曙红Y探针共振瑞利散射法测定盐酸二甲双胍

2016-10-16李俊波杨小丽杨金香来丽娜刘学慧

分析科学学报 2016年3期

李俊波，杨小丽，杨金香*，来丽娜，刘学慧

(长治医学院药学系，山西长治 046000)

盐酸二甲双胍(Metformin Hydrochloride，MFH)是口服双胍类降糖药，可增加机体对胰岛素的敏感性，同时增强外周组织对葡萄糖的摄取和利用，从而达到降糖的目的，是治疗非胰岛素依赖型糖尿病的主要药物[1]。目前，测定MFH的方法主要有电位滴定法[2]、紫外分光光度法[3]、毛细管电泳法[4]、高效液相色谱法[5]、电化学法[6]以及色谱-质谱联用方法[7]等。上述方法中，滴定分析法和紫外分光光度法仪器廉价、操作简便，但是对于痕量样品测定准确度、灵敏度较差；高效液相色谱法需要对样品进行前处理并大量使用有机溶剂，操作繁琐、分析时间较长；色谱-质谱联用方法仪器设备昂贵，操作要求和运行成本高。因此，发展简便、快速、高灵敏度测定MFH的新方法，对于研究药物作用机制、药物剂型，体内代谢过程、毒副作用等仍具有重要意义。

共振瑞利散射(Resonance Rayleigh Scattering， RRS)是近年来发展迅速的一种新的分析技术。由于其操作简便、灵敏度高、选择性好而被广泛应用于药物[8]、生物大分子[9]、无机离子[10，11]等的测定。但是，目前尚未见到运用RRS法测定盐酸二甲双胍的文献报道。本实验在pH=3.0的B-R缓冲溶液中，以曙红Y(Eosin Y，EY)为探针，研究并建立了测定痕量MFH的RRS新方法。实验表明，EY与MFH反应形成离子缔合物并在292 nm波长处有最大RRS峰，且在一定范围内，MFH的浓度与散射信号的增强呈良好的线性关系。该方法用于实际样品的测定，结果令人满意。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

日立F-4600型荧光分光光度计(日本，日立公司)；TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用公司)；pHS-3C型酸度计(上海精密科学仪器有限公司)。

MFH对照品储备溶液：精密称取适量MFH对照品(中国食品药品检定研究院)，用水溶解并稀释，配制成质量浓度为100 μg/mL储备溶液，使用时稀释成10 μg/mL；EY(天津市科密欧化学试剂有限公司)溶液：2.5×10-4mol/L。所用试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。

盐酸二甲双胍片(北京中惠药业有限公司，规格：0.25 g/tablet)。

1.2 实验方法

2 结果与讨论

2.1 RRS光谱

图1为MFH-EY体系的RRS光谱。由图1A可见，MFH和EY的RRS 均很微弱，二者在B-R缓冲体系中生成缔合物的RRS光谱却显著增强，其最大散射波长位于292 nm处。由图1B可知，最大散射波长处的RRS强度变化在特定范围内与MFH浓度变化呈线性关系。方法可用于MFH的定量测定。

图1 MFH、EY和MFH-EY的RRS光谱Fig.1 RRS spectra of MFH,EY and MFH-EY(A):1.MFH;2.EY;3.MFH-EY;cMFH=1.5 μg/mL,cEY=2.5×10-5 mol/L,B-R buffer system (pH=3.0);(B):MFH-EY; cEY=2.5×10-5 mol/L;cMFH (1-5):0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 μg/mL;B-R buffer system (pH=3.0).

2.2 反应条件的优化

2.2.1反应介质及用量考察了HAc-NaAc、HCl-NaAc和B-R缓冲溶液对体系散射强度的影响。结果表明：在pH=2.5～3.5范围内，使用B-R缓冲溶液时，体系的散射强度△IRRS较大，方法有较高灵敏度。故实验选取pH=3.0的B-R缓冲溶液作为反应介质，用量为1.0 mL。

2.2.3反应温度的影响考察了反应温度对于散射强度的影响。结果表明：反应温度≤18 ℃时，体系的散射强度较小，可能是由于反应进行较慢；反应温度为18～30 ℃时，散射强度达到最大且基本稳定；当反应温度>30 ℃时，散射强度随温度升高呈现显著降低趋势，当反应温度达到75 ℃时，基本测定不到体系的散射值。原因可能是离子缔合物是由静电引力和疏水作用力结合，随着温度的升高，分子热运动加剧，超过了静电引力和疏水作用力的束缚，离子缔合物解离，导致体系的△IRRS下降[12]。因此实验选择反应温度为室温(18～30 ℃)。

2.2.4反应时间及体系稳定性在优化条件下，考察了不同反应时间对体系稳定性的影响。结果表明：缔合反应在5 min内即可完成，稳定时间在2 h以上。为确保反应完全，实验选取反应时间为10 min。

2.3 标准曲线

在优化的反应条件下，测定了不同质量浓度的MFH与EY形成离子缔合物的△IRRS，并对MFH的质量浓度(c)进行线性回归，线性范围为0.05～2.5 μg/mL，线性回归方程为：△I=567.4c-167.9，相关系数为0.9996，方法的检出限(3σ)为0.02 μg/mL。

3 方法的选择性及分析应用

3.1 选择性

3.2 分析应用

3.2.1片剂中MFH的测定取20片MFH(规格0.25 g/tablet)，称重后粉碎，精密称取适量(约相当于盐酸二甲双胍100 mg)，置100 mL容量瓶中，加水适量，超声处理使之溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL至100 mL容量瓶中，加水定容后振摇。将10 mL此样品移至100 mL容量瓶中加水定容，振荡摇匀得到被测样品。取被测液1 mL，依照实验方法测定MFH含量，将测定结果与药典规定项下方法[3]比较，结果见表1。