOD、MDA、ChAT、AchE的改善皆以逍遥散全方组最明显。结论逍遥散能较好地改善拟AD模型小鼠记忆功能、抗氧化能力及中枢神经递质活性。疏肝、健脾、养血是有效防治AD的统一体，缺一不可。

逍遥散；阿尔茨海默病；记忆功能；SOD；MDA；ChAT；AchE

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性发展的神经系统退行性疾病，现代医学对其发病机制的认识处于几种“学说”阶段，相应的对症治疗不能满足临床患者的需求。前期研究中，本课题组以调和肝脾之名方逍遥散(《太平惠民和剂局方》)对AD小鼠模型进行了干预研究，初步确证了逍遥散对AD的防治作用〔1～5〕。为了进一步探索逍遥散防治AD的配伍结构、精选防治AD的主要药物，本研究以记忆功能及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性为考察指标对逍遥散进行了疏肝、健脾、养血为单元药组的拆方配对研究。

1　材料与方法

1.1主要材料60只KM种SPF级小鼠，(20±2)g，雌、雄各半，购自甘肃中医药大学动物中心，实验动物合格证号：SCXK(甘)2004-0006。逍遥散各组成生药(柴胡、薄荷、当归、白芍、白术、茯苓、煨姜、甘草)均购自甘肃中医药大学附属医院。SOD、MDA、AchE、ChAT试剂盒及考马斯亮蓝蛋白测试盒均购自南京建成生物化学试剂有限公司，批号：20100522；D-半乳糖购自北京中泰化学试剂公司，批号：20100514。小鼠跳台仪(DT-200)、小鼠避暗自动测试仪(BA-200)均购自成都泰盟科技有限公司。

1.2方法60只KM种SPF级小鼠，随机分为空白组、模型组、逍遥散全方组、疏肝健脾组、疏肝养血组、健脾养血组，每组10只。空白组小鼠每天腹腔注射生理盐水24 ml/kg，其余各组小鼠每天腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg(浓度为5 mg/ml)复制AD小鼠模型〔6〕。造模同时，空白组及模型组小鼠每天灌胃生理盐水0.2 ml/10 g，逍遥散全方及各配伍药组小鼠每天灌胃各组对应药物水煎液0.2 ml/10 g。逍遥散方中各组成药物的剂量均按照2005版《中华人民共和国药典》中逍遥丸〔7〕剂量，以人与小鼠体表面积体重比换算得到各实验组剂量，即逍遥散全方组、疏肝健脾组(柴胡、薄荷、白术、茯苓、煨姜、甘草)、疏肝养血组(柴胡、薄荷、当归、白芍)、健脾养血组(白术、茯苓、煨姜、甘草、当归、白芍)小鼠对应生药量分别为2.485、1.775、1.136及2.059 g/kg。连续灌胃42 d。

1.3指标测定动物给药第41天，依次使用小鼠跳台仪、小鼠避暗自动测试仪进行学习能力训练，第42天依次使用小鼠跳台仪、小鼠避暗自动测试仪进行记忆功能测试〔8〕。测试结束后，股动脉迅速取血测定小鼠血清SOD、AchE、ChAT活性及MDA含量。

1.4统计学处理应用SPSS13.0软件作单因素方差分析。

2　结　果

2.1逍遥散对AD模型小鼠记忆功能的影响(跳台法)模型组小鼠记忆潜伏时间缩短，错误次数增多，与空白组相比差异显著(P<0.01)。逍遥散全方及各配伍药组均可延长小鼠记忆潜伏时间、减少错误次数，与模型组相比差异显著(P<0.01或P<0.05)；但差异以逍遥散全方组最明显，且与疏肝健脾组、疏肝养血组及健脾养血组相比有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2逍遥散对AD模型小鼠记忆功能的影响(避暗法)模型组小鼠记忆潜伏时间缩短，错误次数增多，与空白组相比差异显著(P<0.01)。逍遥散全方及各配伍药组均可延长小鼠记忆潜伏时间、减少错误次数，与模型组相比差异显著(P<0.01或P<0.05)；但差异以逍遥散全方组最明显，且与疏肝健脾组、疏肝养血组及健脾养血组相比有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1　逍遥散对AD模型小鼠记忆功能的影响(跳台法)

