异常黑胆质成熟剂抗抑郁作用研究△

麦尔耶姆古丽·麦麦提，麦合苏木·艾克木，麦麦提江·阿依丁， 麦提喀斯木·尼扎木丁，阿不都热依木·玉苏甫

(新疆医科大学 维吾尔医学院，新疆 乌鲁木齐 830011)

·专题·

异常黑胆质成熟剂抗抑郁作用研究△

麦尔耶姆古丽·麦麦提，麦合苏木·艾克木，麦麦提江·阿依丁， 麦提喀斯木·尼扎木丁，阿不都热依木·玉苏甫*

(新疆医科大学 维吾尔医学院，新疆 乌鲁木齐 830011)

目的：观察异常黑胆质成熟剂(ASMq)对不同抑郁动物模型行为学的影响，探讨ASMq的抗抑郁作用。方法：采用小鼠强迫游泳、悬尾应激、利血平拮抗实验以及大鼠慢性应激抑郁模型实验，分别用ASMq低、中、高剂量(小鼠2.0、4.0、8.0 g·kg-1；大鼠1.5、3.0、6.0 g·kg-1)对上述模型进行全程干预，观察ASMq的抗抑郁作用效果。结果：ASMq能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间(P<0.01)、悬尾不动时间(P<0.01)；具有拮抗利血平所致的体温下降(P<0.01)、眼睑下垂(P<0.01)及运动不能(P<0.01)作用，并呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)；与正常组相比，慢性应激抑郁模型组大鼠糖水摄入量减少,敞箱实验中水平运动、站立次数明显下降，处于抑郁状态。ASMq干预组能够增加糖水摄入量、水平运动及站立次数(P<0.01)。结论：ASMq能够改善不同抑郁动物模型的行为学缺损，具有明显的抗抑郁作用。

异常黑胆质成熟剂；不同抑郁动物模型；抗抑郁作用

抑郁症(Depression)是以情绪低落、食欲减退、嗜睡、思维迟钝、语言行为减少为基本特征的一种慢性精神紊乱性疾病，世界范围1.2亿人患有抑郁症，世界卫生组织预测，在2030年，抑郁症将成为世界疾病负担的首位[1]。中国有病例记录抑郁症患者已超过3000万，从未就医率达到62.9%，15%死于自杀[2]。维吾尔医学(维医)认为，抑郁症属于“麻利胡利亚”范畴，长期大量服用干寒型的饮食、药物，长期处于情绪低落、忧伤、悲伤、压抑等情志失常状态，长期过度从事脑力和体力劳动，使体内正常体液(黑胆质、血液质、黏液质、胆液质)“燃烧”生成异常黑胆质(烧焦黑胆质、烧焦血液质、烧焦黏液质、烧焦胆液质)，其份量重、质地稠，易在神经等组织中形成阻塞和沉淀，引起焦虑症、抑郁症和衰老等疾病。课题组前期研究中发现，在抑郁症的维医异常体液分型中异常黑胆质型最为常见，异常黑胆质证与抑郁症的发生、发展密切相关[3]。异常黑胆质成熟剂(ASMq)是异常黑胆质证方药，是预防和治疗异常黑胆质型疾病的良药[4-6]。因此，本实验通过小鼠强迫游泳、悬尾应激、利血平拮抗实验以及大鼠慢性应激抑郁模型实验，分别给予不同剂量的ASMq进行全程干预，观察其对不同抑郁动物模型行为学影响，探讨ASMq的抗抑郁作用，从而为其应用和开发提供参考。

1 材料与仪器

1.1 药物

异常黑胆质成熟剂(新疆奇康哈博维药有限公司，批号：140922)，盐酸氟西汀胶囊(礼来苏州制药有限公司，批号：4501A，规格：20 mg)，利血平注射液(天津金耀药业有限公司，批号：1501091，规格：1 mL·mg-1)，蒸馏水(新疆医科大学实验动物中心)。

1.2 实验动物

ICR小鼠，体质量18～20 g；SD大鼠，体质量240～260 g；均清洁级，雄性，由新疆医科大学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK(新)2011-0001。

1.3 仪器

电子体温计(DT001)，滤纸(直径7.5 cm)，电子秤(XS1003S)，秒表，玻璃缸，悬尾装置(自制)，数码摄像机，足底电击箱(自制)，止血钳，水桶，大鼠行为观察敞箱(自制)。

2 方法

2.1 ASMq对小鼠抑郁动物模型行为学的影响

2.1.1 分组及给药 ICR小鼠随机分为5组，每组10只。分别为空白对照组，ASMq低剂量(2.0 g·kg-1)、中剂量(4.0 g·kg-1)、高剂量(8.0 g·kg-1)组和阳性对照盐酸氟西汀组(5 mg·kg-1)，各组均按0.2 mL·(10 g)-1体重给药，每日1次，连续给药14 d，因受试药物均用蒸馏水溶解，因此空白对照组给予等体积的蒸馏水。

