藤梨根药材中多糖的含量测定及不同来源样品质量评价

王亚琼温芝琪钟水生张华峰

（1苏州市食品药品检验所，江苏 苏州 215104；2苏州大学药学院，215123）

藤梨根药材中多糖的含量测定及不同来源样品质量评价

王亚琼1温芝琪2钟水生1张华峰1

（1苏州市食品药品检验所，江苏 苏州 215104；2苏州大学药学院，215123）

目的：研究藤梨根药材中多糖的提取及含量测定方法，以评价藤梨根药材的质量。方法：采用水提醇沉法提取多糖，用苯酚-硫酸法，在485 nm处测定不同来源藤梨根多糖的含量。结果：原药材多糖含量为24.37～56.96 mg/g，商品药材多糖含量为8.53～22.49 mg/g，原药材中多糖含量明显高于市售饮片中多糖的含量，皮部多糖的含量是木部的2～4倍。结论：该方法简单，准确，重复性好，可作为藤梨根药材的质量控制方法。

藤梨根；多糖；苯酚-硫酸法；含量测定；来源；质量评价

多糖是藤梨根中的重要抗肿瘤成分，具有显著的生物学活性［1-3］。然而，目前关于藤梨根多糖含量的评价分析研究报道甚少。多糖的定量方法一般有苯酚-硫酸法，蒽酮-硫酸法及3，5-二硝基水杨酸比色法等。苯酚-硫酸法原理是糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛可与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在一定范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485 nm左右波长处有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。由于苯酚-硫酸显色反应稳定性更好［4-6］，方法较为简单，快速，因此本实验采用苯酚-硫酸法测定藤梨根药材中多糖的含量。

1 仪器、试剂及材料

1.1 仪器

DFY-300粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；标准药筛（辽宁省辽阳金属制品厂）；电热恒温水浴锅（上海跃进医疗器械有限公司）；Lambda 35紫外分光光度计（Perkin Elmer，USA）；Sorvall ST 8台式离心机（Thermo，USA）；AG245电子天平（METTLER，Switzerland）。

1.2 试剂

无水乙醇，苯酚及硫酸均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。超纯水（Millpore，USA）。

1.3 材料

D-无水葡萄糖（批号：110833-201205，中国食品药品检定研究院），3批藤梨根原药材分别产自安徽大别山，南京六合，福建宁德，由苏州市食品药品检验所鉴定为中华猕猴桃（Actinidia chinensis Planch.）的干燥根。其他商品药材均来源于市场。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液制备

取供试药材细粉 2 g，精密称定，加超纯水60 mL沸水浴热回流，放冷后，3 500 rpm/min离心5 min，精密量取上清液2 mL，置15 mL离心管中，精密加入无水乙醇，摇匀，冷藏过夜，取出，7 000 rpm/min离心5 min，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。

2.2 对照品溶液的制备

取D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1 mL含90 μg的溶液，即得。

2.3 最大波长的确定

取适量对照品溶液及样品溶液测定全波长扫描图，如图1，因此选择485 nm为测定波长。

2.4 测定

精密量取供试品溶液1.0 mL，置10 mL具塞试管中，精密加入5%苯酚溶液1 mL（临用配制），摇匀，再精密加入硫酸5 mL，摇匀，置沸水浴中加热20 min，取出，置冰浴中冷却5 min，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》（2015年版）四部通则 0401）［7］，在 485 nm的波长处测定吸光度。

图1 全波长扫描图

2.5 多糖提取条件优化

根据文献报道［4-6］，并结合实验的实际情况，针对浸提时间，浸提次数，醇沉倍数及时间进行考察，以确定提取多糖的最佳实验条件。

2.5.1 提取时间供试品按“2.1”方法分别浸提1，2，3，4，5，6 h后，按“2.4”方法测定，结果如图2，发现在3 h内，多糖含量呈递增趋势，但随时间延长，多糖的溶出达到平衡状态，因此浸提时间选择为3 h。

图2 提取时间考察

2.5.2 浸提次数供试品按“2.1”方法分别浸提1，2，3次，按“2.3”方法测定，结果发现 2次及 3次提取后多糖含量并无显著增加，1次已能将样品中的多糖基本提取完全。

2.5.3 醇沉倍数供试品按“2.1”方法分别以2，3，4倍体积的无水乙醇沉淀，按“2.4”方法测定，结果如图3，发现3倍体积的沉淀含量最大，因此选用3倍体积的无水乙醇沉淀多糖。

图3 醇沉倍数

2.5.4 醇沉时间供试品按“2.1”方法加入3倍体积的无水乙醇沉淀后分别于0，1，2，4，6，18 h后离心，按“2.4”方法测定，结果如图4，发现1小时后，沉淀的多糖量已达平衡。

