低氧诱导因子-1α、Delta样配体4在不同乳腺癌分子亚型组织中的表达及临床意义

焦　德　路　炜　张学东

(聊城市人民医院乳腺及甲状腺外科，山东　聊城　252000)



低氧诱导因子-1α、Delta样配体4在不同乳腺癌分子亚型组织中的表达及临床意义

焦德路炜1张学东2

(聊城市人民医院乳腺及甲状腺外科，山东聊城252000)

目的探讨低氧诱导因子(HIF-)1α、Delta样配体(DLL)4在不同乳腺癌分子亚型组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织〔基底细胞样型17例、人表皮生长因子受体(HER)-2过表达型21例、Luminal A型54例、Luminal B型23例与普通乳腺样型23例〕与癌旁组织(对照组)HIF-1α、DLL4表达。结果115例乳腺癌组织HIF-1α、DLL4分别为70.43%、69.57%，明显高于对照组(25.00%、22.00%)(P<0.05)，其中基底细胞样型、HER-2过表达型、Luminal A型与Luminal B型乳腺癌组织HIF-1α、DLL4的阳性表达率均明显高于对照组(P<0.05)，基底细胞样型乳腺癌组织HIF-1α、DLL4的阳性表达率明显高于Luminal A型， HER-2过表达型乳腺癌组织HIF-1α的阳性表达率明显高于Luminal A型与Luminal B型(P<0.05)。乳腺癌组织HIF-1α、DLL4表达与年龄、组织学分级无明显的关系(P>0.05)，与腋窝淋巴结转移、临床分期具有明显的关系，其中中青年乳腺癌患者HIF-1α、DLL4阳性表达较高，腋窝淋巴结转移者上述因子阳性表达率更高，Ⅲ/Ⅳ期上述因子阳性表达率更高(P<0.05))。结论HIF-1α、DLL4在基底细胞样型、HER-2过表达型乳腺癌组织中的表达较高，而在Luminal A、B型乳腺癌组织中的表达较低；其可能与临床病理特征及预后状况有一定的关系。

HIF-1α；DLL4；乳腺癌

随着基因芯片技术与乳腺癌研究的不断深入，根据不同分子标志物表达将乳腺癌分子亚型分为基底细胞样型、HER-2过表达型、Luminal A型与Luminal B型。为了充分准确评估乳腺癌临床预后并指导制定个体化治疗方案，深入研究不同乳腺癌分子亚型组织的相关分子标志物在指导乳腺癌的诊治中具有重要的意义〔1〕。相关文献显示，低氧诱导因子(HIF)-1α、Delta样配体(DLL)4是决定乳腺癌微环境状况的主要分子标志物〔2〕。

1　资料与方法

1.1临床资料选取2012年1月至2015年1月我院乳腺癌患者115例，纳入标准：全部患者均具有手术适应证，手术病理组织学检查明确乳腺癌的诊断〔3〕，自愿参加本研究并签署知情同意书。排除标准：具有手术禁忌证，术前接受化疗、放疗与内分泌治疗，合并肝肾功能障碍、其他恶性肿瘤与精神性疾病患者。年龄29～78岁，平均(49.8±6.32)岁。腋窝淋巴结转移(≥4枚)61例，无腋窝淋巴结转移54例，组织学分级参照美国癌症联合委员会(AJCC)分级标准：Ⅰ级24例，Ⅱ级71例，Ⅲ级20例。根据雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体(HER)-2。检测结果将患者分为基底细胞样型(17例)、HER-2过表达型(21例)、Luminal A型(54例)与Luminal B型(23例)。同时采集癌旁组织(距癌组织>3 cm处)100例作为对照组。

1.2检测方法全部乳腺癌组织均采用免疫组织化学法检测。①试剂与仪器：兔抗人HIF-1α多克隆抗体、即用型兔抗人DLL4多克隆抗体(中国武汉博士德公司)，KIT-5020即用型快捷免疫组化检测试剂盒、DAB-0031氨基联苯胺显色试剂盒(福州迈新公司)。②操作步骤：手术期间采集乳腺癌组织与癌旁组织，全部组织标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，EDTA抗原或0.01 mmol/L柠檬酸盐缓冲溶液修复，采用免疫组化法染色，严格按照试剂盒说明书操作。

