高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量及均匀度

曹玉明

(安徽新和成皖南药业有限公司，安徽 宣城　242000)



高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量及均匀度

曹玉明

(安徽新和成皖南药业有限公司，安徽 宣城242000)

目的建立小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量及均匀度的检测方法。方法采用高效液相色谱法对小儿氨酚黄那敏颗粒中的马来酸氯苯那敏含量及均匀度进行测定。以shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱为固定相；甲醇-0.01 mol·L-1辛烷磺酸钠溶液(三乙胺调节pH值至3.0，63∶37)为流动相；流速为1 mL·min-1；检测波长为261 nm；进样量为10 μL。结果马来酸氯苯那敏在7.928～31.712 mg·L-1的范围与峰面积呈良好线性关系，r=0.999 92。样品中马来酸氯苯那敏的平均回收率为99.8%(n=9,RSD=0.83%)。用该文建立的方法对5个批次小儿氨酚黄那敏颗粒中的马来酸氯苯那敏含量及均匀度进行了测定，其含量均为标示量的90.0%～110.0%,均匀度符合规定。结论该方法准确可靠，可作为小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量及均匀度的测定方法。

氯苯那敏/化学;醋氨酚;色谱法,高压液相

小儿氨酚黄那敏颗粒为国家药品标准化药地标升国标第3册收载的品种，该药为感冒用药类非处方药药品,剂型为可溶性颗粒剂。目前该药为多数省份纳入基本药物管理的非基本药物。其主要含有对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和人工牛黄，用于缓解儿童普通感冒及流行性感冒所引起的发热、头痛、打喷嚏、流鼻涕、咽痛等症状[1-4]。由于临床疗效确切，副作用小，市场需求量较大，现国内有近三百多家药企生产，其执行标准[5]为国家药品标准WS-10001-(HD-0214)-2002(试行)。该标准只规定了对乙酰氨基酚的含量测定，无抗组胺药马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度测定法。临床上马来酸氯苯那敏的副作用主要为困倦、思睡、疲劳等，过量时可出现先中枢抑制，后中枢兴奋症状，甚至可导致抽搐、惊厥等表现。儿童易发生焦虑、入睡困难和神经过敏[6]。由于该药品处方中所含的马来酸氯苯那敏较少，在生产制备过程中可能导致混合不均匀，另该标准不完善，不能有效控制产品质量，而产生一定的安全性问题。通过对小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量及均匀度测定方法的研究,完善其质量标准，有效控制生产工艺过程中混合均匀性，保证该产品的安全有效。

1　仪器与试药

1.1仪器UV-2450岛津紫外分光光度；LC-20A岛津高效液相色谱仪，UV检测器，N2000色谱工作站；METTLER TOLEDO电子天平。

1.2试药马来酸氯苯那敏对照品(中国食品药品检定研究院,批号：100047-201403)；小儿氨酚黄那敏颗粒(共5批，批号：141001、141002、141003、K1403211、K1403212)；辅料：蔗糖(由湖南湘易康制药提供，批号：140902)乙醇(由湖南尔康制药有限公司提供，批号：140805)；甲醇、辛烷磺酸钠为色谱纯；枸橼酸、三乙胺为分析纯；水为重蒸馏水。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱；流动相：甲醇-0.01 mol·L-1辛烷磺酸钠溶液(三乙胺调节pH值至3.0)；流速：1 mL·min-1；柱温：25 ℃；检测波长为261 nm；进样量为10 μL。马来酸氯苯那敏色谱峰与对乙酰氨基酚色谱峰分离度应>2.0；理论板数按马来酸氯苯那敏对照品色谱峰计算不低于2 000。检则波长确定见图1。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液精密称取马来酸氯苯那敏对照品20 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀,作为对照品溶液(0.019 96 g·L-1)。

注： 取马来酸氯苯那敏对照品，加水制成每1 mL含0.2 mg的溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录IV A)在200～400 nm的波长范围内进行扫描。

图1紫外检测波长确定图

2.2.2供试品溶液取本品，精密称取适量(约相当于马来酸氯苯那敏0.5 mg)，置25 mL量瓶中，加适量水置水浴加热使溶解，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液取其他原辅料，按处方制备不含马来酸氯苯那敏的阴性样品，依“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液，作专属性考察。

