抗磷脂酶A2受体抗体检测在老年人特发性膜性肾病肾组织及血液中的表达

符克英　蔡俊宏　符生苗　韩叶光　王　茹　张　培

(海南省人民医院医院肾病研究室，海南　海口　570311)



·其他·

抗磷脂酶A2受体抗体检测在老年人特发性膜性肾病肾组织及血液中的表达

符克英蔡俊宏符生苗韩叶光王茹张培

(海南省人民医院医院肾病研究室，海南海口570311)

目的探讨血液中抗磷脂酶A2受体抗体(anti-PLA2R)在老年人特发性膜性肾病(IMN)诊断中的意义。方法分别应用免疫组织化学方法和间接免疫荧光方法检测老年人IMN患者肾活检组织anti-PLA2R和血液中anti-PLA2R的表达情况，分析其相关性。结果肾活检组织中anti-PLA2R敏感性为75.0%，特异性为95.0%；血液中的anti-PLA2R敏感性为77.5%，特异性为95.0%；血液与肾活检组织中anti-PLA2R结果的相关性分析，阳性符合率96.9%，阴性符合率96.6%，总符合率98.3%；Kappa一致性检验，Kappa=0.996，P<0.001。结论间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R水平与免疫组织化学方法检测肾活检组织中anti-PLA2R的表达呈正相关，可成为体外诊断老年人IMN的特异性指标。

抗磷脂酶A2受体抗体；特发性膜性肾病；免疫组织化学方法；间接免疫荧光方法

特发性膜性肾病(IMN)是最常见的以肾病综合征为特点的肾脏疾病〔1，2〕。病理学特征主要是大量免疫复合物沉积于肾小球基底膜内和上皮下，免疫荧光主要表现为IgG及C3阳性，细颗粒状沉积毛细血管袢。以前，IMN的诊断主要依靠肾活检〔1〕。但是，肾脏病理检查是有创的检查手段，临床上仍存在某些患者因为年龄、适应证等问题未能及时进行肾活检，因此不能及时得到诊断，更不能排除如系统性红斑狼疮、慢性乙型肝炎病毒感染、 恶性肿瘤、肾脏移植等原因引起的继发性膜性肾病。笔者拟通过检测老年人血液中抗磷脂酶A2受体抗体(anti-PLA2R)，与肾活检组织中anti-PLA2R的表达进行相关性分析，探讨anti-PLA2R在老年人IMN诊断中的意义。

1　材料和方法

1.1对象来自2008～2015年本院肾病风湿科住院老年患者60例，年龄65～76岁，平均年龄69岁，其中IMN 40例，狼疮性肾炎10例，乙肝相关性肾炎10例。病例纳入标准：IMN根据临床诊断及肾脏病理光镜、电镜、免疫荧光诊断纳入。排除标准：乙肝相关性肾、狼疮性肾炎、肿瘤相关膜性肾病、其他继发性膜性肾病。

1.2研究分组将IMN设为实验组；继发性膜性肾病(狼疮性肾炎和乙肝相关性肾炎)为对照组；并将相对应血液样本分为3组：实验组、对照组、正常人组。

1.3主要试剂SABC法试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司，anti-PLA2R购自美国abcam公司。间接免疫荧光试剂盒购自德国欧蒙医学实验诊断股份公司。

1.4方法(1)收集了肾活检组织标本(石蜡常温保存)和血液样本(-80℃保存)各60例，以健康献血员血液样本20例作为正常人组。(2)应用SABC法进行肾活检组织免疫组化染色，分析各组肾活检组织中anti-PLA2R的表达、分布情况。(3)应用间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R水平。分析其与各组肾活检组织中anti-PLA2R表达量的相关性。

1.5统计学分析采用SPSS18.0软件，计算各组检测的敏感性及特异性、阳性符合率、阴性符合率及总符合率，进行χ2检验及Kappa一致性检验。

2　结　果

2.1免疫组织化学方法检测肾活检组织中anti-PLA2R实验组阳性例数为30例(30/40)，敏感性为75%，特异性为95%；对照组阳性1例，敏感性5%，特异性95%。阳性样本均可见anti-PLA2R在肾小球基底膜足细胞呈高表达。见图1。

图1　anti-PLA2R在肾小球基底膜足细胞呈高表达

2.2间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R实验组阳性例数为31例(31/40)，敏感性为77.5%，特异性为95.0%。健康献血员血液样本20例中，无阳性结果，特异性100%。对照组阳性1例，敏感性5%，特异性95%。阳性样本可见特异性胞质荧光。见图2。

2.3血液与肾活检组织中anti-PLA2R结果的相关性分析阳性符合率96.9%，阴性符合率96.6%，总符合率98.3%。Kappa一致检验，Kappa=0.996，χ2=55.991,P<0.001。