2.1.2 小鼠悬尾实验 第14天，于末次给药后1 h进行实验。将小鼠尾端(在尾尖2 cm处)用胶布固定使其呈倒悬状态，头部离实验台约15 cm。小鼠悬挂6 min，适应2 min，记录后4 min内累计不动时间。

2.1.3 小鼠强迫游泳实验 第16天，于次日末次给药后1 h进行实验。将小鼠单个放入高20 cm、直径18 cm、水深10 cm、水温(23±2)℃的水缸中，观察6 min，适应2 min，记录后4 min内小鼠累计不动时间。每只动物更换1次水，全过程用摄像机记录。

2.1.4 利血平拮抗实验 该实验中增加设置正常对照组小鼠10只；给予等体积蒸馏水。各组动物次日末次给药前1 h用电子体温计插入已固定的小鼠肛门内约1.5～2.0 cm处测定肛温，作为正常体温值。除正常对照组外，其他各组测体温后腹腔注射利血平注射液4 mg·kg-1。观察指标：①观察1 h后15 s内小鼠眼睑下垂的情况。记录小鼠不能睁眼的动物只数，计算对抗百分率。对抗百分率=(1-睁眼不能只数/动物总数)×100%。②运动不能的观测：1 h后将小鼠放入直径为7.5 cm的圆圈内观察15 s，记录小鼠没有出圈的只数，计算对抗百分率。对抗百分率=(1-运动不能只数/动物总数)×100%。③体温下降的观测：给药4 h后再次测定各组动物的肛温，记录前后体温变化的差异[7]。

2.2 ASMq对大鼠慢性应激抑郁模型行为学的影响

2.2.1 分组及给药 将84只大鼠24 h禁水不禁食后给予1%蔗糖水，测定1 h内的消耗量。根据蔗糖水消耗量随机分成6个组，每组14只，即正常对照组、模型组、阳性盐酸氟西汀组(3.5 mg·kg-1)，ASMq高、中、低(6.0、3.0、1.5 g·kg-1)剂量组。造模同时给药，各组每天灌胃1次，连续给药24 d。各组均按1.0 mL·(100 g)-1体重给药，每周称一次体重。

2.2.2 动物模型的建立 正常对照组每笼14只饲养，正常饮食饮水，不给任何刺激。其他5个组每笼14只饲养，给予24 d的不可预见性温和应激，包括：①电击足底：36 V电压每隔1 min电击1次，1次持续10 s，共20次。②冰水游泳：将动物放入盛有4 ℃冷水(冰水混合)的桶中，水深15 cm，大鼠的足尖刚能触及桶底，5 min后将动物取出。③热水游泳：将动物放入盛有45 ℃热水(热水混合)的桶中，水深15 cm，大鼠的足尖刚能触及桶底，5 min后将动物取出。④夹尾：将大鼠放入固定笼中，露出尾巴，用止血钳夹住距尾根部1 cm处(用力不要过大，使大鼠发出哀号即可)，持续1 min。⑤摇晃：将大鼠放入纸箱子中摇晃，频率160次·min-1，持续3 min。⑥昼夜颠倒：早上8点，将大鼠放入黑暗箱中，晚上8点打开灯照明，至次日早8点。⑦禁食：连续24 h断料。⑧禁水：连续24 h断水。每组每天给予随机一种刺激，平均每种刺激给予3次[8]。

2.2.3 观察指标 ①蔗糖水消耗量：实验前48 h训练大鼠摄入1%蔗糖水，然后单独饲养禁水24 h，测每只大鼠2 h内糖水消耗量。实验最后一天，单养再次测量每只大鼠2 h内糖水摄入量。②敞箱实验：敞箱高40 cm，长和宽均为80 cm，无盖，周壁和箱底均为黑色，底面划分为面积相等的25块方格。以动物穿越方格数作为水平活动得分，以直立次数为垂直活动得分(两前肢离地1 cm以上)。每只动物进行1次测定，每次3 min。

2.3 统计学处理

3 结果

3.1 对小鼠不动时间的影响

由表1结果可知，与空白对照组比较，阳性对照组，ASMq高、中剂量组均可缩短小鼠悬尾、强迫游泳不动时间，其差异具有统计学意义(P<0.01)，表明ASMq具有抗抑郁作用。

