H PLC测定清平颗粒中人参皂苷Rg1的含量

石晶萍　洪丽萍

（扬子江药业集团有限公司质量管理部质量检测中心，江苏 泰州225321）

H PLC测定清平颗粒中人参皂苷Rg1的含量

石晶萍洪丽萍

（扬子江药业集团有限公司质量管理部质量检测中心，江苏 泰州225321）

目的：建立高效液相色谱法测定清平颗粒中人参皂苷Rg1含量。方法：色谱柱为Agilent ZORBX Eclipse plus C18（4.6 mm×100 mm，3.5 μm），流动相：乙腈（A）-水（B），检测波长：203 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：25℃，进样量：10 μL。结果：人参皂苷Rg1在0.013 2～0.423 0 mg/mL范围内呈良好线性关系，r=1.000 0；回收率：98.0%，RSD：0.3%。结论：该测定方法操作简便，准确可行，可用于清平颗粒中人参皂苷Rg1的定量分析。

高效液相色谱法；清平颗粒；人参皂苷Rg1；含量测定

清平颗粒（成分：羚羊角、赭石、石决明、钩藤、菊花、地黄、女贞子、地龙、川牛膝、天南星（毒）、三七、黄芩、桃仁、玄参、石膏、槐花、薄荷脑）功能：滋阴潜阳，化瘀通络。用于阴虚阳亢或肝阳上亢型高血压，有效改善头痛、眩晕、心悸等症状。人参皂苷Rg1是其主成分三七的主要有效成分之一［1］，具有明显的抗炎、镇痛作用，具有促进海马神经元突起生长，提高神经可塑性，增强学习能力与记忆力，抗衰老，抗疲劳，提高免疫力，辅助抗肿瘤，修复性功能等作用，在高端保健、辅助抗肿瘤、防治老年痴呆等神经退行性疾病方面具有广阔的应用前景［2］。其抗氧化作用、抑制NO合成及抑制辣椒素受体激活可能是其发挥作用的机制［3］。

由于清平颗粒的原质量标准（国家食品药品监督管理总局国家药品标准 WS-5247（B-0247）-2014Z）含量测定主要测定清平颗粒的人参皂苷Rg1含量，所以本研究仅针对清平颗粒中主活性成分之一人参皂苷Rg1定量检测开展相关方法学研究。由于原质量标准的含量测定方法是采用薄层扫描法，考虑到薄层扫描法的准确性和重现性较差，现在药典已较少采用，为保证清平颗粒含量测定数据的准确性，本研究参考《中国药典》（2015年版）［4］的高效液相色谱法（HPLC）的相关要求，对清平颗粒中人参皂苷Rg1含量测定的方法进行了研究和方法学验证，结果表明该测定方法准确可行，可用于人参皂苷Rg1的定量分析。现报道如下。

1 试药和试液

清平颗 粒（批号：15010241，15010341，15010541，规格：12 g/袋）；人参皂苷 Rg1（批号：110703-201529，含量95.0%，中国食品药品检定研究院提供）；甲醇（批号：20130609）、正丁醇（批号：20131025）、氨水（批号：20131108），均由国药集团化学试剂有限公司提供；乙腈（色谱纯，批号：I729430409，Merck）。

2 仪器

美国安捷伦公司的Agilent 1200高效液相色谱仪和 Agilent 1260高效液相色谱仪，瑞士梅特勒公司Mettler Toledo XP205电子天平，昆山市超声仪器有限公司的KQ-250B超声仪，上海索普仪器公司的DZF-6050型真空干燥箱。

3 方法与结果

3.1 色谱条件

色谱柱：AgilentZORBXEclipseplusC18（4.6 mm×100 mm，3.5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B）；检测波长：203 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；进样量：10 μL，流动相的比例见表1。

表1 流动相比例

3.2 溶液配制方法

3.2.1 对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得，对照品溶液色谱图见图1。

图1 人参皂苷Rg1对照品溶液HPLC图

3.2.2 供试品溶液的制备取本品（批号：15010241）内容物约 2.0 g，研细，精密加入甲醇50 mL，超声（250 W，40 kHz）30 min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 mL，蒸干，残渣加水20 mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇层，再用氨试液充分洗涤2次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30 mL，合并正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，供试品色谱图见图2。

图2 供试品溶液HPLC图

3.3 系统适用性、精密度、专属性考察

样品溶液准备：按“3.2”项下方法配制人参皂苷Rg1对照品溶液、供试品溶液，进样顺序：空白溶剂（甲醇），人参皂苷 Rg1对照品溶液，供试品溶液，理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6 000。对照品与供试品理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算均不低于6 000，分离度大于1.5，系统适用性符合要求，结果见表2。

表2 系统适用性考察

3.4 线性关系考察试验

精密称取人参皂苷Rg1对照品11.13 mg，加甲醇制成浓度为0.423 mg/mL的对照品母液，逐级稀释成浓度分别为 0.211 0，0.106 0，0.052 9，0.026 4，0.013 2 mg/mL的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品系列溶液各10 μL，由低浓度至高浓度进样。按“3.1”项下色谱条件进行测定。