1.3观察指标HIF-1α、DLL4定位于细胞质，阳性反应为棕黄色染色，100倍显微镜下随机观察5个不同视野，每个视野计数250个细胞，阳性细胞比例>75%计4分，50%～75%计3分，25%～50%计2分，<25%计1分，无阳性细胞计0分；染色强度：无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分，总分=阳性细胞比例分值+染色强度分值，总分≤2分作为阴性，≥3分作为阳性。

1.4统计学处理采用SPSS18.0软件行χ2检验。

2　结　果

2.1不同乳腺癌分子亚型组织HIF-1α的表达115例乳腺癌组织HIF-1α的阳性表达率为70.43(81/115)，明显高于对照组(25.00%)(χ2=44.18，P<0.05)，其中基底细胞样型〔15例(94.12%)〕、HER-2过表达型〔21例(95.04%)〕、Luminal A型〔30例(53.70%)〕与Luminal B型〔15例(65.22%)〕乳腺癌组织HIF-1α的阳性表达率均明显高于对照组(P<0.05)，基底细胞样型乳腺癌组织HIF-1α的阳性表达率明显高于Luminal A型， HER-2过表达型乳腺癌组织HIF-1α的阳性表达率明显高于Luminal A型与Luminal B型(P<0.05)。

2.2不同乳腺癌分子亚型组织DLL4的表达115例乳腺癌组织DLL4的阳性表达率为69.57%(80/115)，明显高于对照组(22.00%)(χ2=48.53，P<0.05)，其中基底细胞样型〔16例(94.12%)〕、HER-2过表达型〔20例(95.24%)〕、Luminal A型〔29例(53.70%)〕与Luminal B型〔15例(65.22%)〕乳腺癌组织DLL4的阳性表达率均明显高于对照组(P<0.05)，基底细胞样型、HER-2过表达型乳腺癌组织DLL4的阳性表达率均明显高于Luminal A型与Luminal B型(P<0.05)。

2.3乳腺癌组织HIF-1α、DLL4表达与临床病理特征的关系乳腺癌组织HIF-1α表达与组织学分级无明显的关系(P>0.05)，与年龄腋窝淋巴结转移、临床分期具有明显的关系，其中中青年人群、腋窝淋巴结转移者HIF-1α阳性表达率更高，Ⅲ/Ⅳ期DLL4阳性表达率更高(P<0.05)；乳腺癌组织DLL4表达与组织学分级无明显的关系(P>0.05)，与年龄、腋窝淋巴结转移、临床分期具有明显的关系，其中中青年人群、腋窝淋巴结转移者DLL4阳性表达率更高，Ⅲ/Ⅳ期DLL4阳性表达率更高，比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1 。

表1　乳腺癌组织HIF-1α、DLL4表达与临床病理特征的关系〔n(%)〕

3　讨　论

目前，关于乳腺癌的病理原因尚未明确，乳腺癌的个体差异性较高，根据ER、PR、HER-2表达的情况将乳腺癌分为4种分子亚型，即基底细胞样型(ER-、PR-、HER-2-)、HER-2过表达型(ER-、PR-、HER-2+)、Luminal A型(ER+或PR+、HER-2-)与Luminal B型(ER+或PR+、HER-2+)。相关文献显示，基底细胞样型与HER-2过表达型乳腺癌的预后状况最差，而Luminal A 型乳腺癌的预后状况最佳〔4〕。微环境对细胞生物学行为具有重要的调控作用，当细胞癌变形成后，肿瘤容易产生多种生长因子，降解基膜与细胞外基质，诱导肿瘤新生血管形成，促进肿瘤细胞转移与浸润〔5〕。