表1 ASMq对小鼠不动时间的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.01。

3.2对利血平所致小鼠体温下降、眼睑下垂和运动不能的影响

由表2结果可见，与正常对照组比较，抑郁症模型组体温下降、眼睑下垂、运动不能等症状明显，其差异具有统计学意义(P<0.01，P<0.05)，说明小鼠处于抑郁状态。与抑郁症模型组比较，ASMq中、高剂量组拮抗利血平所致的体温下降、眼睑下垂及运动不能作用，其差异具有统计学意义(P<0.01，P<0.05)，但ASMq低剂量组作用不明显。

表2 ASMq对利血平所致小鼠体温下降、眼睑下垂和运动不能的影响

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；与正常对照组比较，

△P<0.01；下同。

3.3 对大鼠慢性应激抑郁模型蔗糖水消耗量、敞箱实验的影响

表3结果表明，与正常对照组比较，模型组大鼠蔗糖水的偏嗜度明显下降，差异具有统计学意义(P<0.01)，与模型组比较，ASMq各剂量均能明显增加大鼠蔗糖水的偏嗜度(P<0.05)。与正常对照组比较，模型组大鼠水平运动、站立次数明显减少(P<0.01)；与模型组比较，ASMq高、中剂量组可显著增加大鼠水平运动、站立次数(P<0.05)，但ASMq低剂量组作用不明显。

表3 ASMq对慢性应激抑郁模型蔗糖水消耗量、敞箱实验的影响

4 讨论

维吾尔医学体液论认为，体液是于肝脏中形成，能够被机体所转化，为生命赋予力量，并适于人体本性的复杂物质的总称。体液不断生成，又不断被利用，是人类生命活动的物质基础。机体健康与否与体液的正常及平衡密切相关。维吾尔医学正常体液分为胆液质、血液质、黏液质和黑胆质4种体液。黑胆质体液能保持器官形状与特质贮存各种营养物质，参与感觉、思维、记忆等活动。4种体液在“强热”作用下“燃烧”体液中易挥发部分蒸发后变稠，丧失其正常功能从而形成异常黑胆质体液。异常黑胆质体液阻塞血管后，使各个器官尤其是支配器官“营养”不足，“力”被损耗，影响“脑”，可引起多语症、抑郁症、狂躁症、痉挛、中风等[9]。

强迫游泳实验(FST)和小鼠悬尾实验(TST)是抗抑郁药物评价模型的经典方法，是通过无法逃脱水环境而诱导产生抑郁绝望行为，属于行为绝望模型。这种不动状态反映了小鼠的一种绝望情绪及状态，故而被广泛用于抗抑郁药的筛选与评价[10-12]。本实验研究结果表明，ASMq能显著缩短小鼠悬尾和强迫游泳不动时间，表明其有较强的抗抑郁作用。

利血平是一种囊泡再摄取抑制剂，它不可逆地损伤囊泡膜，损毁囊泡膜功能，使递质留在囊泡外，易被单胺氧化酶降解，从而使神经递质耗竭，引起行为和生理上的变化及体温下降、眼睑下垂、运动不能、倦怠、精神抑郁等跟抑郁症病人类似的症状[13]。预先使用有效的抗抑郁药能够拮抗利血平所致的这些症状，因此此模型被广泛用于新的抗抑郁药的筛选。实验结果显示ASMq可有效拮抗利血平所导致的体温下降、眼睑下垂及运动不能，具有较强的抗抑郁作用。

引起慢性应激的多种因素是引起体液“燃烧”生成异常黑胆质的主要因素。异常黑胆质成熟剂使“成熟和堆积”的异常黑胆质体液排出体外，使气质复原，体液平衡[14]。大鼠在遭受慢性应激后的行为与抑郁症病人的临床表现具有相关性[15]。制造大鼠的抑郁状态，应用糖水消耗量作为测量模型动物快感缺乏的有效客观指标；应用敞箱实验中的水平运动得分、垂直运动得分作为测量动物模型运动、探索行为能力和兴趣的客观指标[16-17]；大鼠慢性应激抑郁模型中ASMq各剂量组与模型组比较，蔗糖水的偏嗜度、敞箱实验中水平运动得分、站立次数明显增多，并呈现出量效关系。结果表明ASMq具有较明显的抗抑郁作用。

综上所述，ASMq能够改善抑郁动物模型行为学缺损，具有显著的抗抑郁作用。ASMq抗抑郁作用机制有待进一步研究。

[1] Boldizsar C.Animal models of major depression and their clinical implications[J].PROG NEURO-PSYCHOPH，2016，64(4)：293-310.

[2] 哈力旦木·吾加不都，古孜力努尔·依马木，阿不都热衣木·肉孜，等.异常黑胆质成熟剂对抑郁症模型大鼠海马细胞外信号调控激酶信号转导通路的影响[J].新疆医科大学学报，2015，38(1)：26-29.