2.3测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。理论板数按马来酸氯苯那敏色谱峰计算应不低于2 000，马来酸氯苯那敏峰保留时间为(7.8±1.0) min,其色谱峰与对乙酰氨基酚色谱峰的分离度应>2.0。见图2。

2.4方法学考察

2.4.1专属性考察取对照品溶液、供试品溶液以及阴性对照溶液，按测定法进样测定，色谱图见图2。在阴性对照溶液色谱图中与马来酸氯苯那敏对照品相应保留时间上无明显色谱峰。

2.4.2线性关系考察取马来酸氯苯那敏对照品溶液，用水稀释制成浓度分别为7.928、11.892、15.856、19.820、23.784、27.748、31.712 mg·L-1的溶液。分别精密吸取上述7种溶液各10 μL注入液相色谱仪，以浓度为X轴，峰面积为Y轴，进行线性回归。得马来酸氯苯那敏回归方程：Y=7.007 816×104X+5.044 197×104(r=0.999 92)。结果表明马来酸氯苯那敏进样浓度在7.928～31.712 mg·L-1的范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.4.3精密度试验取“2.4.2”项下的低、中、高浓度的溶液，按照“2.1”项下的色谱条件,连续进样5次，进样量为10 μL,以峰面积计算相对标准差(RSD)，考察本系统的精密度，结果见表1，试验结果表明仪器的精密度良好。

A.对照品溶液

B.供试品溶液

C.阴性对照溶液

项目线性方程RSD/%低浓度1.255×106±4.433×1030.35中浓度1.470×106±5.503×1030.37高浓度1.762×106±1.094×1040.62

2.4.4重复性试验取小儿氨酚黄那敏颗粒(批号：141001)，按照“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件，进样分析，计算出该颗粒中马来酸氯苯那敏含量平均值为98.8%(相对标示量)，RSD为0.78%，结果见表2。试验结果说明该方法重复性良好。

表2　重复性试验结果

2.4.5稳定性试验取同一份供试品溶液和对照溶液，室温自然光条件下放置，在0～12 h内，按照“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、6、8、12 h进样测定，记录色谱图。以峰面积考察其日内稳定性。计算其峰面积平均值为1 375 319，RSD为0.99%,结果表明，供试品溶液日内稳定性良好。

2.4.6加样回收率试验取同批均质样品(批号：141001)，照“2.3”项下测定本品的含量。再取上述均质样品适量，共9份，精密称定，分别置25 mL量瓶中，分别精密加入浓度为0.052 2 g·L-1的马来酸氯苯那敏对照品溶液3、5、7 mL，各3份，照“2.1”项下色谱条件进样分析，结果见表3。结果表明，本法测定马来酸氯苯那敏含量回收率较高，方法准确度较高。

表3　回收率试验结果

2.5样品测定取小儿氨酚黄那敏颗粒样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品液，照“2.1”项下的色谱条件检测，结果见表4。

表4　样品测定结果

3　讨论

3.1流动相选择小儿氨酚黄那敏颗粒现行标准中只有马来酸氯苯那敏的鉴别试验，无法对其进行定量控制。《美国药典》收载的马来酸氯苯那敏[7]含量测定液相条件中流动相为碱性流动相，pH值超过了12，因其有一定的腐蚀性，不适合普通的C18柱。参考《中国药典》2010年版二部萘敏维滴眼液药品标准[8]中马来酸氯苯那敏含量测定色谱条件，但其使用的色谱柱为C8柱，在一般企业较少配备，以C18柱较常用。因此选择通用的C18柱进行液相条件摸索[9-11]。采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱，分别采用甲醇-pH 3.3的0.1 mol·L-1磷酸二氢钠(30∶70)、甲醇-pH 3.3磷酸二氢钾(15∶85)、甲醇-pH 3.0辛烷磺酸钠溶液(取辛烷磺酸钠2.16 g，枸橼酸8.3 g，加水溶解并稀释至1 000 mL，用三乙胺调节pH值至3.0)(65∶35)3种流动相；流速：1.0 mL·min-1；柱温：室温；检测波长：215或261 nm；灵敏度：0.001AUFS，分别进样检测。结果在前两种流动相下阴性样品在此条件下有干扰，主峰保留时间太短，或出现双峰，分离度不好，拖尾严重；后一种在261 nm条件下主峰保留时间较为靠前，阴性样品有干扰。因此，应调整流动相比例，使阴性样品不干扰，主峰保留时间适中。

