不同色谱柱测定阿莫西林胶囊有关物质的差异性研究

冯四平

（延安市人民医院，延安 723000）

不同色谱柱测定阿莫西林胶囊有关物质的差异性研究

冯四平

（延安市人民医院，延安 723000）

目的：研究不同色谱柱测定阿莫西林胶囊有关物质的差异性。方法：柱温、检测波长、流速分别为30℃、254nm、1.0ml/min，流动相A、B分别为0.05 mol / L 磷酸盐缓冲液-乙腈（99：1）、0.05 mol / L 磷酸盐缓冲液-乙腈（80：20）。结果：在4个厂家样品中，色谱柱3均具有最大的杂质检出量，而在A、C、D3个厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的最大杂质检出量，在B厂家样品中，色谱柱2具有较小的最大杂质检出量，色谱柱1、4则具有相似的最大杂质检出量；总杂质的检出情况基本类似于最大杂质的检出情况。在4个厂家样品中，色谱柱3具有最大的总杂质检出量和最多的检出杂质峰，色谱柱2具有最小的总杂质检出量。在A厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的总杂质检出量，在C、D厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的总杂质检出量，在B厂家样品中，色谱柱2具有较小的总杂质检出量，色谱柱1、4具有相似的总杂质检出量。结论：不同色谱柱测定阿莫西林胶囊有关物质具有较大的差异，从总体上来看，色谱柱3最好。

不同色谱柱；阿莫西林胶囊；有关物质；差异性

阿莫西林属于青霉素类抗生素，对多种细菌的抗菌作用良好，如链球菌属、沙门菌属等，因此其被临床当做基本药物得到了日益广泛的应用［1］。药品不良反应一方面会在人的个体差异的影响下发生，另一方面也会在生产、应用阿莫西林制剂等过程中将杂质引入的情况下发生［2］。长期检验工作表明［3］，在阿莫西林制剂有关物质含量的检测中，色谱柱厂家及型号不同，那么所得结果就有差异。本研究通过各种色谱柱对阿莫西林胶囊有关物质进行了考察，将能将有关物质最大量地检出来的色谱柱筛选了出来，现报告如下。

1 资料与方法

所用仪器包括紫外检测器和Agilent 1260型高效液相色谱仪，所用试药为中国食品药品检定研究院生产的阿莫西林对照品（含量：86.9%，批号：130409-200810），分别用A、B、C、D为4个厂家生产的阿莫西林胶囊编号，将色谱纯设定为乙腈，将分析纯设定为其余试剂。

2 结果

2.1 色谱条件 色谱柱1：Agilent Zorbax SB-C18 柱，色谱柱2：Waters Sun Fire 柱，色谱柱3：Thermo ODS Hypersil柱，色谱柱4：Phenomenex Luna 5 μ C18 柱，规格分别为250 mm×4.6 mm，5 μm，150 mm×4.6 mm，5 μm，250 mm×4.6 mm，5 μm，250 mm×4.6 mm，5 μm，柱温、检测波长、流速分别为30℃、254 nm、1.0 mL/min，流动相A、B分别为0.05 mol / L 磷酸盐缓冲液-乙腈（99：1）、0.05 mol / L 磷酸盐缓冲液-乙腈（80：20），其中0.05 mol / L 磷酸盐缓冲液的制备方法为用2mol/L氢氧化钾溶液调节0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液的pH值为5.0。完成洗脱阿莫西林峰后进行梯度洗脱，方法具体见表1。

表1 流动相线性梯度洗脱表

2.2 溶液制备 对照品溶液的制备：取阿莫西林对照品10 mg左右，精密称定，置100 mL容量瓶中，加流动相A稀释至刻度，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取供试品内容物，精密称定，临用前加流动相A溶解并定量稀释制成每1 mL中含2.0 mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 A样品有关物质检测 有效检测样品A，检测过程中严格依据拟定色谱条件，结果具体见图1。

图1 不同色谱柱测定样品A高效液相色谱图

2.4 最大杂质检测 取对照品溶液和供试品溶液进行进样试验，试验过程中严格依据色谱法，定量的依据是在一定浓度范围内，浓度与峰面积（或峰高）成正比。一般单个杂质超过0.02%就需要做杂定鉴定［4］。结果显示，在4个厂家样品中，色谱柱3均具有最大的杂质检出量，而在A、C、D3个厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的最大杂质检出量，在B厂家样品中，色谱柱2具有较小的最大杂质检出量，色谱柱1、4则具有相似的最大杂质检出量。具体见表2。