[3] 哈木拉提·吾甫尔，阿布都热依木·玉苏甫，努尔买买提·艾买提.维吾尔医异常黑胆质新论[M].乌鲁木齐：新疆人民出版社，2009：1-10.

[4] Wang H J，Gao W C，Ma S L，et al.Effect of Abnormal Savda Munziq on hypertrophic scar formation in a rabbit ear model[J].Chin J Integr Med，2015，21(7)：537-541

[5] Upue H，Chen Y，Kamilijiang M，et al.Identification of plasma protein markers common to patients with malignant tumour and Abnormal Savda in Uighur medicine：a prospective clinical study[J]，BMC Complement Altern Med，2015，15(5)：9.

[6] Amat N，Hoxur P，Min D，et al.Behavioral Neurochemical and Neuroendocrine Effects of Abnormal Savda Munziq in the Chronic Stress Mice[J].e CAM，2012(2)：1-8.

[7] 王景霞，张建军，白晓菊，等.贯郁胶囊治疗抑郁症的实验研究[J].中国实验方剂学杂志，2005，11(3)：46-48.

[8] 阿不力皮孜·哈力甫，古孜力努尔·依马木，阿不都热依木·玉苏甫，等.异黑成熟颗粒对抑郁症模型大鼠生物表征的影响[J].新疆医科大学学报，2011，34(12)：1305-1310.

[9] 哈木拉提·吾甫尔，阿布都热依木·玉苏甫.维医气质、体液论及其现代研究[M].乌鲁木齐：新疆科学技术出版社，2003：34-133.

[10] 钟晓明，毛庆秋，黄真，等.苏郁胶囊对小鼠抑郁症模型的影响[J].中国新药杂志，2006，15(15)：1247-1250.

[11] 王巍，王晓华.醒神开郁方抗抑郁作用的实验研究[J].中国药物应用与监测，2014，5(11)：279-282.

[12] 孙世光，刘健，鹿岩，等.昆明小鼠强迫游泳实验与悬尾实验抑郁模型相关性[J].中国药理学与毒理学杂志，2014，28(1)：107-112.

[13] Ren Y，Zhu C，Wu J，et al.Comparison between herbal medicine and fluoxetine for depression：A systematic review of randomized controlled trials[J].Complement Ther Med，2015，23(5)：674-684.

[14] 阿衣木姑·阿布拉，库木斯·巴雅合买提，巴哈古丽·阿尔斯郎，等.抑郁症患者的维医证候学特征及其临床流行病学调查[J].科技导报，2011，29(21)：60-63.

[15] 程工倪.KYY01治疗抑郁症的药效学研究和机理探讨[D].北京：北京中医药大学，2009.

[16] Arbabi L，Baharuldin MT，Moklas MA，et al.Antidepressant-like effects of omega-3 fatty acids in postpartum model of depression in rats[J].Behav Brain Res，2014，271(1)：65-71.

[17] Murray R，Boss-Williams K A，Weiss J M，et al..Effects of chronic mild stress on rats selectively bred for behavior related to bipolar disorder and depression[J].Physiol Behav，2013，119(2)：115-129.

ExperimentalStudyofAbnormalSavdaMunziqonAntidepressant-likeEffects

Maryamgul Muhammat，Mahsum Ekim，Mamatjan Ayidin，Matkasim Nizhamudin,Abdiryim Yusup*

(CollegeofTraditionalUyghurMedicine，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China)

Objective：To evaluate the behavioral changes in different animal models of depression for investigatethe antidepressant-like effects of Abnormal Savda Munziq (ASMq).Methods：Forced swimming test，tail suspension test，reserpine reversal test were applied in the study.ASMq low，medium，high doses were 2.0，4.0，8.0 g·kg-1for mice，respectively，and 1.5，3.0，6.0 g·kg-1for rat to explore the antidepressant-like effects of ASMq.Results：ASMq significantly shortened immobility time in forced swimming (P<0.01) and tail suspension tests (P<0.05)，and ameliorated reserpine-induced behavioral impairment (P<0.01)，ptosis (P<0.01) and reduced autonomic activity (P<0.01) in a dose-dependent manner.ASMq significantly increased sugar consumption，horizontal and vertical activities in open-field test in chronic mild unpredictable stress model of depression in rat.Conclusion：ASMq showed significant antidepressant-like effects by improve behavioral defects of animal model of depression.

Abnormal Savda Munziq；different animal models of depression；antidepressant-like effects

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.10.007

2016-01-15)

国家自然科学基金(81360667)

*

阿不都热依木·玉苏甫，博士，教授，博士生导师，研究方向：维医药作用机理研究及新药开发；E-mail：ayusup@126.com