住院患者Rh表型血清学分析及临床应用

吴争胜　江　涛

住院患者Rh表型血清学分析及临床应用

吴争胜江涛

目的 了解浙江地区住院患者Rh表型分布规律，建立Rh表型库为本地区血液中心合理备血、建立稀有表型血源资料库提供依据。方法 用Rh表型微柱凝胶分型卡测定Rh表型D、C、E、c、e。结果 经统计分析浙江地区住院患者有效数据29338例，D、C、E抗原的阳性率分别为99.54%、89.51%和47.56%，Rh阳性表型分布规律为CCDee＞ CcDEe＞ CcDee＞ ccDEE＞ ccDEe＞ CCDEe＞ CcDEE＞ ccDee＞CCDEE，Rh阴性表型分布规律为Ccdee＞ ccdee＞ CCdee＞ ccdEe＞ CcdEe。结论 掌握本地区住院患者的Rh血型系统表型的分布状况，为血液中心及时提供Rh配型相合的血液，防止高频抗体的产生，对保障合理、安全用血具有重要临床意义。

住院患者 Rh表型 调查分析

在人类红细胞血型系统中，Rh血型是目前国际输血协会确认除ABO血型系统以外最具复杂性和重要性的血型系统，也是最具多态性和免疫原性的血型系统之一，具有重要的临床意义。近年来，随着现代输血医学理念的不断更新，人们逐渐认识到除常规检测的D抗原外，其余C/c、E/e抗原也具有较强的免疫原性，在临床输血中极可能引起严重的溶血性输血反应，其现实意义也越来越受重视。据世界各国报道的RhE/e和RhC/c引起的免疫反应分别可达14.0%和10.7%［1］。因此在血液免疫学研究中，必须进行Rh表型分析和相容性输注才能有效预防输血反应的发生。现开展针对浙江地区住院患者Rh表型分型的统计，分析表型分布规律，为临床合理储备用血，建立稀有表型档案，保证临床输血安全提供依据［2］。现将调查统计报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料 本院自2013年6月至2014年1月记录的入院患者共29338例，各留取EDTA-K2抗凝血标本2ml。其中男13811例，女15527例；年龄9d～103岁。均为汉族，属地为浙江省且所有观察对象彼此之间无血缘关系。

1.2试剂 安迪博特Rh血型分型卡由江阴利博医药生物技术有限公司生产，3批IgG 抗-D，抗-C、抗-c、抗-E、抗-e（效价均≥64）分别由德国Biotest和上海血液生物医药有限责任公司生产，筛选细胞（瑞士达亚美公司），氯仿（北京化工厂），上述试剂均经国家PP认证并在有效期内使用。

1.3仪器 样本离心机（BASO 2005-1 CENTRIFUGE，BASO 2002-2）、RH表型离心机（LB-3000医用低速离心机）、生物显微镜（CX31RTSF-2）、血型孵育振荡器（澳大利亚 anthos Thermostar）、4℃冰箱［MBR-506D（H）］。

1.4血型血清学试验 （1）Rh血型：采用微柱凝胶技术（MGT）进行操作，用乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）真空抗凝采血管抽取受检者静脉血2ml，离心取压积红细胞制成2%～3%的红细胞悬液，取50μl分别加入Rh表型凝胶卡中置于专用离心机内，离心10min后，取出微柱凝胶卡目测判读。如果红细胞沉积在微柱凝胶管底部，表明无相应的抗原抗体反应，为阴性；如果红细胞聚集在微柱凝胶管上部，则表明有抗原抗体反应，为阳性结果。如果发生凝胶管拖尾现象，分别用单克隆抗-E、抗-C、抗-c、抗-e再次进行确认试验。Rh阴性者分别用三批IgG抗D鉴定。（2）吸收放散试验：用人源抗-c、抗-e分别做吸收放散试验，以确认患者红细胞上是否存在-c、-e抗原，采用37℃吸收60min，氯仿放散，放散液与筛选细胞用微柱凝胶卡检测是否存在相应的抗体。

1.5统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

本次调查显示，在浙江地区RhD阳性人群中，Rh表型分布规律为CCDee＞ CcDEe＞ CcDee＞ ccDEE＞ccDEe＞CCDEe＞ CcDEE＞ ccDee＞ CCDEE，频率分别为41.50% 、36.77%、10.46%、5.83%、3.68%、0.93%、0.51%、0.31%和0.003%。RhD阴性人群中，Rh表型分布规律为Ccdee＞ ccdee＞ CCdee＞ ccdEe＞ CcdEe，频率分别为45.52＞38.81＞5.97＞5.22＞4.48。

