铜绿假单胞菌耐药性分析及金属β-内酰胺酶检测

内蒙古妇幼保健院（010020）史今凡

铜绿假单胞菌是一种条件致病菌，随着抗菌药物的广泛应用，铜绿假单胞菌表现出多种抗菌药物的天然或获得性耐药[1]。及时了解铜绿假单胞菌的耐药及金属β-内酰胺酶的检测情况，对指导临床抗生素的合理使用尤为重要，因此我们拟对2015年1月～2015年10月我院检验科分离出的200株铜绿假单胞菌进行分析，将铜绿假单胞菌耐药性情况及金属β-内酰胺酶检测结果报道如下。

1 方法

1.1 细菌选择 收集2015年1月～2015年10月我院检验科分离出的铜绿假单胞菌，采取法国梅里埃公司的VITEK2 COMPACT全自动细菌鉴定仪及配套的药敏卡。以铜绿假单胞菌ATCC 27853为标准质控菌株，药敏试验采用Kirby-Bauer纸片扩散法，药敏结果参照美国临床和实验室标准化委员会颁布的标准判定。金属β-内酰胺酶采用纸片协同法进行测定。将待测菌涂布于琼脂平板，将2张亚胺培南纸片贴在平皿上，其中一张亚胺培南纸片上加入EDTA，抑菌圈直径较亚胺培南纸片增加6cm为阳性。

1.2 质控菌株 大肠埃希菌ATCC25922、VIM-2型金属β-内酰胺酶阳性的PA。

1.3 质量控制 要求参与本次研究的临床微生物室工作人员有扎实的理论基础，参加国家临床实验室质控考核并合格，并进行统一技术培训。

1.4 观察指标 根据金属β-内酰胺酶检测结果，将铜绿假单胞菌分为金属β-内酰胺酶阳性组（100株）与金属β-内酰胺酶阴性组（100株）。①分析200株铜绿假单胞菌的标本来源。②对比金属β-内酰胺酶阳性铜绿假单胞菌与金属β-内酰胺酶阴性铜绿假单胞菌的药敏结果。

1.5 统计学 研究数据录入 SPSS18.0分析系统，计数资料采用（n，%）表示，用χ2检验法，当P＜0.05，判断有统计学意义。

2 结果

2.1 200株铜绿假单胞菌标本来源 200株铜绿假单胞菌标本来源中以呼吸道标本来源最多、其次为尿液、引流管。其中呼吸道标本75株，黏液标本42株，引流管标本31株，血液标本28株，其他标本24株。

2.2 金属β-内酰胺酶阳性铜绿假单胞菌与金属β-内酰胺酶阴性铜绿假单胞菌药敏结果 金属β-内酰胺酶阳性铜绿假单胞菌与金属β-内酰胺酶阴性铜绿假单胞菌的药敏结果结果比较有差异（P＜0.05），见附表。

附表 金属β-内酰胺酶阳性铜绿假单胞菌与金属β-内酰胺酶阴性铜绿假单胞菌药敏结果

3 讨论

铜绿假单胞菌是人体最重要的条件致病之一，可引起机体多系统、多脏器、多部位感染。有研究显示ICU为铜绿假单胞菌感染的高危科室，主要与ICU患者抵抗力低，基础疾病多、病情危重有关。

铜绿假单胞菌的耐药复杂，与以下途径有关：①产生抗菌活性酶，如β-内酰胺酶、氨基糖苷钝化酶、头孢菌素酶、超光谱β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶等；②通过改变DNA回旋酶和DNA拓扑异构酶IV，使喹诺酮类抗菌药物作用的靶目标发生改变。③通过改变整合酶基因编码的整合酶不断地从周围环境中捕获和积累耐药基因盒，形成巨大的耐药基因多基因座。④改变细胞壁的内膜和外膜，使膜通透性降低，尤其是造成外膜微孔蛋白 OprD2的缺乏，可引发对亚胺培南耐药[2]。⑤定植的细菌经繁殖增多后，使生物被膜结构成熟，促进细菌黏附到物体表面并维持细菌的群落状态；⑥主动外排系统形成，以MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEFOprN、MexXY-OprM最为多见，随时将抗菌药物泵出和排出体外。

金属β-内酰胺酶的产生是引起铜绿假单胞菌耐药的重要机制。同样本次研究发现金属β-内酰胺酶阳性铜绿假单胞菌与金属β-内酰胺酶阴性铜绿假单胞菌的药敏结果结果比较有差异（P＜0.05）。金属β-内酰胺酶分为4类：①ESBLs 我国铜绿假单胞的ESBLs基因型以TEM-10、TEM-12、CTX-M型较多见，能水解临床上大部分第三代头孢菌素。②MBLs，有IMP、VIM、GIM、SPM、GIM、AIM型，能水解除单环类以外的所有β-内酰胺类药物的能力，常对氨基糖苷类协同耐受。③AmpC酶，能水解第一到第三代头孢菌素、单环类抗生素，且不能被克拉维酸、他唑巴坦、舒巴坦等酶抑制剂所抑制。④OXA型酶，可以水解青霉素G，氨苄西林、阿莫西林、氯唑西林、亚胺培南等，但不能水解氨基噻吩、头孢菌素和单环β-内酰胺类抗生素。

综上所述，本次研究认为金属β-内酰胺酶阳性的铜绿假单胞菌耐药性强，耐药机制复杂，临床中医生应该及时根据细菌药敏结果调整抗菌药物。