与模型组相比：1)P<0.05，2)P<0.01；与逍遥散全方组相比：3)P<0.05，下表同

表2　逍遥散对AD模型小鼠记忆功能的影响(避暗法)

2.3逍遥散对AD模型小鼠血清SOD活性、MDA水平的影响 模型组小鼠血清SOD活性降低、MDA水平升高，与空白组相比差异显著(P<0.01)。逍遥散全方及各配伍药组均可提高小鼠血清SOD活性、降低MDA水平，与模型组相比差异显著(P<0.01或P<0.05)；但逍遥散全方组与疏肝健脾组、疏肝养血组及健脾养血组相比无统计学差异(P>0.05)。见表3。

表3　逍遥散对AD模型小鼠血清SOD活性、MDA水平的影响

2.4逍遥散对拟AD模型小鼠血清ChAT、AchE活性的影响模型组小鼠血清ChAT活性降低、AchE活性升高，与空白组相比差异显著(P<0.01)。逍遥散全方及各配伍药组均可提高小鼠血清ChAT活性、降低AchE活性，与模型组相比差异显著(P<0.01或P<0.05)；但ChAT活性改善以逍遥散全方组最为明显，与疏肝健脾组及健脾养血组相比差异显著(P<0.05)。见表4。

表4　逍遥散对AD模型小鼠血清ChAT、AchE活性的影响

3　讨　论

“肝者，将军之官，谋虑出焉” (《素问·灵兰秘典论》)、“肝者，罢极之本，魂之居也”(《素问·六节藏象论》)，肝为将军之脏，性喜调达而恶抑郁，主疏泄、藏阴血，体阴而用阳，舍于魂而华于筋，为神魂之居、行为之主； “脾藏二神意与智，意不安，思无虑，神夺愚也” (《医方类聚》)、“脾主身之肌肉”(《素问·痿论篇》)、“脾病不能为胃行其津液，四肢不得禀水谷气，气日以衰，脉道不利，筋骨肌肉皆无气以生，敞不用焉”(《 素问·太阴阳明论》)，脾胃为后天之本，气血生化之源，升清而灌四旁，散精而荣百脉，藏意智，主四肢，丰肌肉，为意智之舍、行为之力。可见，肝、脾二脏与人之精神、行为密切相关，而AD的主要临床表现就是精神异常与行为失常两方面，这与祖国医学对肝、脾功能的认识非常吻合，据此提出了从肝、脾论治AD的科研假说。

逍遥散(《太平惠民和剂局方》)作为调和肝脾之名方，以肝脾为主治脏腑，以气血为基础物质，土木同调，气血并治。其中柴胡、薄荷疏肝气，解郁结，畅情志，悦神魂，又可促脾运，升清阳，启清窍，醒脑神；当归、白芍益阴血，藏神魂，舍意智，柔肝体，舒筋脉，又可充营血，强四肢，实肌肉；白术、茯苓、甘草、煨姜入中焦，健中土，陪补后天之本，资生气血之源，既健中土，实四肢，充肌肉，又化阴血，强肝体，柔肝筋，还可泄浊毒，解蒙蔽，聪神明。八味相合，肝脾同调，气血并治，神魂同宁，筋肉并健，如此，清阳健行左升之道，精气上注元神之府，气畅神安，血充筋柔，木达土旺，体健肉坚，脑灵神聪，行为自和，具有中医药防治AD的理论基础；现代研究表明，逍遥散具有提高多巴胺等神经受体含量、营养保护神经元、抗焦虑、抗抑郁、抗自由基氧化、调节免疫、雌激素样等作用〔8～10〕，具有现代医学防治AD的药理学基础。

本研究表明，疏肝、健脾、养血三者的结合是中医药有效防治AD的统一体，缺一不可。而从疏肝、养血、健脾药组中精选重点药物组成新的防治AD的精方将是我们今后研究的方向之一，力争为开发防治AD的中药新产品奠定基础。

1王虎平,吴红彦.逍遥散及其配伍组方对阿尔茨海默病小鼠学习记忆的影响〔J〕.中国老年学杂志,2013;33(18):4459-61.