2.1ABO、RH表型的基本分布情况 见表1。

表1　ABO、RH表型的基本分布情况［n（%）］

2.2C、E表型分布与性别的关系 见表2。

2.3C、E表型分布与D抗原关系 见表3。

表3　C、E表型分布与D抗原关系［n（%）］

3　讨论

Rh血型在已发现的30个红细胞血型系统中是抗原数量最大和最具有复杂多态性的血型系统，包含国际输血协会认证的Rh1～Rh57之间已发现的50个血型抗原［1］。其具有复杂核苷酸多态性的两个基因编码（5个）与输血和新生儿溶血病相关的主要抗原：RHD编码D（RH1）抗原，RHCE编码C（RH2）、E（RH3）、c（RH4）和 e（RH5）抗原，以及其余45个低频和高频抗原［3］。用抗-D、抗-C、抗- c、抗-E、抗-e 能区分18个最常见表型。由于遗传性状、民族和地区的差异，其分布具有显著的人种和地域差异［3，4］。Rh阳性人群中，浙江汉族人群具有所有9种Rh阳性表型，其中包含用吸收放散试验证实的罕见的CCDEE型。CCDEE表型的基因型可为DCE/DCE或DCE/dCE。基因型的推断依赖于相关人群中的单体型频率。但不同人群的单体型频率有较大差异，Rz（DCE）和ry（dCE）单体型在任何人群中均很罕见，有待PCR-SSP实验基因检测的进一步证实。在Rh阳性人群中，浙江汉族优势表型是CCDee（41.5%）和CcDEe（36.77%），与文献报道基本一致［4，5］。本资料中，Rh血型与性别分组、ABO血型系统分组之间无明显差异。Rh阳性与Rh阴性的人群调查中表型的频率分布差异有统计学意义（P＜0.01），Ccdee、ccdee为Rh阴性人群的高频抗原，均是Rh阳性人群的低频抗原，可为临床输血中稀有血型同表型输注提供依据。

根据《临床输血技术规范》的要求，各基层医院均开展了D抗原的检测，但对C、E、c、e的常规检测目前尚属空白，其随机输注给这些因子提供了免疫机会，患者若接受这些抗原的血液，可刺激机体产生相应的不规则抗体。当患者再次接受含有此抗体的血液时，可引发迟发型溶血性输血反应。在临床随机输血引起的配血不合原因中，Rh血型系统的免疫抗体占50.75%（抗-D 除外），常见的Rh 系统免疫抗体有抗-E、抗-e、抗-C、抗-c 以及复合抗体抗-Ce 和抗-cE。从表1可以看出，CCee表型属于高频表型，反复输血患者在随机输血中分别有57.73%、47.55%和46.50%的可能产生抗-c、抗-E或抗-c+ E 抗体，存在着高度引发输血反应的潜在风险，需寻找与自身相同表型的安全血液输注。但对于低频表型ccEE 和极低频表型CCEe、CCEE 的患者同表型输血相当困难，病情紧急时，甚至危及生命。鉴于Rh表型的这种分布多态性决定了其在临床输血中的重要性和复杂性，因此建议采用计算机系统建立浙江地区人群Rh血型表型数据库，并建立稀有表型档案，以满足特殊人群抢救用血需要。

［1］Koelewijn J M，VrijkotleR T G，Vander School CE.Effect of screening for red cell anti-bodies other than anti-D to detect hemolytic disease of the foetus and newborn. A postulation study in Netherlands. Transfusion，2009，48（5）：941～952.

［2］杜肖刚，王丽荣，武洪琳.长治地区住院患者ABO及Rh血型分布调查分析.长治医学院学报，2013，27（3）：182～184.

［3］Pham BN，Peyrard T，Juszczak G.Analysis of RhCE variants among 806 individuals in France： considerations for transfusion safety，with emphasis on patients with sickle cell disease.Transfusi on，2011，51（6）：1249～1260.

［4］王爱梅，丁玉琴，马凤巧.豫西南地区汉族人群ABO及Rh血型分布调查.实用预防医学，2005，12（3）：581～582.

［5］刘亚普.濮阳市人群ABO及Rh血型分布调查.临床医学，2003，23（3）：58.

Objective To study the distribution of Rh blood group system of Zhejiang area and build Rh phenotype library， helping local blood center to establish rare phenotype blood library， and guide clinical reasonable blood preparation. Methods Using micro column gel cards to detect transfusion patients' Rh phenotypes including D， C， E， c， and e. Results 29338 inpatients in Zhejiang area were effective and analysed， Data showed that positivity rate of D antigen was 99.54%， meanwhile C antigen was 89.51% and E antigen was 47.56%. The phenotype distribution in RhD positive was CCDee＞ CcDEe＞ CcDee＞ ccDEE＞ ccDEe＞ CCDEe＞ CcDEE＞ ccDee＞ CCDEE， however in RhD negative phenotype was Ccdee＞ ccdee＞ CCdee＞ccdEe＞ CcdEe. Conclusion We showed the distribution of Rh blood group system in Zhejiang area， to provide the data basis for reasonable blood usage and Rh matched blood supply in time， avoid the generation of high-frequency antibodies. These results have important clinical signifi cances for ensuring the reasonable and safety blood usage.

Hospitalized patients Rh phenotype Investigation and analysis

310014 浙江省人民医院