2.5 总杂质检测 取对照品溶液和供试品溶液进行进样试验，试验过程中严格依据相关方法［5］。结果显示，总杂质的检出情况基本类似于最大杂质的检出情况。在4个厂家样品中，色谱柱3具有最大的总杂质检出量和最多的检出杂质峰，色谱柱2具有最小的总杂质检出量。在A厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的总杂质检出量，在C、D厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的总杂质检出量，在B厂家样品中，色谱柱2具有较小的总杂质检出量，色谱柱1、4具有相似的总杂质检出量。具体见表3。

3 讨论

阿莫西林属于青霉素类抗生素，具有广谱性和半合成性，将一个对位羟基引入了氨苄西林分子的苯环上，使其在胃酸中具有更高的稳定性，口服吸收具有更高的安全性［6］。在以往的质量标准中，没有对阿莫西林胶囊有关物质的质量提出特殊要求，但是随着我国药品质量标准的不断提升，对抗生素有关物质提出了越来越高的要求［7］。2005年版的《中国药典》将阿莫西林胶囊有关物质检查添加在了其质量标准中［8］。有关物质检查包括两种类型，一种为检查指定物质，另一种为检查未指定物质，2-羟基-3-（4-羟基）本吡嗪、4-羟基苯甘氨酸、（2S，6R）-阿莫西林酸等均是阿莫西林的主要有关物质，而检查未指定物质是检查阿莫西林胶囊有关物质的主要方面［9］。

表2 最大杂质检测结果

表3 总杂质检出结果

现阶段，在药品质量控制过程中，各国药典广泛采用的一个重要手段就是反相高效液相色谱法，其基础为硅烷键合硅胶色谱柱［10］。《中国药典》较为详尽地描述了高效液相色谱法的溶液配置及流动相，但是通常情况下只指明了色谱柱的填料大类［11］。在实验过程中，很多杂质峰会在具有较长的洗脱时间的情况下发生，其诱发因素包括样品本身杂质、溶剂等，因此在进样试验过程中应该选择空白进样，只有这样才能将溶剂引发的杂质峰的影响有效消除掉。同时，还会有很多负峰发生在实验图谱中，因此，在计算结果的过程中应该有效扣除这些负峰峰面积［12］。本研究结果表明，在4个厂家样品中，色谱柱3均具有最大的杂质检出量，而在A、C、D3个厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的最大杂质检出量，在B厂家样品中，色谱柱2具有较小的最大杂质检出量，色谱柱1、4则具有相似的最大杂质检出量；总杂质的检出情况基本类似于最大杂质的检出情况。在4个厂家样品中，色谱柱3具有最大的总杂质检出量和最多的检出杂质峰，色谱柱2具有最小的总杂质检出量。在A厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的总杂质检出量，在C、D厂家样品中，色谱柱1、2、4具有相似的总杂质检出量，在B厂家样品中，色谱柱2具有较小的总杂质检出量，色谱柱1、4具有相似的总杂质检出量，充分说明了不同色谱柱测定阿莫西林胶囊有关物质具有较大的差异，阿莫西林有关物质的质量控制受到色谱柱的直接而深刻的影响。针对这一情况，在对阿莫西林胶囊有关物质进行检测的过程中应该给予色谱柱的选择以充分重视。

总之，不同色谱柱测定阿莫西林胶囊有关物质具有较大的差异，从总体上来看，色谱柱3最好，值得充分重视。

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Differences study of Amoxicillin related substances between different columns

Feng Si-ping
（Yanan People’s Hospital Yanan 723000， China）

Objective To study the differences of Amoxicillin related substances between different columns. Methods Column， detection wavelength， the flow rate were 30 ℃， 254nm， 1.0 mL / min， mobile phase A， B were 0.05 mol / L phosphate buffer -acetonitrile （99：1）， 0.05 mol / L phosphate buffer solution - acetonitrile （80：20）， respectively. Results In 4 samples factories， columns 3 had maximum detectable amount of impurities， and in A， C， D3 factories samples， column 1，2，4 impurities had similar maximum detectable amount， in B Manufacturers sample， column 2 had smaller maximum detectable amount of magazines， columns 1，4 had similar maximum impurity detection limit； total impurities in detection of maximum impurity detection substantially similar situation. In 4 factories samples， column 3 had the largest and most detectable amount of total impurities of impurity peaks were detected， column 2 had the smallest detectable amount of total impurities. A factory in the sample， columns1，2，4 had similar total impurity detectable amount， in C， D manufacturers sample， columns 1，2，4 had similar amount of total impurities detected in the sample B factory in column 2 had smaller amount of total impurities detected， columns 1，4 had similar amount of total impurities detected. Conclusion Different columns have greater difference in the detection of amoxicillin related substances， on the whole， the best is column 3.

Different columns； Amoxicillin； Related substances； Differences

R927.2

A

1673-016X（2016）01-0136-03

2015-06-10

冯四平，E-mail:yxylw002@163.com