DLL4是Notch信号通路配体，在正常人血管结构中几乎不表达，但在膀胱肿瘤、肾脏肿瘤与胃脏肿瘤等组织中的表达明显增高，促进肿瘤新生血管形成，与肿瘤的生长繁殖具有紧密的关系〔6〕。DLL4位于血管内皮生长因子信号下游，通过激活Notch信号通路，从而扩宽血管腔，增加肿瘤血流灌注量，降低耗氧量，促进肿瘤的生长繁殖。大量研究显示，DLL4在多种肿瘤组织中的表达上调，其在参与肿瘤发生与发展中具有重要的作用〔7，8〕。本研究结果显示，DLL4在乳腺癌组织中的表达显著上调，预后欠佳的基底细胞样型、HER-2过表达型乳腺癌组织DLL4的阳性表达率均明显高于预后较佳的Luminal A型与Luminal B型乳腺癌组织，揭示了DLL4表达可能与预后状况具有紧密的关系，其中DLL4阳性表达含量越高，其预后越差，且与相关文献〔9〕具有一致性。同时，乳腺癌组织DLL4表达与腋窝淋巴结转移、临床分期具有明显的关系。因此，其中DLL4阳性高表达者不仅促进腋窝淋巴结转移，且促进肿瘤临床分期的进展。另一方面，肿瘤是细胞异常增殖分化的最终产物，肿瘤组织生长繁殖过快必然导致肿瘤微环境低氧改变。HIF-1α为细胞耐受缺氧表达的主要因子之一。乳腺癌在微氧环境缺氧期间，HIF-1α通过激活糖酵解酶与葡萄糖转运蛋白，从而促进葡萄糖的转运与摄取，满足肿瘤缺氧缺血微环境下的迅速增殖的能量需求〔10〕。相关文献显示，HIF-1α具有促进肿瘤细胞增殖生长、转移与侵袭的作用，多种实质性肿瘤组织HIF-1α表达均明显上调〔11〕。本研究结果显示，HIF-1α在乳腺癌组织中的表达显著上调，其中基底细胞样型、HER-2过表达型乳腺癌组织HIF-1α阳性表达率较高，而Luminal A、B型乳腺癌组织HIF-1α阳性表达率较低，揭示HIF-1α可能与乳腺癌预后状况具有紧密的关系。DLL4通过促进肿瘤新生血管形成，增加肿瘤细胞的血流灌注量，从而改变肿瘤的缺氧性改变，促进恶性肿瘤发展；而HIF-1α通过为肿瘤微环境缺氧提供能量需求，从而改变肿瘤细胞缺氧，促进恶性肿瘤发展。因此，DLL4、HIF-1α通过改变肿瘤细胞微环境状态，从而促进乳腺癌的发生发展。

1刘秋明,曹亚丽,吴晓波,等.早期乳腺癌分子亚型与前哨淋巴结转移关系的探讨〔J〕.山东医药,2015;55(34):34-5.

2Dufraine J，Funahashi Y，Kitajewski J.Notch signaling regulates tumor angiogenesis by diverse mechanisms 〔J〕.Oncogene,2008;27(38):5132-7.

3周炳娟,孙吉瑞,赵文明,等.乳腺癌分子亚型中 HIF-1α和 Glut-1表达及其与基底细胞样型乳腺癌的关系〔J〕.临床与实验病理学杂志,2015;31(9):991-5.

4覃舒婷,莫军扬,周韬.乳腺癌分子亚型对新辅助化疗疗效及预后的预测价值〔J〕.实用医学杂志,2015;31(6):953-5.

5Nielsen TO,Hsu FD,Jensen K,etal.Immunohistochemical and clinical characterization of the basal 2 like subtype of invasive breast carcinoma〔J〕 Clin Cancer Res,2004;10(16):5367-74.

6刘红,谢佳,刘毫,等.FOXC2调控DLL4/Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞血管生成的影响〔J〕.吉林大学学报：医学版,2014;34(3):488-92.

7Suchting S,Freitas C,Le Nobel F,etal.The Notch ligand Delta-like 4 negatively regulates endothelial tip cell formation and vessel branching〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2007;104(9):3225-30.

8Patel NS,Li JL,Generali D,etal.Up-regulation of delta-like 4 ligand in human tumor vasculature and the role of basal expression in endothelial cell function〔J〕.Cancer Res,2005;65(19):8690-7.

9郎志强,吴艳秋,蔡莉.乳腺浸润性导管癌中DLIA的表达及其与血管生成的关系〔J〕.临床与实验病理学杂志,2013;29(1):93-5.

10李延辉，吴伟群，何小杰.HIF-1α VEGF在甲状腺肿瘤中的表达及其与肿瘤血管生成的关系〔J〕.病理与临床,2013;51(21):73-5.

11牛海艳,郑艺菲.乳腺癌中HIF-1α与Ki-67、Caspase-3和VEGF表达的意义〔J〕.临床与实验病理学杂志,2015;31(7):804-6.

〔2016-01-12修回〕

(编辑李相军)

焦德(1979-)，男，硕士，主要从事乳腺肿瘤的侵袭与转移机制研究。

R739

A

1005-9202(2016)17-4248-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.055

1妇产科2病理科