以对照品浓度（mg/mL）为横坐标，对照品峰面积为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，结果见表3，表明人参皂苷Rg1在0.013 2～0.423 0 mg/mL范围内线性关系良好。

表3 线性结果

3.5 重复性试验

精密称取批号为：15010341的清平颗粒6份，称样量分别为：1.998 1，2.001 4，2.001 1，2.006 4，1.997 2，2.009 8 g，按照“3.2.2”项下制备方法制备供试品溶液，进行测定。计算药品中人参皂苷Rg1含量和RSD值，具体数值见表4。结果表明，供试品中人参皂苷 Rg1平均含量为 0.64 mg/g，RSD=1.4%，该方法重复性良好。

表4 重复性试验

3.6 准确度试验

对照品溶液：精密称取人参皂苷 Rg1对照品13.00 mg，加甲醇制成浓度为0.012 mg/mL的加样回收对照品溶液。

供试品溶液：采用加样回收法，精密称取9份已知含量同一批号的样品（批号：15010341），称样量分别为：1.009 0，1.004 5，1.002 2，1.007 7，1.009 8，0.991 6，1.003 3，1.004 9，0.999 8 g；前3份样品分别精密加入上述加样回收对照品溶液25 mL，中间3份样品分别精密加入上述加样回收对照品溶液50 mL，后3份样品分别精密加入上述加样回收对照品溶液75 mL，按照“3.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备。分别吸取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪进行测定，按以下公式计算回收率，结果见表5。

表5 回收率试验结果

回收率 （%）=（实测人参皂苷Rg1质量－样品中人参皂苷Rg1质量）/加入人参皂苷Rg1对照品质量 ×100%。

结果表明，供试品中人参皂苷 Rg1平均回收率为98.0%，RSD=0.3%，该方法回收率良好。

3.7 中间精密度试验

另一位实验人员使用另一台仪器，使用不同色谱柱Agilent ZORBX Eclipse plus C18（4.6 mm× 100 mm，3.5 μm），SN（序列号）：USUXR07971，精密称取批号为 15010341的清平颗粒 6份，称样量分别为：2.003 1，2.003 6，2.005 1，2.006 5，2.001 5，2.004 9 g，按照“2.1.2”项下的制备方法制备供试品溶液，进行测定。计算药品中人参皂苷Rg1含量、RSD；结果见表6，RSD为1.6%，表明该方法中间精密度良好，随机变动因素对实验结果影响较小。

表6 中间精密度试验结果

4 讨论

在其他条件不变的情况下，分别改变溶液放置时间、流速、柱温、检测波长及流动相比例，考察实验条件的微小变动对结果的影响。

4.1 稳定性试验

精密称取人参皂苷Rg111.91 mg，称取批号为15010341的清平颗粒1.999 4 g，按照“2.1”项下溶液配制方法配制对照品溶液和供试品溶液，分别于配制后0，2，4，8，12，16，24 h进行测定。

计算出对照品峰面积RSD为1.1%，供试品峰面积RSD为1.4%，表明对照品溶液和供试品溶液在24小时内稳定，见表7。

表7 稳定性试验结果

4.2 色谱条件改变

取批号为15010541的清平颗粒，在其他条件不变的情况下，分别改变柱温、检测波长、流速及流动相比例，考察微小变动对试验结果的影响。试验结果见表8。

结果表明，测定条件有小的变动对测定结果基本无影响。

表8 色谱条件微小变动影响结果

5 结论

通过对清平颗粒中人参皂苷Rg1含量测定的方法进行方法学验证，并通过改变溶液放置时间、流速、柱温、检测波长及流动相比例后的试验结果表明对测定结果无影响，可以确定HPLC专属性强，准确可行，可以用于清平颗粒中主活性成分人参皂苷Rg1的定量分析。

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［2］ 张均田.人参冠百草［M］.2版.化学工业出版社，2012：95-98.

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［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015年版）四部［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：59-60.

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Determination of Ginsenoside Rg1Content in Qingping Keli by HPLC

Shi Jingping，Hong Liping（Yangtz River Pharmacitical Group Co.，Ltd，Jiangsu Taizhou 225321，China）

Objective：To establish a HPLC method for determination of ginsenoside Rg1content in qingping keli. Methods：Separation was carried out on an Agilent ZORBX Eclipse plus C18（4.6 mm×100 mm，3.5 μm）column using acetonitrile（A）-water（B）as mobile at a detection wavelength of 203 nm and a flow rate of 1.0 mL/min.The column temperature was 25℃ while the sample load was 10 μL.Results：The linear range of ginsenoside Rg1concentration was 0.013 2～ 0.423 0 mg/mL（r=1.000 0）.The average recovery of sample was 98.0%，with a RSD of 0.3%. Conclusion：This method is simple，accurate and feasible，which may be used for the quantitative determination of ginsenoside Rg1in qingping keli.

HPLC；Qingping Keli；Ginsenoside Rg1；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.09.006

2016-05-03）

洪丽萍，女，执业药师。研究方向：药物分析和标准研究。通讯作者E-mail：hongliping@yangzijiang.com