图2　anti-PLA2R与基质的转染细胞反应

3　讨　论

PLA2R属于Ⅰ型跨细胞膜受体，主要分为M型和N型，并确认自身抗体的主要靶抗原是M型PLA2R〔3～6〕。PLA2R与IgG4共定位于IMN患者肾小球足细胞，以免疫复合物沉积于肾小球毛细血管袢上，引起足细胞的损伤、肾小球基底膜的增厚以及通透性的改变〔1，5〕。从IMN患者沉积免疫复合物中提纯IgG可识别PLA2R，主要为IgG4亚型，这是肾小球沉积物中的主要免疫球蛋白亚类，因此认为PLA2R是直接导致IMN的主要靶抗原之一。检测血液中的anti-PLA2R对于IMN的病情活动、鉴别诊断和治疗监测具有重要作用〔3，7〕。继发性膜性肾病(狼疮性肾炎、乙肝相关性肾炎或恶性肿瘤相关膜性肾病等)抗体以IgG2、IgG3为主要亚型，为原发性膜性肾病和继发性膜性肾病鉴别诊断提供了充分的依据。Fervenza等〔2～4，6〕研究表明，IMN疾病活动度与anti-PLA2R滴度高低密切相关，在临床评价治疗效果上可以作为一项重要指导指标。

周广宇等〔8〕研究认为anti-PLA2R可能是IMN关键的特异性致病抗体。Qin等〔9〕报道也认为anti-PLA2R对于IMN具有很高的特异性，其滴度大小对于判断患者的疗效和预后具有重要意义。Hofstra等〔10，11〕认为anti-PLA2R水平可作为临床诊断IMN及治疗效果的监测手段。 根据国外报道，免疫组织化学法可以用来检测anti-PLA2R，并且以转染细胞作为检测基质的间接免疫荧光法是目前临床实验室血清学检测anti-PLA2R的一种便捷可靠的方法，且该方法可以进行定性和定量分析〔3，5〕。

本研究结果提示，免疫组织化学法和间接免疫荧光法均能作为诊断IMN的指标，但免疫组织化学法较复杂，是有创方法，且需要患者具备肾活检的条件；相比免疫组织化学法，间接免疫荧光法更加便利快捷，能与免疫组织化学法相互补，可作为体外诊断老年人特发性膜性肾病的特异性指标，在老年人特发性膜性肾病和继发性膜性肾病的鉴别诊断中具有重要意义。

1Ponticelli C，Passerini P.Can prognostic factors assist therapeutic decisions in idiopathic membranous nephropathy〔J〕?J Nephrol，2010;23(2)：156-63.

2Fervenza FC，Sethi S，Specks U.Idiopathic membranous nephropathy：diagnosis and treatment〔J〕.Clin J Am Soc Nephrol，2008;3(3)：905-19.

3Beck LH Jr，Bonegio RG，Lambeau G，etal.M-type phospholipase A2 receptor as target antigen in idiopathic membranous nephropathy〔J〕.N Engl J Med，2009;361(1)：11-21.

4Ronco P，Debiec H.Antigen identification in membranous nephropathy moves toward targeted monitoring and new therapy〔J〕.J Am Soc Nephrolb，2010;21(4)：564-9.

5Euroimmun AG,Stöcker W，Schlumberger W.Alle beiträge zum thema autoimmundiagnostik.Medizinische Labordiagnostik von A-Z〔M〕.Heidelberg:Springer Medizin Verlag，2012:198,1072.

6Beck LH Jr，Salant DJ.Membranous nephropathy：recent travels and new roads ahead〔J〕.Kidney Int，2010;77(9)：765-70.

7Beck LH Jr，Fervenza FC，Beck DM，etal.Rituximab-induced depletion of anti-PLA2R autoantibodies predicts response in membranous nephropathy〔J〕.J Am Soc Nephrol，2011；22(8)：1543-50.

8周广宇，金玲晶，于晶，等.成人膜性肾病患者血液抗PLA2R抗体与病情的相关性〔J〕.中华肾脏病杂志，2012；28(2)：111-4.

9Qin W，Beck LH Jr，Zeng C，etal.Anti-phospholipase A2 receptor antibody in membranous nephropathy〔J〕.J Am Soc Nephrol，2011；22(6)：1137-43.

10Hofstra JM，Beck LH Jr，Beck DM，etal.Anti-phospholipase A2 receptor antibodies correlate with clinical status in idiopathic membranous nephropathy〔J〕.Clin J Am Soc Nephrol.2011；6(6)：1286-91.

11Hofstra JM，Wetzels JF.Anti-PLA2R antibodies in membranous nephropathy：ready for routine clinical practice〔J〕?Neth J Med，2012；70(3)：109-13.

〔2016-07-05修回〕

(编辑曲莉)

海南省卫生厅立项课题(琼卫2012 PT-16)

韩叶光(1979-)，男，主管技师，主要从事肾脏病病理及实验室诊断工作。

符克英(1971-)，男，副主任技师，主要从事肾脏病实验室诊断及研究工作。

R692.06

A

1005-9202(2016)17-4281-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.073