2.6 稳定性

取3批供试液，于停止反应后0，0.5，1，2，4，6 h按“2.4”方法测定，结果如图5，发现供试液在冰浴中更加稳定，以1 h内完成测定为宜。

图4 醇沉时间

图5 供试液稳定性

2.7 线性关系的考察

精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分别置10 mL具塞试管中，各加水补至1.0 mL，按“2.3”方法测定。以质量浓度C（mg/mL）为横坐标，吸光度A为纵坐标做标准曲线，得回归方程：

A=11.95C－0.048，

r2=0.999，表明在0.018 17～0.090 85 mg/mL浓度范围内呈良好线性。

2.8 精密度

精密量取高、中、低浓度对照品溶液（浓度分别为0.090 85，0.054 51，0.018 17 mg/mL）及样品溶液，按“2.4”方法测定，结果对照品RSD分别为0.27%（高），0.16%（中）及0.08%（低）。样品RSD 为0.54%。

2.9 重复性

取同一批样品6份制备供试液，按“2.4”方法测定，结果RSD为4.22%。

2.10 回收率

于苯酚-硫酸反应前样品溶液中分别加入适量D-无水葡萄糖，按“2.4”方法测定，结果见表1，高、中、低平均回收率分别为97.54%，100.32%及95.56%。

表1 分析方法回收率　（%）

2.11 样品测定

将收集的12批商品药材及3批自采原药材按“2.1”方法制备，“2.4”方法测定，结果如表2。

表2 样品多糖含量

3 讨论

3.1 苯酚-硫酸法是测定多糖常用的方法，但苯酚不稳定，需要临用现配，同时需要严格控制反应时间，精确到秒，反应结束后立即放入冰浴中保存待测。

3.2 藤梨根的商品药材和自采原药材有着较大的差别，由于藤梨根的根部较难挖取，商品药材往往采用的是靠近根茎的部位（地表附近），在木质部多数带有小孔，即根茎类药材特有的髓部。从测定结果可以看出商品药材的多糖含量普便偏低，同时，自采原药材的皮部与木部比例也普遍略高于商品药材，多糖的测定结果显示，皮部多糖的含量是木部的2～ 4倍。根据藤梨根的来源，根茎并非药用部位，进一步规范药材市场上藤梨根的药用部位来源，对于保证药材的质量和用药安全具有重要的意义。

［1］张昕.藤梨根多糖的分离纯化与活性研究［D］.杭州：浙江大学，2010：58-60.

［2］ 龙凯花，王小平，白吉庆，等.中药藤梨根抗肿瘤研究［J］.中国现代中药，2013，15（10）：846-849.

［3］ 赫军，马秉智，赵铁，等.藤梨根的化学成分研究［J］.中国药学杂志，2014，49（3）：184-186.

［4］ 郝旭亮，张永文.中药质量标准中建立多指标含量测定的必要性浅析［J］.中国执业药师，2009，6（9）：31-33.

［5］ 钟方晓，任海华，李岩.多糖含量测定方法比较［J］.时珍国医国药，2007，18（8）：1916-1917.

［6］ 张媛媛，张彬.苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法测定绿茶茶多糖的比较研究［J］.食品科学，2016，37（4）：158-163.

［7］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015年版）四部［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：38-40.

Determination of Polysaccharide Content in Radix Actinidiae Chinensis and Quality Evaluation of Samples from Various Origins

Wang Yaqiong1，Wen Zhiqi2，Zhong Shuisheng1，Zhang Huafeng1（1 Suzhou Institute for Food and Drug Control，Jiangsu Suzhou 215104，China；2 School of Pharmacy，Suzhou University，215123）

Objective：To investigate the method for extraction and content determination of polysaccharide in radix actinidiae chinensis so as to evaluate the quality of the drug material.Methods：The polysaccharide was extracted by water and precipitated by ethanol，and determined for polysaccharide content by phenol-sulfuric acid method at 485 nm. Results：The content of polysaccharide was 24.37～ 56.96 mg/g in crude drug substance，and 8.53～22.49 mg/g in commercial pieces.The content of polysaccharide in crude drug substance was significantly higher than that in commercial pieces，and was 2～4 times higher in cortex than in xylem.Conclusion：This method is simple，accurate and reproducible，which may be used for quality control of radix actinidiae chinensis.

Radix Actinidiae Chinensis；Polysaccharide；Phenol-sulfuric Acid Method；Content Determination；Origin；Quality Evaluation

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.09.005

2016-04-27）

苏州市科技局科技计划项目（SYSD2013139，SYS201584）

王亚琼，女，主管中药师。主要从事中药质量评价相关问题研究。通讯作者E-mail：317888898@qq.com