2王虎平,邢喜平,张雯娟,等.逍遥散对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆及神经递质的影响〔J〕.中国老年学杂志,2014;34(9):2468-70.

3王虎平，吴红彦.逍遥散对AD模型小鼠行为学、形态学及神经递质活性的影响〔J〕.中国中西医结合杂志,2014;34(4):471-4.

4王虎平，吴红彦.逍遥散对阿尔茨海默病模型小鼠血清及脑组织匀浆中SOD、GSH-PX活性及MDA水平的影响〔J〕.甘肃中医学院学报,2013;30(6):1-3.

5蔡大勇，黄启福，贾旭.丹栀逍遥散对D-半乳糖拟老年性痴呆大鼠脑病理学变化的影响〔J〕.北京中医药大学学报，2006;29(2)：114-7.

6国家药典委员会.中华人民共和国药典第一部〔S〕.2005:564.

7李仪奎.中药药理实验方法学〔M〕.第2版.上海:上海科学技术出版社,2006:256-8.

8徐志伟，敖海清，吴丽丽，等.逍遥散对慢性心理应激损伤大鼠海马神经元的影响〔J〕.中药药理与临床,2005;21(1):5-9.

9王静怡，石玉瑁，查鹏洲，等.逍遥散的药理研究〔J〕.中国医院药学杂志，2002;22(8)：489-90.

10杨玉峰，杨瑛.加味逍遥散对女性黄褐斑血清性激素水平的影响〔J〕.陕西中医学院学报，2000;23(5)：41-2.

〔2015-10-27修回〕

(编辑袁左鸣)

The effect and compatibility mechanism of Xiaoyao Powder on the Alzheimer's disease

WANG Hu-Ping,WU Hong-Yan.

Gansu University of Chinese Medicine,Lanzhou 730000,Gansu,China

ObjectiveTo investigate the effect of Xiaoyao Powder on the memory function and activity of SOD,MDA,ChAT and AchE in serum of Alzheimer's disease (AD) model mice and discuss the effect and mechanism of Xiaoyao Powder on the AD and explain the compatibility mechanism of combination of Shugan,Yangxue and Jianpi of Xiaoyao Powder.Methods60 SPF mice were divided into the blank control,model and Quanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue groups,with 10 mice in each group. AD model mice was made by injecting D-gal. While,AD model mice was prevented by Quanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue of Xiaoyao Powder.At the 41st day,the ability of learning and memory training was done. At 42nd day,the memory function was detected and then to measure content of SOD,MDA,ChAT,AchE in serum.ResultsQuanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue of Xiaoyao Powder could improve memory function of AD model mice,and could improve SOD,ChAT and decrease MDA and AchE,but the effect of Quanfang group of Xiaoyao Powder was most obvious.ConclusionsXiaoyao powder can better improve the memory function,antioxidant activity and neurotransmitter of A D model mice,has better prevention and treatment on the AD. The Shugan,Yangxue,Jianpi is effective in preventing and treating AD prescription structure.

Xiaoyao Powder;Alzheimer's disease;Memory function;SOD;MDA;ChAT;AchE

国家自然科学基金项目(No.81060284)；甘肃省中药药理与毒理学重点实验室开放基金项目(No.ZDSYS-KJ-2013-010)；甘肃中医药大学中青年基金项目(No.2010-11)

吴红彦(1963-)，男，博士生导师，教授，主要从事复方物质基础与临床应用研究。

王虎平(1980-)，男，硕士，在读博士，主要从事老年病的中医药防治研究。

R749

A

1005-9202(2016)15-3632-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.009

1甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃省中药药理与毒理学重点实验室甘肃省中药新产品创制工程实验室