3.2调整流动相采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-pH 3.0辛烷磺酸钠溶液(取辛烷磺酸钠2.16 g，枸橼酸8.3 g，加水溶解并稀释至1 000 mL，用三乙胺调节pH值至3.0)(63∶37),在其它条件相同的情况下,分别测定供试品溶液、对照品溶液和阴性溶液。试验结果表明其阴性不干扰，主峰保留时间良好，峰形较好，且不拖尾。

3.3检测波长的确定取对照品溶液进行全波长扫描，在215 nm和261 nm处有较高吸光度，本法选取261 nm作为检测波长，一方面是参照美国药典相关测定，另一方面是因为在此处测定时阴性无干扰。而在215 nm处测定时，阴性样品对主峰有一定的干扰。

3.4其他马来酸氯苯那敏系抗组胺药，对感冒症状的改善起着非常重要的作用，但也会出现头晕、嗜睡等不良反应。小儿氨酚黄那敏颗粒是由乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏等组成的复方制剂，是临床常用的小儿感冒药。考虑到小儿临床用药的安全性问题，本试验对该药品中的马来酸氯苯那敏含量和均匀度进行控制，既有利于企业在投料方面的准确性控制，又有利于保证产品质量。本试验建立的HPLC法对5批样品进行了测定，结果显示有些批次的马来酸氯苯那敏含量偏低，均匀度值偏大，这可能与原质量标准中对此成分无含量控制有关。本检测方法的建立，有利于提高和控制该产品的质量。

[1]马艳辉.小儿氨酚黄那敏颗粒治疗儿童上呼吸道感染疗效观察[J].中国社区医师,2012,28(28):12.

[2]高雪红.布洛芬混悬液与小儿氨酚黄那敏颗粒治疗小儿上呼吸道感染发热临床效果比较分析[J].当代医学,2014,20(5):139-140.

[3]徐丙云.氨酚黄那敏颗粒联合咽扁颗粒治疗小儿上呼吸道感染疗效观察[J].医学信息,2015,28(20):304-305.

[4]汪建伟,梁红萍.含体外培育牛黄的复方感冒药物治疗上呼吸道感染效果观察[J].健康必读杂志,2013(8):439.

[5]国家药典委员会.国家药品标准(化学药品地方标准上升国家标准)[S].第30册.WS-10001-(HD-0214)-2002.

[6]陈新谦,金有豫,汤光.新编药物学[M].17版.北京:人民卫生出版社,2011:550.

[7]The United States Pharmacopeial Convention.USP34-NF29[S].2011:1910.

[8]国家药典委员会.中国药典(二部)[S].北京：中国医药科技出版社,2010:872-873.

[9]王卓艺,付俊美,奚俊杰.等.小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏的含量测定及制剂检查[J].黑龙江医药,2013,26(6):976-978.

[10] 郝晶晶,李伟,李海亮,等.小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚及马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度考察[J].中国药师,2013,16(1): 37-39.

[11] 侯均.高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量[J].中国药业,2013,23(13):30-31.

Determination of the content and uniformity of dosage units in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules by HPLC

CAO Yuming

(AnhuiNHUPharmaceuticalCo.,Ltd,Xuancheng,Anhui242000,China)

ObjectiveTo develop a method for the chlorphenamine maleate detection in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules.MethodsHPLC was adopted for the quantitative and uniformity determination of chlorphenamine maleate.A shimpack VP-ODS column(150 mm × 4.6 mm,5 μm) was used as the stationary phase,with a mobile phase consisting of methanol and 0.01 mol·L-1sodium octane sulfonate solution (adjusted to pH3.0 with triethylamine,63∶37).The flow rate was 1 mL·min-1,the detection wavelength was 261nm and the injection volume was 10 μL.ResultsConsiderable linear relationship was observed when chlorphenamine maleate ranged from 7.928 to 31.712 mg·L-1(r=0.999 92).The average recovery of chlorphenamine maleate was 99.8%(n=9,RSD=0.83%).Five batches of Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules were analyzed under the established method with results ranging from 90.0% to 110.0%.ConclusionsThe developed method is accurate and reliable,which could be used for the quality control of chlorphenamine maleate in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules.

Chlorpheniramine/chemistry;Acetaminophen;Chromatography,high pessure liquid

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.018

2016-03-25，

2016-04-29)